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江苏省自然科学基金(BK2008011): 作品数：10 被引量：41H指数：5; 相关作者：焦新安潘志明耿士忠黄金林方强更多>>; 相关机构：扬州大学江苏省苏北人民医院江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>; 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

嵌合鞭毛蛋白fliC/esat的佐剂效应研究: 目的:为研究嵌合表达结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的鞭毛蛋白的免疫佐剂效应。方法:PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列,通过overlap PCR将ESAT-6编码序列...; 张辉文科黄金林胡茂志申峻松潘志明焦新安; 关键词：ESAT-6 鞭毛蛋白佐剂 TH1应答; 文献传递

我国地方品种鸡IL-17 cDNA的克隆、表达及鉴定被引量：1: 2011年; 目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性。方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17。将重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%。酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中。重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单克隆抗体的研制奠定了基础。; 赵雯潘志明耿士忠方强丛秋霞焦新安; 关键词：IL-17 克隆原核表达

鸡白痢沙门菌ipaJ基因的克隆与鉴定被引量：6: 2010年; 【目的】从鸡白痢沙门菌C79-13中克隆ipaJ基因,体外表达该蛋白后进行免疫原性分析。【方法】鸡白痢沙门菌C79-13与肠炎沙门菌50041进行抑制差减杂交后获得的片段PEA2、PE31和PE44与猪霍乱沙门菌C500疫苗株pSFD10质粒上ipaJ基因高度同源,拼接后获得了鸡白痢沙门菌完整的ipaJ基因序列。从鸡白痢沙门菌中克隆出ipaJ基因并将其构建到原核表达载体pET-30a(+)上,Western-blot检测体外表达蛋白的免疫原性,同时检测了该基因在鸡白痢沙门菌分离株中的分布。【结果】从鸡白痢沙门菌中克隆了大小为840bp的ipaJ基因序列,并获得了体外原核表达的大小为37kDa融合蛋白。该蛋白可与鸡白痢沙门菌阳性血清反应。PCR结果显示该基因广泛存在于鸡白痢沙门菌菌株中。【结论】本文首次报道和克隆了鸡白痢沙门菌ipaJ基因,并证明了IpaJ蛋白具有免疫原性。; 李求春徐耀辉黄金林焦新安; 关键词：鸡白痢沙门菌克隆

近期地方发生传染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征: IBDV属双RNA病毒科,基因组包括大(A)小(B)两个片段,有五种病毒蛋白:VP1、VP2、VP3、VP4和VP5。VP1由B片段编码,为病毒自身编码的依赖RNA的RNA聚合酶。其它四种病毒蛋白由A片段编码的多聚蛋白加...; 王永山欧阳伟潘群兴李银范红结张海彬王忠灿唐雨德; 文献传递

鼠伤寒沙门氏菌Χ4550 FlhD基因缺失株的构建被引量：7: 2010年; 为构建鼠伤寒沙门氏菌Χ4550FlhD基因缺失所致的鞭毛缺失株,采用PCR技术从减毒鼠伤寒沙门氏菌Χ4550基因组DNA中扩增出了鞭毛控制操纵子基因(FlhD)两侧翼基因片段,作为FlhD基因敲除所需的上臂和下臂的同源序列;以pKD4质粒为模板,扩增了卡那霉素(Km)抗性基因,并分别克隆入pMD18-T载体中,获得了重组质粒pMD-FlhD-U、pMD-FlhD-D和pMD-Km。将获得的上臂和下臂基因以及卡那霉素抗性基因通过拼接,构建重组质粒pMD-ΔFlhD/Km。将重组片段ΔFlhD/Km亚克隆入pG-MB151自杀质粒,并转化大肠杆菌χ7213,获得重组菌χ7213(pGMB151-ΔFlhD/Km)。将此细菌作为供体菌,与受体菌鼠伤寒沙门氏菌Χ4550进行固相杂交,经同源重组和抗生素筛选,获得鼠伤寒沙门氏菌Χ4550(ΔFlhD/Km)鞭毛缺失株。通过PCR扩增、动力学鉴定及电镜观察,显示鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因已被成功敲除。证实,运用同源重组的方法可成功地敲除鼠伤寒沙门氏菌Χ4550的FlhD基因,并导致其鞭毛缺失,为鼠伤寒沙门氏菌鞭毛的功能研究奠定基础。; 耿士忠潘志明方强胡娇陈祥焦新安; 关键词：同源重组

禽源大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测被引量：7: 2010年; 从我国部分地区病、死家禽中分离到大肠埃希菌403株。按照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对其中的344株分离株进行药敏纸片试验;根据GenBank上发表的序列,设计并合成了五对引物,对所有分离细菌进行质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的扩增:qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-ib-cr和qepA。1993年-1996年禽源大肠埃希菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%;2001年-2008年禽源大肠埃希菌分离株对1-3代7种喹诺酮类药物的耐药率均超过58%。在403株禽源大肠埃希菌中共检出3(0.7%)株qnrB阳性菌株,2(0.5%)株qnrS阳性菌株,5(1.2%)株aac(6′)-ib-cr阳性菌株以及5(1.2%)株qepA阳性菌株,未检测到qnrA阳性菌株。结果显示,近20年来,我国禽源大肠埃希菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,同时,质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因在禽源大肠埃希菌中呈不断上升的流行趋势。; 张维秋潘渭涓陈祥耿士忠黄金林潘志明焦新安; 关键词：大肠埃希菌质粒介导

副溶血性弧菌系统性毒力基因及七个毒力岛的分析被引量：3: 2010年; 为了解不同来源的副溶血性弧菌的毒力岛与毒力基因的分布及相互关系,对来自临床和食物源的180株副溶血性弧菌分离株,检测已知的毒力因子(tdh,trh)、系统性毒力基因(toxRS/new和orf8)和7个毒力岛(VPaI-1～VPaI-7)。结果表明,共检测到108株大流行株(食源株16株,人源株92株),有6株缺乏orf8。18株tdh阳性的菌株均含有全部或部分的VPaI-7基因。大流行株均含有VPaI-1,有107株大流行株含有VPaI-5。12株临床致病株均含有VPaI-7,但缺乏VPaI-1和VPaI-5。几乎所有大流行株含有全部或部分的VPaI-2和VPaI-3基因,多数致病株和非致病株还有部分的VPaI-2和VPaI-3基因;4株trh阳性的菌株均只有VPaI-3的VP1094阅读框。VPaI-4基因只存在于大流行株菌株中。所有菌株都有全部或部分的VPaI-6基因。食物链中出现大流行克隆是导致食物中毒的主要危害因子。; 王芳巢国祥黄金林焦新安; 关键词：副溶血性弧菌

副溶血性弧菌系统性毒力基因及七个毒力岛的分析: 为了解不同来源的副溶血性弧菌的毒力岛与毒力基因的分布及相互关系,对来自临床和食物源的180株副溶血性弧菌分离株,检测已知的毒力因子（tdh,trh）、系统性毒力基因（toxRS/new和orf8）和7个毒力岛（VPaI-...; 王芳巢国祥黄金林焦新安; 关键词：副溶血性弧菌; 文献传递

Tn5转座子介导副溶血弧菌胞外蛋白酶缺陷体的构建及其胞外蛋白的细胞毒性研究: ＜正＞目的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）是一种引起人类和海洋动物细菌性疾病的重要病原菌。其胞外蛋白中耐热性直接溶血素（TDH）和耐热性直接溶血素相关溶血素（TRH）一直被认为是主要致病因子。...; 杨振泉耿士忠焦新安; 关键词：弧菌属胞外蛋白酶细胞毒性生物学特征; 文献传递

重组沙门菌表达结核分枝杆菌ESAT-6及其特异性免疫应答分析被引量：1: 2009年; 目的分析重组沙门菌表达的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）分泌性蛋白ESAT-6诱导的特异性免疫应答。方法将ESAT-6蛋白编码基因导入原核表达载体pYA3333中，构建重组质粒pYA33-esat。通过电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门菌X4550，获得重组菌X4550（33-esat）。以每只10。CFU剂量的重组菌滴鼻免疫C57BL／6小鼠，间隔18d，在第2次免疫后10d取免疫小鼠脾脏、肺脏、肠系膜淋巴结（mesenteric lymph node，MLN）及派伊尔淋巴集结（Peyer‘s patch，PP）细胞，以ESAT-6多肽作为刺激原，检测特异性的IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞。同时，运用CFSE方法检测了体内抗原特异性CTL效应。结果经沙门菌表达并运送的Mtb抗原ESAT-6能诱导特异性的免疫应答。在肺脏及PP细胞中，检测到较高水平的IFN一1和IL_4分泌细胞，免疫应答以Th1型为主。而在脾脏和MLN中，免疫应答呈现Th1／Th2混合应答。此外，体内CTL试验表明，重组菌能够诱导抗原特异的CTL效应，且特异性杀伤率为69．9％。结论以滴鼻方式接种重组沙门菌，不仅能够诱导ESAT-6蛋白特异性的细胞免疫应答，还能激发特异的CTL效应，为结核病的防控提供了新的认识。; 张辉刘柳耿士忠胡茂志文科潘志明焦新安; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 滴鼻免疫细胞免疫应答

江苏省自然科学基金(BK2008011)

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