国家自然科学基金(30571819)
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
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- Atrogin-1基因沉默对肌细胞营养不良保护作用的实验研究
- 2009年
- 目的采用肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的肌细胞营养不良模型和核糖核酸干扰技术，研究Atrogin-1基因沉默对肌细胞营养不良的保护作用。方法设计5对Atrogin-1-siRNA靶序列及对照序列，逐步克隆到慢病毒核心载体FG12中，重组FG12与三种包装质粒（pRSVREV、pMDLg／pRRE、pHCMV-G）共同转染293T细胞以包装病毒，感染C2C12细胞，并将其分化成肌管，用TNF-α进行刺激，实时荧光定量PCR法、Western blot法检测肌管中Atrogin-1表达，观察比较各组肌管的形态学变化。结果重组载体中含大小、序列正确的片段，能成功感染C2C12细胞，TNF-α能引起对照组肌管Atrogin-1表达上调、肌管萎缩，但RNA干扰组肌管无此现象。结论沉默Atrogin-1基因可避免产生TNF-α诱导的肌细胞营养不良，Atrogin-1基因可作为肿瘤恶液质的理想治疗靶点。
- 袁磊吴国豪张波
- 关键词：RNA干扰基因沉默
- ATP-泛素-蛋白酶体途径在癌性恶液质肌萎缩中作用的研究进展被引量：4
- 2008年
- 袁磊吴国豪
- 关键词：癌性恶液质肌萎缩恶性肿瘤患者器官功能受损癌症患者蛋白质分解
- 肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶在癌性恶液质小鼠骨骼肌中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的检测肌肉细胞特异性泛素蛋白连接酶（E3）在痛性恶液质（CC）小鼠骨骼肌中的表达，探讨其在CC肌萎缩中作用机制。方法将16只BALB／C小鼠随机分荷瘤组和对照组，用鼠结肠癌26细胞株（C26）接种小鼠，建立CC模型。监测小鼠营养状况、腓肠肌重量，实时定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot和免疫组织化学法测定Atrogin—1、MuRF1基因在腓肠肌中的表达。结果荷瘤组小鼠存在明显恶液质状态；荷瘤组去瘤体质量和腓肠肌重量明显下降，分别为（19．85±0．65）g比（24．05±1．04）g、（108．80±14．82）mg比（125．00±10．00）mg（P〈0．05）。荷瘤组腓肠肌中Atrogin-1和MuRF1在mRNA水平表达分别达对照组的2^4.83和2^9.02倍，其蛋白水平表达也升高。结论E3表达上调在癌性恶液质肌萎缩发生机制中起重要作用。
- 袁磊吴国豪张波
- 关键词：癌性恶液质ATROGIN-1
- Atrogin-1基因过表达对肌肉细胞营养状况的影响
- 2008年
- 目的:构建含Atrogin-1基因的慢病毒载体,并研究Atrogin-1过表达对骨骼肌细胞营养状况的影响。方法:PCR合成两端含酶切位点的Atrogin-1cDNA全长,酶切后多次重组使之克隆到慢病毒核心载体FG12中;经限制性酶切和测序鉴定重组载体后,用它感染小鼠成肌细胞,构建稳定株,将细胞进行分化,以Western印迹法检测Atrogin-1蛋白表达,并观察细胞形态学的变化。结果:Atrogin-1慢病毒载体中含有大小、序列正确的片段,感染该病毒的小鼠成肌细胞裂解液中能检测到Atrogin-1蛋白的高表达,且显示细胞明显萎缩。结论:成功构建了含Atrogin-1基因的慢病毒载体。该载体可使小鼠成肌细胞过表达Atrogin-1蛋白,引起肌肉细胞萎缩。
- 袁磊吴国豪张波
- 关键词：ATROGIN-1慢病毒载体肌营养不良
- 小鼠Atrogin-1基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
- 2009年
- 目的:构建小鼠Atrogin-1基因真核表达载体,研究其功能,并探讨其在癌性恶液质骨骼肌萎缩中的作用机制。方法:提取小鼠C2C12细胞RNA,反转成cDNA,PCR合成含有酶切位点的Atrogin-1 cDNA全长,酶切后连接到真核表达载体pcDNA3.1,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-Atrogin-1,经鉴定及测序证实cDNA片段大小和序列正确,然后用其转染293T细胞,Western blot法检测Atrogin-1蛋白的表达。结果:pcDNA3.1-Atrogin-1含大小、序列正确的Atrogin-1cDNA片段,转染pcDNA3.1-Atrogin-1的293T细胞裂解液中能检测到Atrogin-1蛋白高表达。结论:成功构建了Atrogin-1基因真核表达载体pcDNA3.1-Atrogin-1,并在真核细胞中表达了目的蛋白,其是研究癌性恶液质的重要工具。
- 袁磊吴国豪张波
- 关键词：ATROGIN-1真核表达载体癌性恶液质
