国家自然科学基金(81272551) 作品数:14 被引量:17 H指数:2 相关作者: 郭潮潭 沃恩康 杨新燕 陈帅帅 王怡婷 更多>> 相关机构: 浙江省医学科学院 浙江省中医院 浙江中医药大学附属第三医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省科技计划项目 浙江省医药卫生科学研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 更多>>
甲型流感病毒M2蛋白胞外域单克隆抗体的制备及其生物特性 被引量:2 2018年 目的 制备甲型流感病毒高度保守的M2蛋白胞外域(M2e)的单克隆抗体,应用于广谱检测甲型流感病毒。方法 将编码鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白的FljB基因与编码甲型流感病毒M2e的基因进行融合表达,然后纯化蛋白,利用杂交瘤技术制备M2e鼠单克隆抗体。结果 成功表达并纯化了融合蛋白Flagellin-3M2e。制备的2株抗M2e的单克隆抗体3G3和3G4,抗体效价均为105,均能与流感病毒株PR8、Memphis、Aichi结合。3G3可以对MDCK细胞中甲型流感病毒的M2蛋白进行实时定位。结论 成功制备了M2e单克隆抗体,初步具备了临床检测甲型流感的应用基础。 刘亚辉 沃恩康 杨新燕 徐琦 杨灿 邓冠聪 郭潮潭关键词:流感病毒A型 单克隆抗体 鞭毛蛋白 核输出蛋白在流感病毒感染与传播中的作用 被引量:1 2017年 核输出蛋白(NEP)是一个由甲型流感病毒第8段基因编码的约为14 k D的蛋白。NEP最初被认为参与病毒核糖核蛋白复合体的出核。相对于流感病毒的其他几个蛋白,关于NEP的研究很少被报道。近年来,随着蛋白立体结构的确定、研究的不断深入,NEP在流感病毒活动中很多意想不到的作用不断被发现。这些研究显示NEP参与病毒的转录和复制,促进H5N1禽流感病毒在哺乳动物体内的适应以及参与病毒的出芽。本文系统总结了NEP的功能,包括参与病毒核糖核蛋白复合体的出核的过程、调节病毒聚合酶的活性以及帮助H5N1禽流感病毒实现跨种间传播等,为进一步研究NEP奠定基础。 方迪 郭潮潭关键词:流感病毒 蛋白结构 生物特性 H5N6人禽流感病毒分离株序列分析及其生物学特日期究 被引量:1 2017年 目的分析研究H5N6人禽流感病毒基因组序列特征,明确该病毒的分子进化及生物学特性。方法从GenBank和GISAI中获取人H5N6分离株全序列,通过软件BioEdit7.0.9对各节段基因与其他相关毒株序列进行比对。用软件Mega5.0,Neighbor—Joining法绘制血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进化树,并全面分析病毒株的基因组序列特征、病毒进化及来源、传染性、致病性和药物敏感等。结果H5N6病毒的基因组完全属于禽源特征,根据病毒进化及来源可分为两大类。HA基因都属于H5亚型的2.3.4.4进化支,NA基因都来源于H6N6亚型毒株,属于欧亚谱系。其余6段内部基因分别来自于H9N2亚型或H5亚型2.3.2.1进化支毒株。该病毒尚不能在人与人之间有效传播,呈现高致病性病毒特征,对奥斯他韦敏感,但部分毒株对金刚烷胺类药物耐药。结论H5N6人禽流感分离株并不属于同一毒株,是由H5N1、H5N2、H6N6、H9N2等亚型毒株通过不同组合而重配产生,需加强对这类病毒及其宿主的监控。 沃恩康 王怡婷 杨新燕 张儒轩 方迪 刘亚辉 郭潮潭关键词:流感病毒A型 基因组 分子特性 燕窝对再生障碍性贫血小鼠血常规及继发流感病毒感染的影响 被引量:3 2017年 目的探讨食用燕窝对再生障碍性贫血(再障)继发流感病毒感染的保护作用。方法食用燕窝的药理测定。体外实验采用血液凝集抑制试验和细胞感染中和试验,体内实验采用再障小鼠动物模型和病毒感染模型,观察燕窝酶解物对再障小鼠血常规的影响,判断食用燕窝的生物药效。结果经胰蛋白酶水解后的燕窝酶解物N1-Pan和N2-Pan的血凝抑制活性分别为4μg/mL和125μg/mL,具有较强的抑制血凝的活性。N1-Pan对流感病毒有很强的抑制作用(IC50为40μg/mL)。小鼠喂养实验发现,无病毒燕窝喂养组第20天血常规比第10天有明显改善(提升10%-20%),组内比较差异有统计学意义(确切概率法,P〈0.05);燕窝喂养的接种流感病毒再障小鼠较未喂养燕窝的再障小鼠外周血常规和体重有明显改善(确切概率法,P〈0.05),存活率也显著高于后者(4/8:7/8,确切概率法,P〈0.05)。结论N1-Pan能明显改善再障小鼠的外周血常规和体重,提高流感病毒感染再障小鼠的存活率。 郭潮潭 曹毅 胡致平 沃恩康 陈帅帅 尤金彪 张儒轩关键词:贫血 流感病毒 H7N9亚型人禽流感病毒全基因组分析及其生物特性研究 被引量:1 2013年 目的分析研究H7N9亚型人禽流感病毒基因组序列特征,明确该病毒的分子进化及生物学特性。方法GISAI和GenBank中获取H7N9基因组全序列,对各段基因与已知序列进行分析比较,绘制进化树,并全面分析和预测病毒株的基因组特征、传染性、致病性、药物敏感性等。结果町N9病毒的基因组完全属于禽源,HA和NA基因属于欧亚谱系,其余6段基因与瑚N2亚型病毒同源性高达99%。该病毒尚不能在人与人之间有效传播,不呈现典型高致病性病毒特征,病毒对金刚烷胺和金刚乙胺耐药,而对奥司他韦敏感。结论该病毒是H7亚型、N9亚型和H9N2亚型禽流感病毒三者的重配体,需警惕该毒株的进一步变异。 沃恩康 王怡婷 陈帅帅 吴海波 尤金彪 王巧刚 郭潮潭关键词:禽流感 基因组 分子特性 甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体制备及其初步应用 被引量:1 2017年 目的 制备甲型流感病毒核蛋白(NP)单克隆抗体,为甲型流感病毒诊断试剂盒以及相关研究提供材料.方法 大肠埃希菌BL21 (DE3)表达NP作为免疫原,免疫Balb/c小鼠后取脾脏细胞与SP2/0细胞融合,筛选获得阳性细胞株,注射小鼠腹腔得到单克隆抗体,纯化后进行Western印迹法、ELISA法、细胞免疫染色和荧光法、双抗夹心ELISA法确定NP抗体的生物学特性,探索应用范围.结果 从Western印迹法、ELISA和细胞免疫染色法的结果可得知,抗NP单克隆抗体可以与免疫原特异性结合,也可以与H1N1、H3N2亚型流感病毒的NP特异性结合,具备检测流感病毒的能力.双抗夹心ELISA法进一步提升了抗体对抗原的检测灵敏度至128 pg.同时,通过细胞免疫荧光法观察到抗体可在细胞内显示NP从细胞核扩散到细胞质的过程.结论 制备的抗体成功检测H1N1、H3N2两种亚型的流感病毒,可作为用于流感防治的流感病毒诊断试剂盒的材料. 张儒轩 沃恩康 丁建祖 方迪 陈帅帅 杨新燕 郭潮潭关键词:流感病毒A型 核蛋白 单克隆抗体 H3N2亚型流感病毒分离株遗传进化分析及其生物特性 被引量:3 2017年 目的 明确人流感分离株A/Guangdong/SKLRD01/2017(简写为SKLRD01)株的序列特征、分子进化及生物学特性.方法 从全球倡议分享流感数据库(GISAD)和美国国立生物信息中心(NCBI)数据库中获取研究所需的流感毒株基因组全序列,通过BioEdit7.0.9软件对比SKLRD01各节段基因与其他相关毒株序列比.用Mega 5.0软件Neighbor-Joining法绘制毒株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进化树,并全面分析毒株的基因组序列特征、进化、传染性、致病性、药物敏感性和抗原性等.结果 SKLRD01属于典型的H3N2季节性流感病毒,其HA基因属于H3亚型的3C.2a进化分支,此分支毒株已在我国华南地区广泛流行.其NA基因与在全球范围内流行的人H3N2毒株遗传关系接近,此类NA基因在流行株中占主导地位.SKLRD01具备人际间传播的能力,呈现部分高致病性病毒特征,对奥司他韦敏感,对金刚烷胺类耐药.与疫苗株相比,SKLRD01在抗原区仅出现涉及A、C两个表位区的3个氨基酸突变,提示现有疫苗依然有效.结论 SKLRD01属于H3N2亚型季节性流感病毒,未出现较大变异.抗原性有较小漂移,注射现有疫苗依然是最好的预防手段.同时需加强对这类病毒变异的监测,用来及时更新疫苗株,防止流感大流行的暴发. 沃恩康 杨新燕 徐琦 方迪 刘亚辉 郭潮潭关键词:流感病毒A型 H3N2亚型 遗传进化 分子特性 人感染禽流感病毒的传播 被引量:1 2013年 禽流感病毒属于A型流感病毒,其感染导致的传染病一般只在禽类间传播,然而1997年以来,存在于家禽中的一些禽流感病毒已经突破了动物种间屏障,能够直接从禽类传播给人类,导致亚洲及全球范围内很多感染病例的死亡,存在潜在大流行的威胁。此文对1997年以来禽流感病毒感染人类的状况进行分析,为今后新型禽流感暴发的预防和控制提供参考。 陈帅帅 郭潮潭关键词:禽流感 禽流感病毒实现种间传播的分子机制 2012年 近年来,H5、H7和H9亚型禽流感病毒跨越种间屏障不断感染人类,特别是人感染HSN1亚型高致病性禽流感后死亡率高达60%。然而这些毒株尚未获得有效的人传人能力,这可能源于人流感病毒和禽流感病毒受体结合特异性的差异,禽流感病毒必须适应人类受体才能实现人际间传播。因此,此文就病毒的氨基酸变异与受体结合特异性、病毒如何在哺乳动物间实现空气传播以及血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)之间功能平衡等方面对种间传播的影响作了综述。 沃恩康 王怡婷 郭潮潭关键词:流感病毒A型 种间传播 受体 甲型流感病毒M2蛋白研究进展 被引量:1 2017年 M2蛋白是流感病毒包膜上的具有离子通道活性的膜蛋白,在流感病毒的整个生活周期中具有重要作用。M2蛋白N端高度保守,是研究通用疫苗的重要靶点,其跨膜区在病毒核糖核蛋白(RNP)复合体入核过程中起重要作用,同时又是药物作用的靶点,但耐药性突变体的出现使得新药的研究变得更加紧迫,M2蛋白还参与病毒的出芽过程,对病毒颗粒的形成非常重要,M2蛋白还能通过复杂的机制操纵细胞自噬和凋亡,从而控制病毒的复制。本文就M2蛋白在疫苗研究、质子传导、药物研究、装配与出芽、自噬与凋亡等几个方面的最新研究进展作一综述。 刘亚辉 郭潮潭关键词:流感病毒 离子通道 出芽