国家自然科学基金(30300426)
- 作品数：7 被引量：40H指数：5
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- Bcl-XL siRNA对人胃腺癌MGC-803细胞药物敏感性的影响被引量：3
- 2006年
- 目的:研究靶向Bcl-XL基因的小干扰RNA对胃腺癌MGC-803细胞Bcl-XL基因表达的作用及对药物敏感性的影响。方法:构建的Bcl-XLsiRNA载体或阴性siRNA并稳定转染到胃癌MGC-803细胞,G418抗生素筛选阳性克隆,克隆扩大培养,免疫荧光观察细胞蛋白表达。用不同浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,MTT观察细胞增殖的变化。用一种浓度的5-FU或DADS处理稳定转染细胞,流式细胞术观察亚G1细胞的比例。结果:免疫荧光结果表明,Bcl-XLsiRNA稳定转染组细胞中Bcl-XL蛋白的表达比阴性siRNA稳定转染组细胞Bcl-XL基因的表达均有明显的降低。当不同浓度的5-FU(13、130、1 300、13 000 mg.L-1)或DADS(20、35、50mg.L-1)处理细胞24 h后,MTT结果表明Bcl-XLsiR-NA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照明显降低,细胞生长抑制率明显增高。5-FU或DADS药物的IC50值在Bcl-XLsiRNA细胞组有明显降低。使用5-FU(130 mg.L-1)或DADS(50mg.L-1)处理细胞24 h后,流式结果表明,Bcl-XL-siRNA细胞组较阴性siRNA和正常对照细胞组亚G1细胞比例有明显增高。结论:Bcl-XL siRNA下调了MGC-803细胞Bcl-XL基因的表达;Bcl-XLsiRNA能够促进MGC-803细胞凋亡,增强细胞对化疗药物的敏感性。
- 钟苗雷小勇冯兰芳朱炳阳唐圣松廖端芳
- 关键词：MGC-803细胞DADS
- bcl-2 siRNA的设计、合成及其对HL-60 bcl-2基因表达的干扰作用被引量：6
- 2006年
- 目的应用RNA干扰技术研究bcl-2siRNA对白血病细胞HL-60bcl-2基因表达的干扰作用。方法扫描bcl-2mRNA的全序列,记录从AUG启动子的AA及下游19个核苷酸肽作为潜在作用靶点。GC含量控制在30%￣65%之间。由BLAST分析排除与其他基因有高度同源性的序列。由体外转录合成法合成双链bcl-2siRNA,将bcl-2siRNA转染入HL-60细胞。收集转染48h后的细胞,流式细胞术检测蛋白表达情况,筛选出最佳作用序列进一步作各项指标检测。从mRNA水平、蛋白质水平等观察bcl-2siRNA对细胞HL-60bcl-2基因表达的干扰作用。结果收集转染48h后的细胞,经细胞免疫荧光、RT-PCR、MTT及Hoechst33258荧光染色等指标检测,可见转染bcl-2siRNA阳性组的细胞bcl-2基因表达降低及HL-60细胞凋亡等现象。而转染GAPDHsiRNA组的细胞对bcl-2表达无影响。结论采用生物信息学的方法设计出有效siRNA靶位点;bcl-2siRNA可通过降低bcl-2mRNA水平特异性抑制bcl-2蛋白质的表达。
- 燕春艳涂玉林钟苗陈欣雷小勇
- 关键词：BCL-2SIRNAHL-60BCL-2基因表达
- Bcl-2 siRNA抑制HL-60细胞bcl-2基因表达被引量：3
- 2005年
- 目的应用RNA干扰技术观察Bcl2siRNA对白血病细胞HL60中bcl2基因表达的影响,探讨siRNA技术在白血病治疗中的作用。方法利用化学合成法体外化学合成Bcl2siRNA,将Bcl2siRNA与HL60细胞共孵育,用MTT法、荧光染色观察细胞增殖及凋亡情况,用RTPCR检测Bcl2mRNA水平,用荧光染色测Bcl2蛋白水平。结果Bcl2siRNA与HL60细胞共孵育48h后,HL60细胞凋亡率增加,Bcl2mRNA水平下调,Bcl2蛋白表达水平降低。转染GAPDHsiRNA组的细胞对Bcl2表达无影响。结论Bcl2siRNA能够特异性降低Bcl2mRNA水平及蛋白质的表达,促进HL60细胞凋亡。
- 雷小勇燕春艳涂玉林钟苗冯兰芳廖端芳
- 关键词：BCL-2SIRNAHL-60
