国家自然科学基金(30440084)
- 作品数：5 被引量：28H指数：3
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- 兔多杀性巴氏杆菌C51-3株黏附蛋白的表达、纯化及其抗原性检测
- 2008年
- 应用PCR从兔多杀性巴氏杆菌C51-3株基因组DNA中扩增出编码36kD黏附蛋白的cp36基因，将其克隆到pMD18-T载体并对插入片段进行测序。以重组质粒pMD18-cp36为模板，用PCR扩增得到编码信号肽除外的成熟黏附蛋白基因cpm36，并克隆到原核表达质粒pQE30中，得到重组质粒pQE30-cpm36，转化大肠杆菌M15，在IPTG诱导下表达融合蛋白CPM36，经Ni^2＋-NTA亲和层析纯化。DNA测序结果表明cp36基因片段大小为1032bp，与已报道的16个血清型多杀性巴氏杆菌cp36基因的核苷酸序列比较，同源性在76．9％～100％之间。SDS-PAGE结果显示，表达分子量约为37kD的带有6xHis标签的CPM36蛋白，与预期分子量相符。Western blotting结果表明，抗重组蛋白抗体分别能与CPM36蛋白和多杀性巴氏杆菌36kD蛋白发生特异性反应，证明原核表达蛋白具有抗原性，为进一步开展多杀性巴氏杆菌免疫保护性抗原的研究奠定了基础。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克严芳何翠张磊恩特马克.布拉提白
- 关键词：兔多杀性巴氏杆菌黏附蛋白原核表达抗原性
- 丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究被引量：5
- 2007年
- 本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。
- 曹文尧李江伟吕芳侯秋莲张富春
- 关键词：克隆
- 禽多杀性巴氏杆菌P1059成熟黏附蛋白的原核表达、纯化和抗原性检测被引量：3
- 2008年
- 目的:建立rCPM36在大肠杆菌中的表达体系,纯化表达产物并检测其抗原性。方法:运用PCR方法从禽多杀性巴氏杆菌国际标准株P1059基因组中扩增出编码36kDa成熟黏附蛋白的cpm36基因,构建原核表达载体pQE30-cpm36,转化到大肠杆菌M15中并诱导表达目的蛋白,用镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白及制备其抗体,Western blot分析其抗原性。结果:SDS-PAGE结果显示目标蛋白以可溶性形式表达在大肠杆菌M15细胞质中,其相对分子质量为37kDa,Westernblot结果表明表达蛋白具有良好的抗原性。结论:成功构建出原核表达载体并实现了目的蛋白表达,用镍离子螯合层析柱纯化得到具有抗原性的蛋白,为进一步开展禽多杀性巴氏杆菌黏附因子和保护性抗原的研究奠定基础。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克陈亮卡马勒别克.吾买尔严芳恩特马克.布拉提白
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌原核表达抗原性
- 禽巴氏杆菌C_(48-3)株成熟黏附蛋白基因cpm39的克隆及序列分析被引量：5
- 2008年
- 目的:对禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的基因cpm39进行克隆和序列分析。方法:通过PCR从禽巴氏杆菌C48-3基因组DNA中扩增出cpm39基因,克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,并对目的基因进行核苷酸序列测定;用Clustal X和Mega 2.1软件将测定的序列与GenBank中已登录的16种血清型巴氏杆菌株核苷酸序列进行同源性分析。结果:测序结果表明cpm39基因大小为1002 bp,与已知的16个血清型巴氏杆菌cpm39基因核苷酸序列的同源性为81.5%～100%。结论:克隆得到禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的cpm39基因,该基因在不同血清型巴氏杆菌中具有很高的同源性,该蛋白可以作为研制预防巴氏杆菌病亚单位疫苗的候选抗原。
- 吾鲁木汗.那孜尔别克彭清忠何翠张磊严芳恩特马克.布拉提白
- 关键词：禽巴氏杆菌克隆同源性
- 多杀性巴氏杆菌毒力因子的研究进展被引量：18
- 2006年
- 王娉张富春
- 关键词：多杀性巴氏杆菌脂多糖荚膜外膜蛋白
