目的 体外观察不同浓度血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）对人脐带间充质干细胞（h UCMSC）凋亡、增殖和旁分泌的影响,筛选适宜浓度Ang-Ⅱ预处理h UCMSC。方法 照笔者单位实验室建立的方法,体外分离、培养并鉴定h UCMSC,取3-8代h UCMSC接种于培养板,将细胞按随机数字表法分为4组（每组3个复孔）：空白对照组、100 ng/m L Ang-Ⅱ组、500 ng/m L Ang-Ⅱ组及1000 ng/m L Ang-Ⅱ组,后3组分别于含有100ng/m L、500 ng/m L及1000 ng/m L Ang-Ⅱ的培养基、空白对照组使用不含有Ang-Ⅱ的培养基培养,各组于培养24、48、72 h后分别于倒置显微镜镜下观察细胞形态和细胞融合的情况,吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡情况,CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期（S期）,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞上清液中血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（b FGF）、肝细胞生长因子（HGF）的含量。结果 培养24、48、72 h后,倒置显微镜下观察各组细胞形态类似,均呈长梭形,少数细胞呈多角形,100 ng/m L Ang-Ⅱ组细胞的融合率分别为40%-45%、70%-80%、90%-95%,融合速度显著增加。AO/EB结果显示：仅100 ng/m L Ang-Ⅱ组与空白对照组未出现凋亡细胞或死亡细胞。CCK-8的结果同样显示100 ng/m L Ang-Ⅱ组细胞增殖速度显著快于空白对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测结果显示为100 ng/m L Ang-Ⅱ组所处的增殖周期（S）期细胞数量的比例显著增加。ELISA检测结果是100 ng/m L Ang-Ⅱ组细胞的VEGF、b FGF、HGF含量最高,与空白对照组比较,差异均有统计学意义（P均小于0.05）。结论 100 ng/m L Ang-Ⅱ具有抑制细胞凋亡,促进细胞增殖的功能,这可能与其使h UCMSC大量分泌VEGF、b FGF、HGF有关。
目的:通过气管内给药的方法比较不同浓度人脐带间充质干细胞气管内移植对重度烧伤致急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:建立50%面积全层烫伤大鼠模型,将75只成熟雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、生理盐水组(B组)、1×10~5HUCMSCs移植组(C)、5×10~5HUCMSCs移植组(D)、1×10~6HUCMSCs移植组(E),每组15只,B组及移植组(C、D、E组)烫伤后立即液体复苏,B组烫伤后气管内滴注0.2 m L生理盐水,移植组气管内滴注不同浓度h UCMSCs,分别在移植后的天第1、3、7天留取大鼠肺组织标本,HE染色观察肺组织病理变化,MPO、CD68免疫组化染色观察肺组织中性粒细胞及肺巨噬细胞阳性表达情况。结果:肺组织病理切片可见:A组各时间点肺泡腔清晰,肺泡结构完整,偶见少量炎性细胞。烫伤后第1天,B组及移植组(C、D、E组)肺泡间隔增厚,大量红细胞漏出及炎性细胞浸润。烫伤后第3天,各组肺泡结构较前清晰,炎性细胞浸润及红细胞漏出较第一天减少,与B组相比移植组肺泡结构清晰,间隔变薄,移植组各组间改变不明显。烫伤后第7天,移植组肺组织损伤较B组明显减轻,E组损伤肺组织恢复最为明显。MPO染色显示:与A组相比,阳性细胞数在烫伤后第1天明显增加(P<0.05),但各组之间无明显差异。在烫伤后第3天,与B组相比,移植组阳性细胞数减少明显(P<0.05),E组阳性细胞减少明显(P<0.05);在烫伤后第7天E组阳性细胞数量较其他组显著减少(P<0.05)。CD68染色显示在烫伤后第1天各组阳性细胞显著增多(P>0.05),在烫伤后第3天移植组阳性细胞数减少(P<0.05),但各移植组间无明显差异,烫伤后第7天移植组阳性细胞数量较B组明显减少(P<0.05),E组较C、D组阳性细胞减少有显著差异(P<0.05)。结论:气管内移植HUCMSCs能修复重度烧伤后损伤的肺组织,减少肺组织中性粒细胞及巨噬细胞的浸润,且1×10~6HUCMSCs移植效果更明显。
