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人β-COP-shRNA慢病毒载体构建及干扰效应检测被引量：1: 2015年; 目的采用常规转染试剂难以将人β-COP-shRNA转染至THP-1细胞。构建人β-COP特异性的shRNA慢病毒载体,并测定其对靶基因β-COP的抑制效应。方法设计合成针对人β-COP基因靶点特异的4对shRNA寡聚单链DNA,插入p GMLV-SC1载体中,构建慢病毒重组载体。将重组载体和包装质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度。用慢病毒感染THP-1细胞,定量PCR和Western blot检测干扰载体对β-COP基因的干扰效果。结果测序证实,β-COP基因的shRNA寡聚核苷酸序列已插入慢病毒载体,转染HEK 293T细胞,经包装得到4种慢病毒,病毒滴度为1×109TU/m L。定量PCR分析显示,4种β-COP-shRNA慢病毒感染的THP-1细胞中β-COP基因mRNA表达量分别为0.831±0.065、0.675±0.079、0.260±0.050、0.497±0.067,较对照(1.000±0.000)明显升高(P<0.01);其抑制率分别为16.9%、32.5%、74.0%和50.3%。Western blot结果表明,4种干扰载体均可抑制β-COP蛋白表达,其中β-COP-shRNA 3的沉默效率为76.4%。结论成功构建了人β-COP-shRNA干扰载体,证实了干扰载体对靶基因有较好的沉默效果。; 马卫列丁航李观强肖娟张志珍; 关键词：脂质代谢

HPLC法测定apoA-1介导的泡沫细胞胆固醇流出的实验研究被引量：4: 2015年; 目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定载脂蛋白A-1(apoA-1)介导的泡沫细胞内胆固醇流出率的实验方法。方法人单核细胞THP-1用160nmol/L佛波酯(PMA)诱导24h分化为贴壁巨噬细胞(PMA组),再用50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)处理48h,诱导巨噬细胞变成泡沫细胞(ac-LDL组);加入含apoA-1的1640培养基培养24h(apoA-1组)。油红O染色和HPLC法测定细胞内胆固醇水平,鉴定巨噬细胞源性泡沫细胞模型。采用HPLC分析和液体闪烁计数法测定apoA-1介导的泡沫细胞内胆固醇流出率。结果 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞经油红O染色后,细胞内可明显观察到大量红色脂滴存在。胆固醇水平测定显示,ac-LDL组内游离胆固醇、总胆固醇和胆固醇酯的水平明显高于PMA组(P<0.01)。ac-LDL处理细胞48h后,ac-LDL组内总胆固醇水平为80.25μg/mg细胞蛋白,胆固醇酯水平为47.65μg/mg细胞蛋白,占总胆固醇的59.38%,与PMA组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。HPLC分析和液体闪烁计数法结果表明,apoA-1介导泡沫细胞内apoA-1组胆固醇流出率分别为5.63%和7.08%(P<0.01)。结论本研究成功建立了酶促反应结合HPLC测定泡沫细胞内胆固醇流出的方法,为后续研究细胞脂质代谢提供了实验基础。; 马卫列龚晓华李观强丁航兰柳波陈小谊张志珍; 关键词：泡沫细胞载脂蛋白A-1 胆固醇流出

磷酸二酯酶7及其抑制剂被引量：7: 2012年; 磷酸二酯酶7(phosphodiesterase7,PDE7)作为体内特异性水解第二信使环腺苷一磷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的一类蛋白水解酶,通过调控组织细胞内cAMP水平及机体信号传导活动,参与了体内多种疾病的发生发展过程.PDE7主要分布于前炎症细胞及免疫细胞.最新研究表明,PDE7作为一个新的潜在的抗动脉粥样硬化及抗炎症免疫类药物的新靶点,其抑制剂可能在研究及治疗动脉粥样硬化及慢性阻塞性肺病等免疫炎症类疾病方面具有重要意义.本文简述PDE7基因结构、生物学功能以及其抑制剂研究,并重点就其与疾病之间联系做一综述.; 饶勇龚晓华马卫列张志珍

蒙古长爪沙鼠颌下静脉丛真空采血法探讨被引量：3: 2014年; 目的探讨蒙古长爪沙鼠(Mongolian gerbil)颌下静脉丛真空采血的技术与方法,提高蒙古长爪沙鼠实验的成功率。方法选取40只蒙古长爪沙鼠,麻醉后将静脉输液针刺入颌下静脉丛血管取血。结果成功获得沙鼠静脉血,每只沙鼠的采血量可达0.3-0.6 m L。结论此方法可多次重复采血,血液标本质量高,创伤小,是一种简便、安全、采血量多的采血方法。; 金丹丹张劲松丁航兰柳波张志珍马卫列

黄连水提物抗甲型流感病毒活性初步研究被引量：13: 2014年; 目的观察黄连水提物对甲型流感病毒（IAV）活性的影响。方法 CCK-8法检测黄连水提物对狗肾传代（MDCK）细胞的毒性作用。采用反向遗传8质粒病毒拯救系统制备IAV后,CCK-8和CPE法检测黄连水提物抗IAV活性。利用荧光素酶编码基因报告系统研究黄连水提物对IAV感染性和RNA聚合酶活性的影响。结果黄连水提物在0.25~2.0g/L质量浓度内,对MDCK细胞有一定安全性。黄连水提物有较好的抗IAV作用。与对照组比较,黄连水提物处理组细胞的相对荧光强度明显降低（P〈0.01）。结论黄连水提物对IAV活性及感染性有较强抑制作用,可能与抑制病毒RNA聚合酶活性有关。; 马卫列罗芬李锦云陈潇楷林东子丁航张志珍; 关键词：黄连甲型流感病毒抗病毒活性

溶血磷脂酸受体2被引量：1: 2013年; 溶血磷脂酸受体2(lysophosphatidic acid receptor 2,LPA2),也称内皮分化基因受体4(endothelial differentiation gene receptor 4,EDG4),是溶血磷脂酸G蛋白偶联受体类的一种,对溶血磷脂酸有较高亲和力,可介导多种细胞活动。近年研究发现,LPA2/EDG4在卵巢癌细胞中过表达,同时与乳腺癌、结直肠癌、动脉粥样硬化、呼吸道疾病、妊娠性高血压等有着密切关系。; 龚晓华饶勇马卫列张志珍; 关键词：溶血磷脂酸

高脂饲料对长爪沙鼠血脂和血清电解质的影响: 2014年; 目的观察高脂饲料对长爪沙鼠血清脂质4项和血清电解质K+、Na+、Cl-、Ca2+、Mg2+含量的影响。方法选取雄性长爪沙鼠40只,随机分为两组,分别给予普通饲料和高脂饲料(含1%胆固醇、10%猪油)。喂养12周后颌下静脉丛采血,用日立7180型全自动生化分析仪检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C及Ca2+、Mg2+含量,用美国Easy Lyte Plus型电解质分析仪检测血清K+、Na+、Cl-含量。结果与正常饲料组相比,高脂饲料喂养后沙鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量显著升高(P<0.01),以TC、LDL-C水平升高最为明显。沙鼠血清电解质K+、Mg2+含量在不同饲料组差异有显著性(P<0.01或P<0.05),而Na+、Cl-、Ca2+含量在不同饲料喂养组的差异不显著(P>0.05)。结论高脂饲料能明显升高长爪沙鼠血清脂质4项,并改变其血清电解质K+、Mg2+水平。; 李雪枫王伊楠金丹丹林东子丁航张志珍马卫列; 关键词：长爪沙鼠血清脂质电解质

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广东省自然科学基金(S2011010002984)

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