国家自然科学基金(30700697)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 乙型肝炎病毒核心蛋白在HepG2．2．15细胞中的亚细胞定位及转移被引量：3
- 2008年
- 目的观察HepG2．2．15细胞内HBV核心蛋白的亚细胞定位及转移，了解核心蛋白的入核机制。方法2％二甲亚砜或（和）1μmol／LBay414109处理HepG2．2．15细胞4d；荧光共聚焦显微镜观察HBsAg和HBcAg在细胞内的定位；Westernblot检测胞质和胞核中的HBcAg水平；选择性PCR检测胞核内HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）水平。结果二甲亚砜处理提高了胞质和胞核内的HBcAg表达及核内的cccDNA水平；Bay414109处理后胞质中HBcAg水平下降但胞核中HBcAg水平上升，cccDNA水平下降；联合应用二甲亚砜和Bay41—4109处理后HBsAg在胞质内呈条索状分布，胞质中HBcAg水平下降，但胞核内HBcAg明显上升，cccDNA水平下降。结论HepG2．2．15细胞中存在HBV核心颗粒入核障碍，游离核心蛋白易于通过核孔，二甲亚砜可促进核心蛋白进入细胞核，并有助于cccDNA的形成。
- 潘孝本韩进超魏来彭丹丹高燕
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒核心蛋白质类
- 磷酸酯酶抑制剂冈田酸对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制的影响
- 2007年
- 目的初步鉴定可能与HBV核心蛋白去磷酸化有关的磷酸酯酶。方法以磷酸酯酶2A抑制剂冈田酸(OA)处理体外培养的人肝癌HepG2.2.15细胞。将细胞分为4组,分别加入终浓度为0(对照组)、10、20、30ng/ml的OA(OA10ng组、OA20ng组、OA30ng组),每组各设5孔。在培养0、2、4、6d时分别收集各组细胞培养上清液,采用电化学发光方法检测HBsAg浓度,荧光实时定量PCR方法检测HBVDNA拷贝数。取培养2d时的各组细胞,采用蛋白质印迹方法检测HBcAg异质性,免疫荧光细胞化学染色方法检测HBcAg亚细胞定位。结果OA10ng组、OA20ng组各时间点细胞培养上清液HBsAg浓度、HBVDNA拷贝数分别与对照组相应各时间点比较,差异均无统计学意义;在培养2d时HBcAg电泳条带、亚细胞定位分别与对照组比较均无明显异常。OA30ng组在培养2、4、6d时细胞培养上清液HBsAg浓度(ng/ml)均明显低于对照组相应各时间点(分别为385.9±43.1vs510.2±63.3、346.5±39.6vs484.6±59.4、295.1±32.8vs467.2±52.9,P值分别为0.028、0.022、0.016);在培养2d时细胞培养上清液HBVDNA拷贝数(ml-1)明显高于对照组相应时间点(6.71±6.07vs6.34±5.72,P=0.022),而在培养4、6d时均明显低于对照组相应各时间点(分别为5.80±5.19vs6.29±5.68、4.75±4.15vs6.25±5.58,P值分别为0.008和0.005);在培养2d时HBcAg电泳条带明显增宽,约20%的HepG2.2.15细胞的细胞核内HBcAg红色荧光信号明显增强。结论短时间、高浓度的OA处理可提高HBVDNA的复制水平和核心蛋白的磷酸化水平,提示磷酸酯酶2A可能参与了HBV核心蛋白的去磷酸化过程。
- 潘孝本季颖朱凌王茜管文莉韩进超魏来
- 关键词：DNA复制
- 高水平乙型肝炎病毒复制诱导肝细胞QSG-7701凋亡被引量：1
- 2008年
- 目的观察高水平的HBV复制对QSG-7701细胞可能产生的致病效应。方法采用磷酸钙沉淀方法转染质粒pUC18-HBV1．2（实验组）和空质粒pUC18（对照组）至QSG-7701细胞，细胞计数观察细胞生长曲线。转染后4d，采用荧光实时定量PCR方法检测培养上清中HBV DNA水平；免疫荧光细胞化学染色检测细胞内的HBsAg表达；电子显微镜和末端脱氧核苷酸转移酶介导duTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡；Oliga信号传导基因芯片检测实验组和对照组的基因差异表达。结果对照组细胞转染6d后细胞数量增加（8．3±1．2）倍，凋亡细胞极少见。实验组在转染后6d细胞数量仅增加（1．1±0．2）倍，HBsAg阳性细胞35．4％±6．7％，细胞凋亡占15．2％±4．3％。基因差异表达谱分析显示与细胞生长和凋亡相关的部分基因如CASP3（2．7981）、CASP7（2．2643）、3．Apr（3．5013）、CDC2（0．4380）、MAPK6（0．4447）和MAP3K2（0．2785）等表达水平发生显著改变。结论高水平的HBV复制明显抑制QSG-7701细胞生长，并诱导部分细胞发生凋亡。
- 潘孝本韩进超高燕魏来
- 关键词：肝细胞凋亡
