广州市医药卫生科技项目(201102A212012)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：简卫华张娈景夏金堂赖越元刘龙山更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高尔基磷酸化蛋白-3基因过表达对胰腺癌细胞迁移的影响
- 2013年
- 目的构建高尔基磷酸化蛋白-3（GOLPH-3）基因过表达的胰腺癌稳定细胞株BxPC-3，观察GOLPH-3基因过表达对胰腺癌细胞迁移能力的影响。方法制备逆转录病毒pMSCV—GOLPH-3和pMSCV—vector，并分别感染胰腺癌细胞株BxPC-3，用0．5mg／L嘌呤霉素筛选得到GOLPH-3过表达及空载对照稳定细胞株。Westernblot技术在蛋白水平上检测BxPC-3稳定细胞株中GOLPH．3及β-连环蛋白（13-catenin）的蛋白表达水平，细胞迁移实验（Transwell）检测GOLPH-3对胰腺癌细胞迁移能力的影响。结果胰腺癌细胞BxPC-3表达GOLPH-3蛋白；空白对照组、空载对照组及过表达组的GOLPH．3蛋白相对含量分别为0．32±0．13、0．46±0．12、1．02±0．30，过表达组较空载对照组上调50．9％，其差异有统计学意义（P〈0．05）。β-catenin蛋白相对含量分别为0．42±0．06、0．63±0．34、1．77±0．19，与空载对照组比较，上调GOLPH．3能明显促进过表达组β-catenin蛋白的表达，且上调64．4％（P〈0．01）。每200倍随机计数5个视野下空白对照组、空载对照组、过表达组穿膜胰腺癌细胞数分别为（14．33±6．30）个、（16．25±10．45）个、（83．08-4-62．57）个，过表达组的迁移细胞数明显多于空载对照组（P〈0．001），而两对照组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论上调GOLPH-3能影响胰腺癌细胞的迁移能力，GOLPH-3过表达增强胰腺癌细胞的迁移机制可能是上调Wnt／β-eatenin信号通路B—eatenin表达的结果。
- 张娈景夏金堂简卫华陈连周刘龙山李雯汪谦
- 关键词：胰腺癌细胞迁移Β-连环蛋白
- RNA干扰下调SPHK1基因表达抑制胃癌细胞增殖被引量：1
- 2013年
- 【目的】应用RNA干扰方法下调鞘氨醇激酶1(SPHK1)基因表达,研究SPHK1对胃癌细胞SGC-7901、MGC-803细胞增殖的影响及其可能的作用机制。【方法】免疫组织化学法检测5对胃癌及癌旁组织的SPHK1蛋白表达量;构建质粒、制备逆转录病毒并感染胃癌细胞株SGC-7901、MGC-803,筛选并鉴定SPHK1-RNAi和对照载体(RNAi-Vector)稳定表达细胞株;MTT法检测胃癌细胞的增殖变化;Western blot法检测SPHK1、p21、p27、Akt、p-Akt、Rb、p-Rb蛋白的表达水平。【结果】SPHK1蛋白在胃癌组织中过表达;与对照组比较,两株SPHK1-RNAi稳定表达的胃癌细胞SGC-7901、MGC-803中SPHK1表达显著下调,抑制率分别为81.2%、65.1%;SPHK1-RNAi胃癌细胞增殖能力较对照组显著减弱;SPHK1-RNAi胃癌细胞的磷酸化Akt及磷酸化Rb蛋白表达明显降低,而p21、p27的蛋白表达水平明显上调。【结论】下调SPHK1基因表达能抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与细胞内Akt信号被减弱,细胞周期抑制蛋白p21、p27的表达上调有关。
- 张娈景夏金堂张珑涓简卫华赖越元陈连周黄晓卉李雯
- 关键词：胃癌细胞细胞增殖AKT
- 靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡被引量：2
- 2012年
- 目的探讨用小干扰核酸(Small interfering RNA,siRNA)靶向沉默神经鞘氨酸激酶1(sphingosine kinase1,SPHK1)基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHK1 siRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Western blot法检测SPHK1、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测细胞凋亡的变化。结果 SPHK1 siRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHK1蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHK1 siRNA转染组Bcl-2蛋白表达下调了55%(P<0.01),Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2/Bax比值下调54%(P<0.05);SPHK1 siRNA转染组早期凋亡细胞明显增多(P<0.01),晚期凋亡细胞无明显变化。结论 SPHK1特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHK1蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。
- 简卫华张娈景刘龙山伍兆峰赖越元温敏杰蔡维山张泷涓夏金堂
- 关键词：小干扰RNA细胞凋亡BCL-2
