国家自然科学基金(30300449)
- 作品数：42 被引量：144H指数：6
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- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属永川医院重庆三峡中心医院更多>>
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- 大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验被引量：4
- 2010年
- 目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。
- 金丹婷钟梁刘北忠袁佩刘畅王翀王春光朱丹吴燕
- 关键词：大黄素抗肿瘤活性
- 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证被引量：4
- 2010年
- 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀
- NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证被引量：2
- 2009年
- 目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用.结果:真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc mAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达.结论:分别成功构建了含HA-NLS-RARα与Myc-ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NLS-RARα与ISCA1之间存在相互作用.
- 王东生王春光王翀曹炬张国元王勇钟梁刘北忠
- 关键词：核定位信号受体维甲酸蛋白质相互作用免疫共沉淀
- 大黄素诱导白血病K562细胞凋亡及对Caspase-3基因表达的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨大黄素对人白血病K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用.方法:采用四唑蓝比色试验(MTT)检测大黄素对K562细胞的增殖抑制作用;通过电子显微镜观察细胞的形态学变化;运用原位缺口末端标记技术检测大黄素对K562细胞的凋亡效应;采用流式细胞技术检测细胞周期变化与凋亡情况;通过比色法检测Caspase-3的相对活性,RT-PCR检测细胞内凋亡相关基因Caspase-3的转录水平.结果:大黄素能显著抑制K562细胞的增殖,作用24,72 h后的半数抑制率浓度分别为80,40μmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;TUNEL法检测到K562细胞在大黄素的诱导下出现凋亡;流式细胞仪结果分析发现,处理组的K562细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组相比,凋亡率明显升高并呈现时间-剂量依赖性(P<0.01);大黄素可触发Caspase-3的活性增高(P<0.01),并呈现剂量依赖性;RT-PCR结果显示,Caspase-3mRNA表达上调.结论:大黄素能有效地抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,可能与Caspase-3活化有关.
- 金丹婷刘北忠刘畅王春光王翀王东生郝坡钟梁
- 关键词：大黄素K562细胞白血病细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 糖皮质激素受体结合域诱饵表达载体的构建及鉴定
- 2008年
- 目的构建糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)结合域的诱饵表达载体。方法RT-PCR扩增GR结合域,克隆入pMD18-T,测序正确后,再亚克隆入诱饵载体pGBKT7中,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GR转化到酵母AH109细胞中,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果成功扩增了GR结合域,并分别成功克隆到pMD18-T和pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析结果也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论成功构建了GR结合域的酵母诱饵表达载体。
- 郝坡刘北忠欧阳峰王东生刘畅钟梁金丹婷王翀
- 关键词：诱饵载体诱饵蛋白
- 人HL-60细胞GR-αLBD诱饵表达载体的构建和鉴定
- 2008年
- 目的:构建糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)受体α配体结合域(GRα-LBD)的诱饵表达载体,为小分子配体酵母三杂交系统的建立奠定基础。方法:RT-PCR扩增HL-60细胞的GRα-LBD,克隆入诱饵载体pGBKT7中,测序正确后,再把构建好的诱饵载体pGBKT7-GRα-LBD转化到酵母AH109细胞中,提取酵母蛋白,并用Western blot分析诱饵蛋白的表达情况。同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用。结果:成功扩增了GRα-LBD,并成功亚克隆到pGBKT7中,测序结果正确。诱饵载体成功转化到酵母AH109细胞中,无毒性和自激活作用,Western blot分析也证实了酵母细胞高表达诱饵蛋白。结论:成功构建了GRα-LBD酵母诱饵表达载体,为建立小分子配体酵母三杂交系统奠定了基础。
- 钟梁郝坡刘北忠王东生刘畅金丹婷王翀王春光
- 关键词：HL-60诱饵载体诱饵蛋白
- 地塞米松的结构改造及对K562细胞增殖抑制的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的:通过对地塞米松进行结构改造,探寻具有更高生物活性的新化合物.方法:以地塞米松为原料,通过氧化反应对其侧链进行结构改造,并采用1H NMR,13C NMR及ESI-MS对其进行结构表征.通过MTT比色法检测新化合物对K562细胞增殖的影响.结果:地塞米松经氧化反应后,改构为预期的新化合物.新化合物具有抑制K562细胞增殖的生物活性.在5及10mg/L时,抑制率分别为9.64%±0.27%和22.75%±0.35%,高于地塞米松(P<0.01).结论:地塞米松经结构改造为新化合物.新化合物在低浓度时对K562细胞具有较好的抑制活性.
- 刘畅金丹婷钟梁袁佩刘北忠王东生王翀郝坡
- 关键词：地塞米松细胞增殖
- 酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白被引量：4
- 2008年
- 目的利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白，研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能。方法构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V，利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列，并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证。结果成功构建诱饵质粒，且没有毒性、渗漏和自激活现象；利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质；经酵母回转试验得到8个阳性克隆；并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用。结论在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用，白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关。
- 王东生王翀刘北忠夏乾峰郝坡刘畅金丹婷钟梁
- 关键词：白血病
- 白血病分子靶向治疗研究进展被引量：1
- 2007年
- 郝坡刘北忠
- 关键词：白血病靶向治疗分子机制
- 人K562细胞cDNA文库的扩增、纯化、鉴定和酵母细胞转化被引量：2
- 2008年
- 目的:对预转化到大肠杆菌DH5α中的人K562细胞cDNA文库进行扩增、纯化和鉴定并将文库质粒转化酵母细胞,为下一步的靶蛋白筛选做准备。方法:对K562细胞cDNA文库进行扩增,提取文库质粒,将文库质粒转化酵母Y187细胞,并用PCR和酶切鉴定转化结果。结果:成功的扩增人K562细胞cDNA文库、并验证了文库的多样性、将文库质粒成功转化酵母Y187细胞。结论:K562细胞cDNA文库的成功扩增、纯化、鉴定,为进一步的文库筛选奠定了基础。
- 欧阳峰王东生郝坡刘北忠刘畅钟梁金丹婷王翀
- 关键词：白血病K562细胞CDNA文库
