国家自然科学基金(81372033)
- 作品数：31 被引量：114H指数：7
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- Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用被引量：18
- 2014年
- 目的 探讨Nrf2在氢气治疗严重脓毒症肠损伤中的作用.方法 将152只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组4组,每组38只.采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型,假手术组和氢气对照组不进行CLP,其他操作相同.氢气对照组和氢气治疗组于假手术或CLP后1h、6h分别吸入2％氢气1h.每组取20只小鼠,观察术后7d内的生存率.每组剩余18只小鼠,分别于术后6、12和24 h各处死6只,取部分肠组织,用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Nrf2、高迁移率族蛋白B1 （HMGB1）的蛋白表达;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Nrf2 mRNA表达;于术后24 h取部分中段空肠,行苏木素-伊红（HE）染色,光镜下观察肠组织损伤程度.结果 假手术组和氢气对照组各指标差异均无统计学意义.脓毒症组小鼠7d生存率较假手术组明显降低（0比100％,P＜0.05）;氢气治疗组小鼠7d生存率较脓毒症组明显升高（55％比0,P＜0.05）.与假手术组比较,脓毒症组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白表达（灰度值）和mRNA表达均明显升高（Nrf2蛋白6 h：1.973±0.350比1.000±0.000,t=4.411,P=0.002; 12 h：2.367±0.186比1.000 ±0.000,t=10.210,P=0.000; 24 h：2.517±0.280比1.000±0.000,t =9.521,P=0.000;Nrf2 mRNA 6 h：1.606±0.271比1.000 ±0.000,t=3.631,P=0.002; 12 h：1.692±0.399比1.000±0.000,t=3.233,P=0.005;24 h：1.784±0.341比1.000±0.000,t=3.894,P=0.001）,术后24 h肠组织HMGB1表达（灰度值）明显升高（1.507±0.220比1.000±0.000,t=3.948,P=0.004）.与脓毒症组比较,氢气治疗组术后6、12和24 h肠组织Nrf2的蛋白和mRNA表达明显升高（Nrf2蛋白6 h：2.583±0.395比1.973±0.350,t=2.765,P=0.024; 12 h：2.725±0.235比2.367±0.186,t=2.674,P=0.028; 24 h：2.930±0.212比2.517±0.280,t=2.595,P=0.032; Nrf2 mRNA 6 h：2.008±0.400比1.606±0271,t=2.405,P=0.029;12 h：2.188 ±0.475比1.692±0.399,t=2.317,P=0.034;24 h：2.333±0.406比1.78
- 李媛谢克亮陈红光王卫娜王国林于泳浩
- 关键词：NRF2脓毒症氢气肠组织高迁移率族蛋白B1
- 氢对内毒素致巨噬细胞氧化损伤时Nrf2表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的评价氢对内毒素致巨噬细胞氧化损伤时核因子E2相关因子2（Nrf2）表达的影响。
方法正常培养的RAW264.7细胞，采用随机数字表法分为4组（n＝36）：对照组（C组）、富氢液组（H组）、内毒素组（E组）和内毒素＋富氢液组（EH组）。E组和EH组加入内毒素，终浓度1 μg/ml，H组和EH组加入富氢液（氢气浓度0.06 mmol/L），于富氢液孵育6、24和48 h时收集细胞，检测ROS活性，收集细胞提取蛋白，采用Western blot法检测SOD、过氧化氢酶（CAT）活性和Nrf2的表达。
结果与C组比较，E组和EH组ROS活性升高，SOD和CAT活性降低，巨噬细胞Nrf2表达上调（P〈0.05），H组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）；与E组比较，EH组ROS活性降低，SOD和CAT活性升高，巨噬细胞Nrf2表达上调（P〈0.05）。
结论氢可减轻内毒素致巨噬细胞氧化损伤，其机制与上调Nrf2表达有关。
- 刘刚陈红光谢克亮于泳浩
- 关键词：氢内毒素类巨噬细胞氧化性应激
- 富氢液对神经病理性痛大鼠脊髓神经细胞自噬的影响被引量：1
- 2016年
- 目的评价富氢液对神经病理性痛大鼠脊髓神经细胞自噬的影响。方法清洁级雄性SD大鼠60只，8～10周龄，体重220～250g。采用随机数字表法分为3组（n=20）：假手术组（S组）、神经病理性痛组（NP组）和富氢液组（H组）。采用坐骨神经慢性压迫法制备大鼠神经病理性痛模型。H组术前腹腔注射富氢液5ml／kg，1次／d，连续7d，S组和NP组给予等量生理盐水。于术前1d（T0）、术后1、3、5和7d（T1-4）时测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TWL），T7时测定痛阈后生理盐水心脏灌注，取脊髓L4-6节段，采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅱ、Beclin-1和p62的表达。结果与S组比较，NP组和H组T2-4时MWT降低，TWL缩短，T4时脊髓LC3Ⅱ、Beclin-1和p62表达上调（p〈0．05）；与NP组比较，H组T2-4时MWT升高，TWL延长，T4时脊髓LC311和Beclin-1表达上调，p62表达下调（P〈0．05）。结论富氢液减轻大鼠神经病理性痛的机制与诱导脊髓神经细胞自噬有关。
- 王慧星史可梅陈红光陈亚军何颖王小波于泳浩
- 关键词：神经痛自噬脊髓
- 富氢液对脂多糖刺激离体肠上皮屏障功能障碍的影响被引量：4
- 2016年
- 目的：观察富氢液对脂多糖（LPS）刺激人肠上皮细胞（Caco2）单层模型细胞通透性的影响，探讨其对肠屏障功能障碍的保护作用机制。方法人结肠腺癌细胞株Caco2培养于含20%胎牛血清的DMEM培养基中，传代至第28～35代的细胞用于实验。采用随机数字表法将细胞分为空白组、富氢液组、LPS组和LPS＋富氢液组。空白组和LPS组用正常培养基培养，富氢液组和LPS＋富氢液组用含饱和氢气培养基培养；LPS组和LPS＋富氢液组分别加入1g/L的LPS孵育，空白组和富氢液组加入等量生理盐水。建立Caco2细胞单层模型模拟离体肠上皮屏障，孵育0、3、6、12、24、48h测定其跨上皮细胞电阻（TEER）值来反映肠屏障通透性；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和乳酸脱氢酶（LDH）法分别测定细胞活性和损伤情况；孵育6、12、24h采用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）测定细胞紧密连接蛋白claudin-1与occludin的蛋白表达；孵育24h采用免疫荧光法观察claudin-1与occludin蛋白的分布。结果空白组与富氢液组各指标比较差异均无统计学意义。LPS组和LPS＋富氢液组细胞孵育6h起TEER值即较空白组明显降低，且呈时间依赖性；而LPS＋富氢液组细胞孵育6h起TEER值明显高于LPS组。与空白组相比，LPS组细胞活性明显降低〔（67.2±7.9）%比（100.0±0.0）%，P＜0.05〕，细胞损伤明显〔LDH释放率：（38.5±2.1）%比（1.2±0.3）%， P＜0.05〕，孵育6、12、24h时claudin-1和occludin蛋白表达明显下调〔claudin-1（灰度值）：0.351±0.079、0.272±0.075、0.190±0.049比0.518±0.030，occludin（灰度值）：0.416±0.044、0.290±0.062、0.226±0.019比0.602±0.038，均P＜0.05〕，孵育24h时细胞claudin-1和occludin蛋白分布紊乱且连续性中断。与LPS组相比，LPS＋富氢液组细胞活性部分恢复〔（88.8±7.4）%比（67.2±7.9）%，P＜0.05〕，细胞损伤减轻〔LDH释放率：（16.
- 杨涛谢克亮陈红光张红涛于洋王国林于泳浩
- 关键词：脂多糖肠屏障功能障碍紧密连接蛋白
- 氢气对脓毒症小鼠肺组织Nrf2/ARE通路的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 评价氢气对脓毒症小鼠肺组织核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化反应原件（ARE）通路的影响.方法 雄性ICR小鼠72只,体重20～ 25 g,6周龄,采用随机数字表法,将其分为4组（n=18）：假手术组（SH组）、氢气组（H2组）、脓毒症组（S组）和脓毒症＋氢气组（S＋H2组）.采用盲肠结扎穿孔 （CLP）法制备脓毒症模型.于CLP术后1和6h时H2组和S＋H2组吸入2％氢气1h.分别于CL术后7、12和24 h时各处死6只小鼠,取肺组织,采用Western blot法测定Nrf2和血红素氧合酶-1（HO-1）的蛋白表达,采用RT-PCR法检测Nrf2 mRNA的表达;于CLP术后24 h时测定肺组织病理学损伤评分和湿重/干重比值（W/D比值）,采用Western blot法测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达.结果 与SH组比较,S组和S＋H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值升高,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1和HMGB1的表达上调（P＜0.05）,H2组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与S组比较,S＋H2组肺组织病理学损伤评分和W/D比值降低,Nrf2蛋白及其mRNA、HO-1的表达上调,HMGB1表达下调（P＜0.05）.结论 氢气减轻脓毒症小鼠急性肺损伤的机制与激活Nrf2/ARE通路有关.
- 李媛谢克亮陈红光王卫娜王国林于泳浩
- 关键词：氢脓毒症NF-E2相关因子2反应元件
- Rho／ROCK信号通路在氢气改善脓毒症小鼠急性肺损伤中的作用被引量：9
- 2016年
- 目的探讨Ras同源基因（Rho）／Rho激酶（ROCK）信号通路在氢气（H2）改善脓毒症小鼠急性肺损伤（ALI）中的作用。方法按照随机数字表法将雄性C57BL／6小鼠分为假手术（Sham）组、H2对照组（sham＋H2吸入）、脓毒症模型组和H2治疗组（脓毒症＋H2吸入），每组20只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型；Sham组不进行盲肠结扎和穿孔。H2吸入两组分别于术后1h、6h吸入2％H2 1h。术后24h每组取10只小鼠，静脉注射伊文思蓝（EB）评价内皮通透性；处死另外10只小鼠，取支气管肺泡灌洗液（BALF）测定蛋白、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）含量并计数多形核中性粒细胞（PMN）；取肺组织测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性以及肺湿／干质量比值（W／D）；苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变；蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测Rho／ROCK通路活性和紧密连接蛋白ZO-1表达；免疫荧光法测定ZO-1的表达和分布。结果Sham组和H2对照组各指标比较差异均无统计学意义。与Sham组比较，模型组BALF中蛋白、TNF-α．和IL-1β含量及PMN计数明显增高，肺组织EB、MDA含量增高，SOD活性下降，肺W／D比值升高，肺组织Rho—GTP／总Rho比值、ROCKl和ROCK2表达水平、磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶目标亚基1占肌球蛋白磷酸酯酶目标亚基1的比值（p-MYPT1／MYPT1）明显升高，ZO-1表达水平明显降低。与模型组比较，H2治疗组BALF中蛋白、TNF—α和IL-1β含量及PrvIN计数明显降低[蛋白（以）：3．12±0．33比6．37±0．56，TNF—α（ng／L）：128．45±17．33比563．83±61．72，IL-1β（ng／L）：75．76±14．35比245．52±30．56，PMN计数（×105／L）：7．46±1．34比18．55±5．73]；肺通透性明显降低[EB含量（μg／g）：73．33±6．98比144．83±12．38]，肺组织MDA含量降低�
- 张红涛刘玲玲于洋孙哲梁禹于泳浩
- 关键词：氢气脓毒症RHORHO激酶
- 氢气对脓毒症小鼠肠组织Rho/ROCK信号通路的影响被引量：4
- 2015年
- 目的 评价氢气对脓毒症小鼠肠组织Ras同源基因（Rho）/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶（ROCK）信号通路的影响.方法 雄性ICR小鼠64只,体重20～ 25 g,6周龄,采用随机数字表法,将其分为4组（n=16）：假手术组（SH组）、氢气组（H2组）、脓毒症组（S组）和脓毒症＋氢气组（S＋H2组）.采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备脓毒症模型.于CLP术后1和6h时H2组和S＋H2组分别吸入2％氢气1h.于CLP术后20 h时取8只小鼠,向胃内灌注异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐（FITC-右旋糖酐）,4h后心脏穿刺取血样,测定血清FITC-右旋糖酐的浓度.于CLP术后24 h时取8只小鼠,取血液、肝脏、脾脏和肾脏进行细菌培养,观察菌群移位情况;取小肠组织,透射电镜下观察肠上皮细胞超微结构,光镜下观察肠组织病理学改变并进行评分,采用Western blot法测定肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达水平.结果 与SH组比较,S组和S＋H2组血清FITC-右旋糖酐浓度和肠损伤评分升高,血液、肝脏、脾脏和肾脏的菌群移位增加,肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达上调（P＜0.05）,H2组上述各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与S组比较,S＋H2组血清FITC-右旋糖酐浓度和肠损伤评分降低,血液、肝脏、脾脏和肾脏的菌群移位减少,肠组织Rho、ROCK1和ROCK2的表达下调（P＜0.05）,肠组织病理学损伤减轻.结论 氢气减轻脓毒症小鼠肠损伤的机制与抑制Rho/ROCK信号通路激活有关.
- 张红涛于泳浩刘玲玲杨涛马小叶王国林
- 关键词：脓毒症RHO因子RHO相关激酶类肠损伤
- 氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探讨氢气对重度烧伤小鼠早期肺损伤的影响。方法取160只ICR小鼠，按随机数字表法分为假伤组、氢气组、单纯烧伤组、烧伤＋氢气组，每组40只。单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠背部制作40%TBSA Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）模型，假伤组和氢气组小鼠模拟致假伤。分别于伤后1、6 h，氢气组和烧伤＋氢气组小鼠吸入体积分数2%氢气1 h，假伤组和单纯烧伤组小鼠吸入空气1 h。伤后24 h，各组取6只小鼠肺组织，行HE染色，观察肺组织病理变化，并计算肺组织损伤病理学评分。各组另取8只小鼠，取下腔静脉血和肺组织，采用ELISA法检测血清和肺组织中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、IL－6的含量，分光光度法检测血清和肺组织中SOD活性。各组另取6只小鼠，取动脉血测定PaO2，取肺组织，称量肺湿干质量，计算肺湿干质量比。计算各组剩余20只小鼠伤后7 d内的存活率。对数据行单因素方差分析、LSD检验和log－rank检验。结果（1）伤后24 h，假伤组和氢气组小鼠肺组织未见异常；单纯烧伤组小鼠肺间质水肿，肺泡毛细血管壁严重破裂，出现大量炎性细胞浸润；烧伤＋氢气组小鼠肺间质轻度水肿，肺泡毛细血管充血伴少量破裂出血，炎性细胞浸润较单纯烧伤组少。假伤组、氢气组、单纯烧伤组和烧伤＋氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分分别为（0.7±0.5）、（0.8±0.5）、（6.1±1.0）、（2.8±0.8）分，单纯烧伤组小鼠肺组织损伤病理学评分较假伤组显著升高（P〈0.001），烧伤＋氢气组小鼠肺组织损伤病理学评分较单纯烧伤组显著降低（P〈0.001）。（2）伤后24 h，氢气组小鼠血清和肺组织中HMGB1、IL－6含量与假伤组相近（P值均大于0.05），单纯烧伤组小鼠血清和肺组织中HMGB1、IL－6含量较假伤组显著升高（P值均小于0.001），烧伤＋氢气组小鼠血清和肺组织中HMGB1、I
- 秦超边映雪冯甜甜张金辉于泳浩
- 关键词：烧伤HMGB1蛋白白细胞介素6超氧化物歧化酶氢气
- 富氢液对大鼠早期糖尿病神经痛的影响被引量：12
- 2014年
- 目的 评价富氢液对大鼠早期糖尿病神经痛的影响.方法 健康雄性SD大鼠,体重180 ～ 200g,8周龄,采用腹腔注射1％链脲佐菌素65 mg/kg的方法建立糖尿病模型.取糖尿病模型制备成功的大鼠12只,采用随机数字表法分为2组（n=6）：糖尿病神经痛组（DNP组）和富氢液组（HRS组）.另取血糖正常的大鼠6只作为正常对照组（C组）.HRS组于注射链脲佐菌素后14 d时腹腔注射富氢液5 ml/kg,1次/d,连续14 d,C组和DNP组注射等容量的生理盐水.于链脲佐菌素注射前2d（T0）、注射后7、14、21、28 d（T1-T4）时测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）.T4时痛阈测定结束后测定右后肢运动神经传导速度（MNCV）和神经传导潜伏期.神经功能测定结束后,采用ELISA法测定坐骨神经TNF-α和IL-6的含量,采用免疫组化法检测坐骨神经NF-κB活性.结果 与C组比较,DNP组和HRS组MNCV减慢,神经传导潜伏期延长,T1-T4时MWT降低,T2-T4时TWL缩短,坐骨神经TNF-α、IL-6含量升高,NF-κB活性增强（P＜0.05）.与DNP组比较,HRS组MNCV加快,神经传导潜伏期缩短,L3,4时MWT升高,T4时TWL延长,坐骨神经TNF-α、IL-6含量降低,NF-κB活性减弱（P＜0.05）.结论 富氢液可通过抑制外周神经元NF-κB信号通路减轻大鼠早期糖尿病神经痛.
- 焦洋于洋李波于泳浩
- 关键词：氢糖尿病神经痛
- JNK在氢气改善重度脓毒症小鼠肠屏障功能障碍中的作用被引量：7
- 2016年
- 目的探讨c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)在氢气改善重度脓毒症小鼠肠屏障功能障碍中的作用。方法将80只雄性ICR小鼠按照随机数字表法分为假手术组、氢气对照组、脓毒症组和氢气治疗组,每组20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备重度脓毒症小鼠模型,假手术组和氢气对照组只进行开腹手术而不行盲肠结扎和穿孔。氢气对照组和氢气治疗组于制模后1 h和6 h分别吸入2%的氢气1 h。于制模后20 h时各组取10只,向胃内灌注异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FITC-右旋糖酐),4 h后经心脏穿刺取血并测定血清FITC-右旋糖酐水平。于制模后24 h各组取10只,取腹腔液进行细菌培养并计数菌落形成单位(CFU);取中段小肠组织,采用酶联免疫吸附试验测定肠组织肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平,采用蛋白免疫印迹法测定肠组织JNK的磷酸化水平(p-JNK)以及紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,利用光学显微镜和透射电镜分别观察肠组织病理学改变和肠上皮细胞超微结构的变化。结果假手术组和氢气对照组各指标差异均无统计学意义。与假手术组比较,脓毒症组血清FITC-右旋糖酐、腹腔液细菌培养菌CFU和小肠组织TNF-α、IL-1β和HMGB1明显增加,小肠组织p-JNK表达明显增加并伴随ZO-1和Occludin表达下调(均P<0.05),小肠组织明显损伤伴肠上皮细胞超微结构严重受损。与脓毒症组比较,氢气治疗组制模后24 h时血清FITC-右旋糖酐、腹腔液细菌培养CFU和小肠组织TNF-α、IL-1β和HMGB1明显降低,小肠组织p-JNK表达下调并伴随ZO-1和Occludin表达增加(均P<0.05),小肠组织损伤和肠上皮细胞超微结构受损明显减轻。结论氢气可以通过抑制JNK通路降低小肠组织炎症因子的水平并增加紧密连接蛋白的表达,从而改善重度脓毒症引起的肠屏障功能障碍。
- 张红涛于洋刘玲玲于泳浩王国林
- 关键词：脓毒症JNK丝裂原活化蛋白激酶类白细胞介素1Β高迁移率族蛋白质类紧密连接蛋白
