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国家高技术研究发展计划(2002AA214011): 作品数：48 被引量：255H指数：10; 相关作者：刘志刚张阳德李浩翟登高席浩更多>>; 相关机构：深圳大学中南大学卫生部更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)的克隆表达、纯化及免疫学特性被引量：22: 2006年; 粉尘螨Ⅰ类变应原(Der fⅠ)是粉尘螨Dermatophagoidesfarinae主要变应原,可引发Ⅰ型变态反应。挑取纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR方法有效地扩增出DerfⅠ片段,产物连接入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET24a表达载体上,得到重组质粒pET24a-DerfⅠ,工程菌经IPTG诱导培养,高效表达出DerfⅠ蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。表达产物经亲和层析纯化,用Westernblot及ELISA方法检测免疫学活性,结果表明目的蛋白具有良好的免疫原性。; 朱健琦刘志刚高波吉坤美邢苗; 关键词：粉尘螨变应原纯化

半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒体对外肝癌细胞杀伤作用的实验研究被引量：3: 2004年; 目的研究半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在体外对人肝癌细胞系HepG2的杀伤作用。方法应用电镜下的形态学观察,DNA电泳以及MTT法检测杀瘤活性。结果形态出现明显改变,电镜证实出现细胞凋亡;白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场(MADM-NP+M)组和半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒(Gal-ADM-NP)组抑制率及半数抑制率剂量相似(P>0.05),半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒(Gal-MADM-NP+M)组抑制率明显提高,半数抑制剂量明显降低(P<0.01)。结论实验结果表明,白蛋白磁性阿霉素纳米粒联合磁场、半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒、半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒都具有明显抑制体外培养肝癌细胞生长增殖的作用。半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒对人肝癌细胞杀伤作用较白蛋白磁性阿霉素纳米粒及半乳糖化白蛋白阿霉素纳米粒组为强,作用机制可能与半乳糖配体的特异性介导和人肝癌细胞上半乳糖受体的识别内吞作用及联合外磁场有关。; 张阳德李浩李玉坤龚连生黄秋林孙颖席浩; 关键词：肝癌细胞杀伤药理实验

荧光分光光度法检测半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布的研究被引量：6: 2004年; 目的观察由半乳糖化白蛋白磁性纳米粒运载的阿霉素经舌静脉给药后在大鼠体内的的分布状况。方法全部大鼠随机分为四组,经舌静脉,按分组分别注射相应药物,剂量均为阿霉素2.5 mg/kg体重。取全血、心、肺、肝、脾、肾。全血制成血浆,器官组织制成匀浆,盐酸乙醇法提取阿霉素,用荧光光度计测量。结果静脉注射同等剂量、不同剂型的阿霉素药物后,阿霉素在器官中的蓄积程度从高到低:肝:D靶肝>D非靶肝、C>B>A;心脏、肾、血浆:A > B> D、C;脾:B>A、C、D;肺:B>A>C、D。磁性阿霉素白蛋白纳米粒注入体内后,在心、肺、肝、脾、肾中的药物浓度在15～30 min达峰值,而半乳糖化后,阿霉素的药物峰值提前到5 min或之前。外加磁场和未加磁场的半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒组的药物靶向指数和药物选择指数是均高于磁性白蛋白纳米粒。结论磁性阿霉素白蛋白纳米粒经半乳糖化后,可显著增强阿霉素对肝脏的靶向性,并显著降低心、肺、脾、肾、血浆肝外器官的组织阿霉素浓度。利用外加磁场,可提高阿霉素在肝脏特定部位蓄积的能力。因此,静脉注射半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒是可行的。; 张阳德李玉坤李浩席浩龚连生潘一峰; 关键词：荧光分光光度法

尘螨连续石蜡切片的制备及染色技术被引量：5: 2007年; 研究尘螨连续石蜡切片的制备技术。利用琼脂预包埋后再以塑化石蜡包埋,经切片和HE染色,获得结构完整、定位准确、染色清晰的连续切片。探讨制片过程中一些步骤的改进和注意事项,为尘螨显微结构的形态学研究提供可能,也为免疫组化、原位PCR及过敏性疾病尘螨特异性变应原的定位等研究奠定良好的基础。; 张莺莺刘志刚孙新包莹李盟; 关键词：尘螨琼脂 HE染色

双抗体夹心ELISA检测屋尘螨2组变应原方法的建立: 2007年; 过敏性疾病是临床上的多发病和常见病，尘螨是最常见的过敏原。业已清楚尘螨最主要的致敏成分是Der1、Der2变应原，近年文献报道发现Der2变应原比Der1变应原更稳定及耐降解，Der2与Der1的含量一样高，从而引起了对Der2的更深入的研究，并认为对环境中尘螨含量的监测及评价回避措施有效性等方面用Der2含量更合适。我们建立一种快速、准确、价廉、实用性强的检测屋尘螨2组（Derp2）变应原的以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA方法。现将结果报道如下。; 练玉银刘志刚吉坤美王广伟刘晓宇; 关键词：ELISA检测双抗体夹心屋尘螨变应原原方过敏性疾病

外加磁场对半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在大鼠体内分布的影响被引量：7: 2004年; 目的　观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝脏中的靶向性 ,并观察半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在全身各脏器的分布特征及外加磁场对其分布的影响。方法　大鼠正中开腹 ,肝动脉插管并固定 ,肝动脉注射12 5I半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 (相当于阿霉素0 .5mg/kg) ,左外叶加磁场 ,磁场应用 3 0min ,移去磁场后 ,动物立即处死 ;对照组 :肝动脉注射半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒 ,左外叶不加磁场 ,3 0min后 ,移去磁场后 ,动物立即处死 ,立即取靶区肝、非靶区肝、肾、心、肺、小肠、脾及周围血作γ计数。肝组织作病理切片。结果　注入的纳米粒75 %～ 85 %分布于肝脏 ,其他脏器极少。病理切片显示磁区小动脉见大量纳米粒存在 ,对照组及非磁区肝中纳米粒很少见。结论　半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒在正常肝组织中有明显的磁靶向性 ;在磁场作用下 ,半乳糖化白蛋白磁性阿霉素纳米粒主要分布于肝脏 ,其他脏器含量很少 ;实验组肾、心、肺、小肠、脾及外周血与对照组的放射活性比较明显降低。; 张阳德吴泽建江悍平龚连生潘一峰黄林席浩李玉坤王荣兵翟登高; 关键词：磁性纳米粒肝脏

荧光分光光度法检测纳米粒运载的阿霉素在大鼠体内的分布被引量：7: 2004年; 目的　观察由半乳糖化磁性白蛋白纳米粒运载的阿霉素经舌静脉给药后在大鼠体内的的分布状况。方法　全部大鼠随机分为 4组 ,经舌静脉 ,按分组分别注射 :游离阿霉素组(FADM ) ;磁性阿霉素白蛋白纳米粒 (MADM ) ;半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组 (Gal2 9 ADM ) ;半乳糖磁性阿霉素白蛋白纳米粒 +外加磁场 (Gal2 9 ADM +M ) ,剂量均为阿霉素 2 .5mg/kg体重。取全血、心、肺、肝、脾、肾。全血制成血浆 ,器官组织制成匀浆 ,盐酸乙醇法提取阿霉素 ,用荧光光度计测量。结果　静脉注射同等剂量、不同剂型的阿霉素药物后 ,阿霉素在器官中的蓄积程度从高到低 :肝 :D靶肝 >D非靶肝、C >B >A ;心脏、肾、血浆 :A >B >D、C ;脾 :B >A、C、D ;肺 :B>A >C、D。磁性阿霉素白蛋白纳米粒注入体内后 ,在心、肺、肝、脾、肾中的药物浓度在 15～ 3 0min达峰值 ,而半乳糖化后 ,阿霉素的药物峰值提前到 5min或之前。外加磁场和未加磁场的半乳糖化磁性阿霉素白蛋白纳米粒组的药物靶向指数和药物选择指数是均高于磁性白蛋白纳米粒。结论　磁性阿霉素白蛋白纳米粒经半乳糖化后 ,可显著增强阿霉素对肝脏的靶向性 ,并显著降低心、肺、脾、肾、血浆肝外器官的组织阿霉素浓度。利用外加磁场 ,可提高阿霉素在肝脏特定部位蓄积的能力。; 张阳德李玉坤李浩席浩龚连生潘一峰; 关键词：纳米粒荧光

屋尘螨变应原Der p 1基因原核表达产物的纯化及特性鉴定被引量：9: 2006年; 目的建立屋尘螨主要变应原Derp1蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物并鉴定其免疫原性。方法大量诱导表达含pET24a-Derp1质粒的BL21工程菌,表达产物以重组蛋白包涵体的形式存在,包涵体经洗涤与溶解后,使用结合6组氨酸的镍柱进行亲和层析纯化蛋白质,用稀释复性方法进行重组蛋白的复性,再用屋尘螨过敏性哮喘患者阳性血清经Dot-ELISA方法分析Derp1纯化蛋白的抗原活性。结果分步洗涤可有效去除重组蛋白包涵体沉淀中混杂的多数杂蛋白成分,亲和层析分离可获得高纯度重组变应原Derp1蛋白。Dot-ELISA法检测结果表明经复性并纯化的Derp1蛋白呈强阳性反应,最佳血清稀释度为1∶64,而重组蛋白与正常人血清呈阴性反应。结论纯化后的融合蛋白Derp1具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为有效的屋尘螨变应原诊断试剂和疫苗的候选分子。; 刘志刚杨慧付颖媛高波朱健琦吉坤美; 关键词：屋尘螨变应原 P 复性纯化

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测粉尘螨2组变应原方法的建立被引量：1: 2006年; 尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原（Der1、Der2）。酶联免疫吸附测定（ELISA）是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法．但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2（rDer f 2）．制备免疫血清，建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA，以快速检测Der f2．现报告如下。; 练玉银刘志刚吉坤美王广伟刘晓宇; 关键词：双抗体夹心酶联免疫吸附试验螨变应原粉尘螨双抗体夹心ELISA 原方

纳米载体肝靶向纳米药物研究进展被引量：15: 2003年; 张阳德李浩; 关键词：靶向性药物

国家高技术研究发展计划(2002AA214011)

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