国家自然科学基金(30700708)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 相关作者：唐开福任红李璇田绿胡文艳更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院华蓥市人民医院重庆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录的影响,探讨RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU对PKR磷酸化的调节作用。方法将ALU全基因序列插入pcDNA3.1(-)载体的CMV启动子(一个RNA聚合酶Ⅱ启动子)的下游,构建重组质粒pcDNA3.1-ALU;转染HEK293细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR筛选稳定表达ALU的细胞;用干扰素处理稳定表达ALU序列的细胞,Western blot法检测PKR的磷酸化水平。结果ALU全基因序列插入pcDNA3.1载体的CMV启动子直接下游,能够被RNA聚合酶Ⅱ有效转录;在稳定表达ALU的HEK293细胞中,加干扰素与未加干扰素组PKR的磷酸化水平均明显高于相应的HEK293细胞对照组。结论ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ启动子对RNA聚合酶Ⅱ转录无明显影响,但与RNA聚合酶Ⅲ启动下转录的ALU不同,RNA聚合酶Ⅱ转录的ALU失去了对干扰素的拮抗作用,反而可以通过形成双链RNA的方式激活PKR的活性。
- 杨梅沈薇吴进峰曾贵利王峰任红唐开福
- 关键词：磷酸化干扰素
- 慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA的相关性被引量：4
- 2011年
- 目的分析慢性乙型肝炎患者年龄、血脂代谢与HBV-DNA水平之间的相关性。方法对2007年11月～2009年10月在我院感染科住院的788例慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者(本研究中将HBV-DNA滴度大于1×103拷贝/ml定义为HBV-DNA阳性)的临床资料进行回顾性分析。用Spearman秩相关分析及多重线性回归分析患者年龄及血脂与HBV-DNA的相关性。结果 Spearman秩相关分析显示,在慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者中,HBV-DNA水平与患者年龄呈负相关,与血脂中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及载脂蛋白A-(IApoA-I)呈正相关;多重线性回归分析显示,HBV-DNA水平与患者年龄、血脂中ApoA-I存在线性依存关系。结论慢性乙型肝炎HBV-DNA阳性患者的HBV-DNA水平与其年龄呈负相关,与ApoA-I呈正相关。
- 彭湃澜何松胡文艳李璇田绿任红唐开福
- 关键词：年龄因素血脂
- TSA对不同肝癌细胞株增殖和凋亡的作用及其对HBV复制的影响被引量：10
- 2008年
- 目的:比较组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylase,HDAC)抑制剂HDAC曲古抑菌素A(Trichostain A,TSA)对不同肝癌细胞株和正常肝细胞株增殖和凋亡的作用。初步研究TSA对HBV复制的影响。方法:应用四氮唑蓝(MTT)法,DNA琼脂糖凝胶电泳检测经不同浓度TSA处理过的3种肝癌细胞株HepG2、QGY7701、HepG2.2.15和正常肝细胞株L02,观察细胞增殖和凋亡的改变。用微离子酶联免疫法检测TSA处理组和对照组HepG2.2.15细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量,实时荧光定量PCR检测细胞上清中HBV DNA含量,初步探讨TSA对HBV复制的影响。结果:TSA在一定浓度范围内能明显抑制不同肝癌细胞株的增殖,呈剂量依赖关系。对正常肝细胞株L02的增殖无明显影响。DNA凝胶电泳结果显示:在TSA处理组的3种肝癌细胞株HepG2、QGY7701、HepG2.2.15中可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带,然而,在对照组及正常肝细胞株中未见DNA梯形带。经TSA处理后的HepG2.2.15细胞上清中HBsAg、HBeAg及HBV DNA的含量均高于对照组1倍以上(P<0.05)。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA虽然可抑制肝癌细胞增殖并诱导凋亡,但是,TSA刺激HBV的复制。因此,对HBV阳性的肝癌患者,应尽量避免使用TSA。
- 谢静王锋梅浙川唐开福任红
- 关键词：曲古抑菌素A肝癌细胞株凋亡HBV
- 脱氧氮杂胞苷诱导HepG2细胞表达主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A被引量：1
- 2009年
- 目的观察主要组织相容性复合体Ⅰ类分子A（MICA）在HepG2与L02细胞株中表达的差异及脱氧氮杂胞苷（5-aza-dC）对HepG2细胞株MICA表达的影响，探讨毛细血管扩张眭共济失调突变蛋白（ATM）依赖的DNA损伤途径与5-aza-dC调节MICA表达的关系。方法同时接种并培养L02和HeDG2细胞，在同一时间点收取细胞，流式细胞仪检测细胞膜MICA蛋白表达水平；不同浓度5-aza—dC（0．1、1．0、5．0mmol／L）作用于HepG2细胞不同时间（24、48、72、96h）后，定量PCR检测MICA mRNA水平以寻找5-aza-dC最佳作用浓度和时间；ATM特异性抑制剂咖啡因或RNA干扰技术干扰ATM表达，定量PCR检测细胞mRNA水平，流式细胞术检测细胞膜MICA蛋白表达水平。结果数据比较采用Kruskal-Wallis和Mean-Whitney U方差分析。结果流式细胞结果显示，HepG2细胞高水平表达MICA，而正常肝细胞L02几乎不表达MICA；5-aza—dC处理可上调HepG2细胞MICA的表达（x^2=7．20，P〈0．05），这种上调作用可被ATM特异性阻滞剂咖啡因和ATM特异的小分子干扰RNA所阻断（U=0．00，P〈0．05）。结论MICA在正常肝细胞株中无表达，在肝癌细胞株中高表达；5-aza-dC可诱导HepG2细胞MICA的表达，其机制可能与5-aza-dC引起的ATM依赖的DNA损伤途径有关。
- 吴进峰曾贵利沈薇杨梅王峰田绿李璇胡文艳李小平任红唐开福
- 关键词：DNA损伤主要组织相容性复合物脱氧胞苷
- 抑制Rent1表达对HeLa细胞黏附能力的影响
- 2009年
- Rent1是无义介导的mRNA降解(NMD)通路中的关键因子之一,通过引导含有提前出现的终止密码子(PTC)的mRNA至P-body,从而引发mRNA降解。为了进一步研究Rent1的生理功能,应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Rent1的表达。试验发现,抑制Rent1的表达能够增强HeLa细胞对纤维粘连蛋白的黏附能力,另外,抑制Rent1的表达能够增加整合素基因ITGA2、ITGA3、ITGA6、ITGB5的表达。
- 宋关斌唐开福
- 关键词：细胞粘附整合素
- 长片段RNA抑制HepG2.2.15细胞中HBV基因的表达和复制
- 2011年
- 目的 评估长的反义RNA干扰片段在培养细胞株中对HBV复制的抑制效应.方法将HBV基因组S区的全部核苷酸序列插入至pTARGETTM载体中,并将重组载体转染入HepG2.2.15细胞中.用酶联免疫吸附法检测HBsAg与HBeAg水平,用荧光定量PCR法检测HBVDNA水平.对数据采用多个独立样本Kruskal-Wallis检验与两两比较的Mann-Whitney U检验.结果 经过处理后,HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg表达量（A值）在HBS2组（携带长片段反义RNA）为0.621±0.027,在HBS4组（携带正义RNA）为3.399±0.018,对照组为2.232±0.187;HBeAg表达量（A值）在HBS2组、HBS4组和对照组分别为0.749±0.019、1.548±0.025和1.570±0.044; HBV DNA水平（×104拷贝/ml）在HBS2组、HBS4组、对照组分别为1.597±0.082、3.381±0.297和3.610±0.063.与对照组相比,HBS2组HBsAg、HBeAg和HBV DNA表达量均降低,统计量Z值均为-2.309,P值均＜0.05; HBS4组HBsAg表达量增高（Z=-2.309,P＜0.05）,而HBeAg和HBV DNA表达量无明显差异,统计量Z值分别为-0.866、-1.155,P值均＞0.05.结论 长片段反义RNA能抑制HBV基因的表达和病毒复制.
- 田绿何松李璇胡文艳彭湃澜王峰高昌益任红唐开福
- 关键词：反义RNA
