目的通过改变原噬菌体ms2包膜蛋白RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量及亲和力，构建新的原核表达系统，探讨表达内含长片段（达到理论上的1900bp）RNA的耐RNase病毒样颗粒的可能性。方法首先设计含HindⅢ和NotⅠ酶切位点的引物，扩增ms2包膜蛋白的编码成熟酶蛋白和衣壳蛋白的1700bp序列，并将原来的19mer的包装位点序列改变为C-5变异体（19 bp stem-loop结构中-5位的尿嘧啶改变为胞嘧啶），HindⅢ和NotⅠ酶切后，与用同样酶切的表达载体pET-28（b）相连接，得到重组载体pET-ms2-pac。应用重叠PCR扩增3种病毒的5段嵌合体序列（包括3段SARS-CoV基因、一段HCV基因和一段H5N1基因），并在SARS-CoV3和HCV序列之间插入一个19mer的变异体包装位点序列，在设计引物时，使嵌合体两端含有NotⅠ酶切位点，与NotⅠ酶切的重组载体pET-ms2-pac相连接，构建得到具有2个变异包装位点的表达载体pET-ms2-3V。同时构建3种对照重组表达载体，分别测定N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3 V 4种重组表达质粒表达产物的260nm吸光度（A260）值，根据公式A260=0．125mg／ml计算4种表达产物的表达效率。结果成功构建了4种原核表达载体：pET-ms2-3V、P-3V-pET-P、N-P3V-pET-P和N-P3V-pET-C。pET-ms2-3V和P-3V-pET-P经原核表达后得到含全长为1891的5段嵌合体RNA的病毒样颗粒；N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C其原核表达产物病毒样颗粒中仅包装了1200bp的目的嵌合体RNA。N-P3V-pET-P、N-P3V-pET-C、P-3V-pET-P和pET-ms2-3V的表达效率分别为0．23、0．35、0．35和0．51mg／ml。N-P3V-pET-C比N-P3V-pET-P表达效率高52％，而pET-ms2-3V比P-3V-pET-P表达效率高38％。所包装的RNA具有耐RNase和DNase消化的特性以及良好的不同温度条件下的稳定性。结论通过改变噬菌体ms2 RNA包装位点（19碱基的茎环结构）的数量，可构建能表达内含达到理论上的约1900bp外源RNA�
