广东省大学生创新实验项目(1057113038)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：陈章权王森刘倩何素辉何玲鸽更多>>
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- IL-37融合EGFP真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：3
- 2015年
- 目的:构建白介素-37(interleukin-37,IL-37)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合基因真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法 :通过PCR分别扩增出IL-37和EGFP基因,经酶切和测序鉴定正确后,克隆入真核表达载体pc DNA3.1,用Linker(G4S)3连接2个目的基因片段,构建IL-37-GFP融合基因真核表达质粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP,将其转染到293T细胞中,观察荧光产生情况,用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测IL-37的表达情况。结果:经酶切和测序鉴定,由linker连接的IL-37-GFP融合基因正确克隆入表达载体pc DNA3.1,重组表达质粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP转染293T细胞后,用荧光显微镜检测显示荧光蛋白在细胞中表达,RT-PCR与Western blot均检测到高水平IL-37 m RNA和IL-37蛋白的表达。结论:成功构建了IL-37-融合报告基因EGFP的真核表达载体,并在293T细胞中得到了有效表达,为进一步研究IL-37的功能和表达调控奠定了实验基础。
- 刘倩梁庄严何素辉王森陈章权
- 关键词：绿色荧光蛋白293T细胞
- IL-37b基因克隆及其真核的表达载体构建被引量：2
- 2013年
- 目的克隆IL-37b编码区基因,并构建其真核表达载体。方法通过RT-PCR扩增IL-37b编码区基因,DNA测序鉴定后,将阳性克隆提取质粒,通过酶切连接将目的片段定向克隆至真核表达载体pcDNA 3.1,通过菌落PCR和DNA测序等进行鉴定。结果凝胶电泳显示RT-PCR扩增出1条大小约650 bp特异条带,DNA测序结果显示获取了大小为654 bp的IL-37b编码区基因。PCR和DNA测序对所构建的真核表达载体鉴定结果表明IL-37b编码区基因正确插入真核表达载体pcDNA3.1。结论成功克隆了IL-37b编码区基因,并成功构建其真核表达载体,为下一步IL-37b生物学作用的深入研究奠定了基础。
- 何玲鸽赵付前林妙芬祝惠钦王森陈章权
- 关键词：基因克隆真核表达载体
