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2004年黑龙江省新城疫病毒分子流行病学分析被引量：12: 2005年; 2004年从黑龙江省部分鸡场疑似新城疫(ND)病死鸡和鸽体内分离到9株NDV。对这9株NDV生物学特性进行测定,并对其F基因包括裂解位点在内的540bp片段进行了克隆、测序和同源性分析。结果表明,9株NDV鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)分别在47.8h～78.4h和1.51～2.00之间;8个分离株在F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQKRF117,1个分离株F蛋白裂解位点氨基酸顺序为112RRQRRF117,表明了它们全为ND中、强毒株。同源性分析显示,9株NDV分离株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为79.7%～99.7%和79.8%～100%;系统发生树分析表明,6株分离株与台湾株(TW98、TW99和TW2000等)遗传距离较近,可能有共同的起源,为基因Ⅶe型NDV,2株为鸽源NDV基因Ⅵ型,1株与我国特有的F48E9遗传距离最近,为基因Ⅸ型NDV。; 连宏军刘培欣闫丽辉曹殿军孙建宏梁宏志韩正博冉多良; 关键词：流行病学分析裂解位点氨基酸同源性系统发生树病死鸡鸽源

新城疫病毒V4株NP和P基因及其间隔区序列的克隆与分析被引量：2: 2006年; 采用RT-PCR技术克隆了新城疫病毒(NDV)V4株长约4 200 bp的核苷酸序列,并进行了序列测定与分析。结果表明,该序列中包含有NDV V4株NP基因编码区、NP和P基因间隔区以及P基因的全部核苷酸序列。NDV V4株NP和P基因与其他8个NDV毒株相应部分进行同源性比较,与Quuesland V4株的同源性最高。NDV V4株NP和P基因间隔区序列与其他13株NDV毒株相应部分的比较结果表明,F48E9等强毒株较La sota等弱毒、无毒毒株和试验用V4株在这个区域多了6个碱基,这6个碱基插入的位置在La sota等弱毒、无毒毒株全基因组序列的1647-1648 nt处;参比的14株NDV在这个区域的同源性为63．9％-100％,弱毒株之间的同源性较高,弱毒株与强毒株之间及强毒株之间的同源性差异较大。; 刘芳宁闫丽辉曹殿军刘培欣杨增岐; 关键词：新城疫病毒 NP基因 P基因克隆

新城疫病毒分子生物学概述: 新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) 引起的一种禽类急性、高度接触性传染病。ND常呈败血症经过,主要特征是呼吸困难、下痢、神经机能紊乱...; 闫丽辉曹殿军; 文献传递

新城疫病毒F48E9株M和NP基因的原核表达被引量：7: 2008年; 根据新城疫病毒(NDV)F48E9国内标准强毒株编码序列设计了2对特异性引物,分别用于扩增M和NP基因。经序列测定,将其克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,转化E.coliBL21(DE3),筛选表达NDV F48E9株M蛋白和NP蛋白的菌株。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析结果表明,NDV M蛋白在E.coliBL21(DE3)内以可溶形式存在,而NP蛋白以包涵体的形式表达。用纯化的M和NP蛋白免疫鸡制备超免疫血清,进行Western-blot分析;结果,它们可以与真核表达系统表达的M和NP蛋白以及NDV发生特异性反应,表明,原核表达系统表达的NDV M和NP蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。; 闻晓波吴芬芳闫丽辉曹殿军刘培欣刘春国孔宪刚; 关键词：新城疫病毒 M基因 NP基因原核表达

新城疫病毒V4株主要基因的克隆与序列分析被引量：1: 2007年; 设计4对引物，利用RT—PCR技术分别扩增出新城疫病毒（NDV）V4株长约4.2、4.1、4.1、3.5kb的4个互相重叠的核苷酸片段，并分别进行了克隆和序列测定。将这4个片段的核苷酸序列拼接后，得到长为15 061 bp的核苷酸序列。该序列包含有NDVv4株结构基因NP的全部编码区和5’端非编码序列，结构基因P、M、F、HN及L基因的全部编码区和非编码区序列，各结构基因之间的间隔序列以及基因组5’端部分尾巴序列（108bp）。序列比较分析表明，NDVv4株F蛋白裂解位点序列为^112GKQGRL^117，HN基因编码616个氨基酸，符合无毒株的特征；NDVv4株同基因组长度为15 192 bp的毒株一样，在基因组的1647～1648bp间比基因组长为15192bp的毒株少了6个碱基。; 刘芳宁闫丽辉曹殿军刘培欣杨增岐; 关键词：新城疫病毒克隆

13株新城疫病毒强毒株的分离鉴定及部分生物学特性被引量：11: 2006年; 2004年-2005年从黑龙江省11个地区鸡场、鸽场、鹅场疑似新城疫(ND)病死鸡、鸽、鹅体内分离到24株具有血凝活性的病毒,经HA、HI试验和电镜观察证实了13株病毒为NDV。其鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(IC-PI)分别为36.8 h^73.6 h和1.51~2.00之间,属于NDV强毒株或中强毒株。除HLJ-12-04株外,强毒株的血凝素热稳定性较差,属快速或中速血凝解脱型;弱毒株的血凝素热稳定性好,属慢速血凝解脱型。所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大,对马和兔的红细胞凝集无规律。; 连宏军闫丽辉刘培欣曹殿军韩正博孙建宏梁宏志; 关键词：新城疫病毒生物学特性毒株

新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究被引量：6: 2008年; 为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化。2周后用相同剂量的VLPs加强免疫。二免后2周以3.16×103EID50的F48E9株强毒滴鼻攻毒。攻毒前,LaSota灭活苗、LaSota+20μgVLP和不同剂量VLPs组(10μg、20μg、25μg)HI效价分别为28.3、28.9、24.1、26.1、26.7;攻毒后,10μg和20μgVLP免疫组仅能提供了80%和90%的保护率,但与LaSota灭活苗、LaSota+20μgVLP一样,25μgVLP试验组却能够完全抵抗致死剂量的NDV强毒攻击。本试验表明,ND-VLPs具有良好的免疫原性,25μgVLP诱导机体产生的免疫应答能抵抗致死剂量强毒的攻击。ND-VLPs有可能用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗。; 吴芬芳闫丽辉曹殿军刘培欣闻晓波孔宪刚; 关键词：新城疫病毒病毒样颗粒免疫原性免疫效力

新城疫病毒V4株L基因的克隆与序列分析被引量：5: 2004年; 设计了 2对引物V4L1、V4L2和V4L3、V4L4 ,用RT PCR法对新城疫病毒 (NDV )V4克隆株的L基因进行了分段克隆。用V4L1、V4L2扩增出约 4 .1kb的V 4LA片段 ,用V4L3、V4L4扩增出约 3.5kb的V 4LB片段 ,分别对克隆出的 2个片段进行序列测定 ,并用DNAsis软件比较分析后进行拼接 ,得到长约 7.2kb、包含有NDVV4克隆株L基因全长的核苷酸序列。NDVV4克隆株L基因mRNA全长为 6 70 4bp ,拥有 1个 6 6 15bp的开放阅读框 ,推测其编码的氨基酸数为 22 0 4个。氨基酸同源性分析表明 :V4克隆株与HB92V4株L基因的同源性为 99.0 % ,与LaSota、B1、B1T(美国Takaaki分离株 )、BeaudetteC、Clone30、F4 8E9、SF0 2和ZJ1株的同源性为 94 .1%～96 .5 %。; 刘芳宁闫丽辉曹殿军刘培欣杨增岐张淑霞; 关键词：新城疫病毒克隆

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