转基因生物新品种培育专项(2009ZX08012-017B)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
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- 相关机构：中国农业大学北京工商大学更多>>
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- 双抗夹心酶免疫法检测转Bt基因抗虫棉种子的研究被引量：3
- 2013年
- 应用中国农业大学化控中心筛选的抗Bt Cry1Ac蛋白鼠单克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了Bt Cry1Ac蛋白的双抗夹心酶联免疫检测法(Sandwich ELISA)。该方法的检测范围为0.78～50.0 ng.g-1,线性回归方程y=0.6634x-1.7387,决定系数为0.992。该方法与国外商业化试剂盒检测结果完全一致,可用于转基因抗虫棉Bt毒蛋白定性和定量检测。采用所建立的方法对亲本之一为非转基因抗虫棉的杂交F1、F2种子进行检测,结果 F1全部为阳性,F2阴性和阳性数量比为1∶3,符合性状分离定律;此外,模拟检测种子的偶然基因改造成分混杂(Adventitious Presence,AP)检测结果为:对于Bt毒蛋白含量在140 ng以上的单粒种子,最低检测比例为1∶110。
- 孙硕张坤谭桂玉曹振南铁贵王保民
- 关键词：转BT抗虫棉种子纯度
- 转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究被引量：6
- 2013年
- 将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30（＋）-pat并在大肠杆菌中进行表达，分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000，单抗效价为5×10^4；单抗为IgGl类，轻链为，（型。基于抗pat蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法（SandwichELISA）。检测范围为1．6～100μg／L，线性回归方程y=0．6914x-2．572，决定系数为0．9951。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量，其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白，其余均未检出pat蛋白。
- 王敏张亮张威曹振谭桂玉南铁贵王保民
- 关键词：转基因作物
- 高温处理对转基因作物种子Bt蛋白含量的影响被引量：4
- 2013年
- 转基因作物食品安全问题日益受到社会关注,作物种子作为食物的重要来源之一,转基因作物种子的安全性研究更有待加强。分别利用转Bt基因棉花和玉米品种及非转基因品种种子进行高温处理(55-130℃),并用双抗夹心酶免疫检测方法(ELISA)研究其中的外源Bt蛋白的动态变化过程。结果表明,不同作物种子中的Bt蛋白对高温的耐受程度不同,棉花种子中Bt蛋白较玉米种子耐高温能力强;高温处理条件下,种子中的Bt蛋白在10 min内含量显著下降,其后降解缓慢;130℃以上的高温处理条件下,玉米和棉花种子中的外源Bt蛋白均能显著降解。
- 张坤谭桂玉王保民南铁贵
- 关键词：高温BT蛋白种子
