江苏省自然科学基金(BK2008164)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：刘增礼石怡珍汤亚莉王浩炜马孝明更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院开平市中心医院中国科学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人端粒酶逆转录酶核心启动子的克隆
- 2009年
- 目的克隆出人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因核心启动子,为构建hTERT核心启动子调控的重组腺病毒提供实验基础。方法提取肝癌细胞HepG2基因组DNA作为模板,进行PCR扩增,扩增产物酶切后亚克隆至pcDNA3.1(+)质粒。对重组体进行酶切和测序鉴定。结果PCR扩增出约250 bp的目的片段,经酶切和测序鉴定表明质粒构建成功。结论hTERT核心启动子的成功克隆,为进一步实验提供了基础。
- 张俊王爱东申咏梅石怡珍崔学军刘增礼欧阳松应
- 关键词：端粒酶端粒酶逆转录酶启动子
- Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立被引量：1
- 2012年
- 目的构建早期生长反应基因-1(Egr-1)启动子调控人钠碘转运体(hNIS)基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用。方法以Egr-1/pMR18T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL*-hNIS/pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENE HD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela-Egr-1-hNIS。分别采用流式细胞仪、RT-PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达。动态摄取碘-125实验观察Hela-Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela-NIS(+)给予不同剂量的X线辐照前后的摄碘功能。未转染的Hela细胞作为阴性对照组。结果成功构建重组质粒Egr-1-hNIS/pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela-Egr-1-hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11.2%;RT-PCR检测到Hela-Egr-1-hNIS有NIS mRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达。动态摄碘实验提示Hela-Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍;辐照后摄碘能力增强,在0～6 Gy范围内与辐射剂量成正相关(r=0.960,P<0.05);而Hela-NIS(+)组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性(r=-0.770,P>0.05)。结论成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果。
- 吴强乐许袁琦黄宏石怡珍刘增礼
- 关键词：早期生长反应基因-1钠碘转运体宫颈肿瘤放射性核素
- hNIS基因转染介导Hela细胞移植瘤放射性核素显像和治疗的实验研究被引量：4
- 2011年
- 目的 利用131I对转染hNIS基因的宫颈癌Hela-NIS（＋）细胞移植瘤进行显像及治疗实验研究,评价hNIS基因转染介导131I治疗宫颈癌的可行性.方法 （1）利用Hela-NIS（＋）细胞和未转染hNIS的Hela细胞分别建立荷宫颈癌裸鼠模型,进行131I及99TcmO4-显像,观察移植瘤的显影情况,并计算移植瘤部位与对侧相同部位的T/B比值.（2）通过腹腔注射法观察比较74,111和148 MBq131I对荷Hela-NIS（＋）宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用,另设不行任何治疗的对照组.用SPSS 13.0软件,样本均数间差异行t检验.结果 （1）成功构建荷Hela-NIS（＋）裸鼠移植瘤与荷Hela裸鼠移植瘤模型.131I显像示荷Hela-NIS（＋）裸鼠移植瘤部位明显放射性浓聚,注射后8 h T/B比值最高达17.34,而未转染hNIS基因的荷Hela裸鼠移植瘤部位始终未见明显的放射性浓聚.99TcmO4-显像示荷Hela-NIS（＋）裸鼠移植瘤部位在注射后25 h内持续放射性浓聚.（2）经不同剂量的131I治疗后2～3周起,各治疗组荷Hela-NIS（＋）裸鼠移植瘤生长开始受到抑制,移植瘤体积有不同程度缩小.111MBq组和148 MBq组的移植瘤抑制率差异无统计学意义（t=0.13～2.17,P＞0.05）,但二者均明显高于74 MBq组的移植瘤抑制率（t=2.74～5.75,P＜0.05）.对照组荷Hela-NIS（＋）裸鼠移植瘤持续生长.结论 荷Hela-NIS（＋）宫颈癌裸鼠移植瘤可明显聚集131I及99TcmO4-,且在较长时间内持续清晰显影;131I体内治疗效果显著.
- 王浩炜汤亚莉石怡珍马孝明刘增礼
- 关键词：碘放射性同位素放射性核素显像
- 稳定表达hNIS基因的人宫颈癌HeLa细胞系的建立及鉴定被引量：1
- 2011年
- 宫颈癌是世界范围内最常见的妇科恶性肿瘤,近年其发病率有增高趋势,且发病年龄呈年轻化趋势。随着年轻患者对生活质量要求的提高,需进一步探索和改变宫颈癌的治疗模式。
- 凌莉汤亚莉张弘石怡珍刘增礼
- 关键词：钠碘转运体转染宫颈癌放射性核素
- hNIS基因转染介导宫颈癌细胞放射性碘摄取的体内外实验研究
- 目的探讨NIS基因转染介导~(131)I对宫颈癌模型进行治疗的可行性。方法(1)扩增FL~*-hNIS/pcDNA3 DH5α菌种,提取质粒FL~*-hNIS/pcDNA3,酶切电泳鉴定,用FUGENEHD将质粒转染入H...
- 石怡珍汤亚莉刘增礼
