国家自然科学基金(30872861)
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
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- 构建Ad-XIAP感染原代培养老年性聋模型小鼠皮层神经细胞的实验研究
- 2011年
- 目的构建携带绿色荧光(GFP)的X染色体连锁凋亡抑制蛋白基因的重组腺病毒载体(Ad-X IAP)感染体外原代培养老年性聋小鼠模型(C57BL/6J)皮层神经细胞,为后续体内基因治疗实验提供体外研究基础。方法体外培养C57BL/6J小鼠皮层神经细胞,-βTubu lin鉴定其纯度;利用Ad-Easy载体系统通过细菌内同源重组法构建携带X IAP基因的腺病毒表达载体,筛选鉴定并线性化后获得重组腺病毒载体,TC ID50法测定其滴度后转染体外原代培养的皮层神经细胞,观察其感染效率并用RT-PCR检测细胞内X IAP-mRNA表达量。结果 PCR及酶切鉴定穿梭质粒含有X IAP基因,经筛选和鉴定的Ad-X IAP感染皮层神经细胞72h后观察到细胞携带绿色荧光最强,此时X IAP-mRNA表达量最高。结论成功构建了携带X IAP基因的高滴度重组腺病毒载体,滴度高、皮层神经细胞感染率大于90%,为后续试验提供了体外研究基础。
- 胡玥陈继川吴晓平任红苗姬长友
- 关键词：皮层神经细胞原代培养
- 年龄相关性听力损失小鼠听皮层神经元凋亡及听功能变化被引量：5
- 2013年
- 目的探讨年龄相关性听力损失C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元凋亡及听功能变化。方法选取年轻组(2月龄)和老年组(10月龄)C57BL/6J小鼠为研究对象,通过听性脑干反应(ABR)检测并比较年轻组与老年组小鼠听力变化;用HE染色法、Tunel-POD法观察并比较两组小鼠初级听皮层神经元大体形态及凋亡比例的差异。结果老年组小鼠较年轻组小鼠听阈明显提高。老年组C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元凋亡比例较年轻组增多。结论初级听皮层神经元的凋亡与C57BL/6J小鼠年龄相关性听力损失密切相关。
- 任红苗王宜南陈继川
- 关键词：凋亡
- C57BL/6J胚鼠听皮层神经干细胞分离培养的研究
- 2013年
- 目的探讨酶消化法和机械吹打法对胚鼠听皮层神经干细胞分离培养的影响和作用。方法取孕14d的C57BL/6J小鼠12只,分成两组,每组6只,于解剖显微镜下分离胚鼠大脑听皮层区域,分别用酶消化法和机械吹打法进行原代培养。用免疫荧光技术对培养后的神经干细胞进行Nestin鉴定,并进行神经干细胞分化能力鉴定,利用CCK-8检测两种方法培养的细胞的增殖情况。结果利用酶消化法分离下来和增殖形成的神经干细胞明显多于机械吹打法,且形成的神经干细胞球比较规则,酶消化法分离下来的细胞数目为(1.57±0.05)×105个/ml,而机械吹打组分离下来的细胞数目为(1.07±0.04)×105个/ml,差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8检测酶消化法增殖快于机械吹打法,差异有统计学意义(P<0.05)。两种方法培养的细胞免疫荧光鉴定Nestin表达均为阳性,诱导分化形成表达β微管蛋白(β-tubulinⅢ)阳性的神经元和表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞。结论用酶消化法对C57BL/6J胚鼠听皮层神经干细胞进行分离培养优于机械吹打法。听皮层神经干细胞具有自我增殖克隆和多向分化能力。
- 孟德静陈继川任红苗
- 关键词：酶消化法神经干细胞
- XIAP在年龄相关性听力减退C57BL/6J小鼠初级听皮质的表达被引量：2
- 2009年
- 目的探讨幼年和10月龄C57BL/6J小鼠听力及初级听皮质(AⅠ)中凋亡抑制蛋白XIAP的年龄相关变化。方法检测两组C57BL/6J小鼠听性脑干反应(ABR);免疫组织化学法染色检测两组C57BL/6J初级听皮质神经元凋亡抑制蛋白XIAP的表达情况。结果与幼年C57BL/6J小鼠相比,10月龄C57BL/6J的ABR反应阈值更高,凋亡抑制蛋白XIAP的表达显著减少。结论随年龄增长C57BL/6J小鼠的听力减退,同时C57BL/6J小鼠大脑初级听皮质凋亡抑制蛋白表达减少,XIAP的表达水平可能与C57BL/6J小鼠听力减退有关。
- 李洪波陈继川姬长友
- 关键词：XIAP凋亡听力减退年龄
- 重组腺病毒载体介导外源性XIAP抑制听皮层GABA能神经元凋亡与老年性聋相关性研究进展被引量：1
- 2011年
- 老年性聋是一类随年龄增长而出现的以双耳进行性高频听力下降为主要表现的慢性退行性疾病。研究表明,大于65岁的老人中,40%以上受老年性聋困扰[1,2]。随着中国逐步进入老龄化社会,老年性聋因严重影响老年人的生活质量而受到社会关注。目前,老年性聋的发病机制并不十分清楚,但研究发现外周听觉系统和听觉中枢功能失调共同参与了老年性聋的发病,其中听觉中枢神经细胞凋亡引起听觉中枢功能障碍是老年性聋患者听力下降、
- 胡玥姬长友陈继川
- 关键词：老年性聋腺病毒载体介导GABA能XIAP听皮层外源性
- 封闭环境对C57BL/6J小鼠听功能及听皮层GABA能神经元凋亡的影响
- 2012年
- 目的探讨封闭环境对老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元凋亡的影响。方法构建封闭环境,将2、10月龄C57BL/6J小鼠(实验组,各20只)放入其中,并将另2、10月龄C57BL/6J小鼠各20只设立为开放环境对照组,饲养2月后比较不同环境各组动物ABR反应阈变化,免疫荧光法及tunel法检测听皮层GABA能神经元凋亡水平。结果实验组各频率ABR阈值明显高于对照组,尤其以高频明显(P<0.05);tunel检测证实实验组动物听皮层GABA能神经元凋亡显著增多。结论封闭环境能促进老年性聋动物模型C57BL/6J小鼠听皮层GABA能神经元的凋亡,可能是老年性聋的重要环境因素。
- 吴晓平陈继川陈炜
- 关键词：老年性聋凋亡GABA能神经元
- C57BL/6J小鼠初级听皮层神经元凋亡与caspase-3表达的年龄相关性改变被引量：3
- 2009年
- 目的探讨不同月龄C57BL/6J小鼠初级听皮层中caspase-3的表达及初级听皮层神经元凋亡情况,探讨两者之间的关系以及caspase-3、凋亡在老年性聋发生、发展中的作用。方法分别选取2月龄(15～20克)和10月龄(45～60克)C57BL/6J小鼠各15只,免疫组织化学法染色检测两组C57BL/6J小鼠初级听皮层caspase-3的表达情况,末端转移酶介导的原位缺口末端标记染色(TUNEL)技术检测两组小鼠初级听皮层神经元凋亡状况。结果与2月龄组C57BL/6J小鼠相比,10月龄组C57BL/6J小鼠初级听皮层中caspase-3的表达显著增多,初级听皮层神经元凋亡数目明显增多(P值均<0.01),且caspase-3的表达与神经元的凋亡呈正相关(r=0.5202)。结论caspase-3的表达可能在老年性聋的发生、发展过程中起重要作用,它参与了小鼠初级听皮层神经元的凋亡调控过程,可能是老年性聋的发病机制中一个重要因素。
- 李洪波陈继川姬长友
- 关键词：凋亡听力减退年龄相关
- 老年性聋的神经干细胞移植治疗及其前景展望被引量：2
- 2013年
- 老年性聋是指因年龄的增长，听觉器官随同身体其他组织器官一起所发生的缓慢进行性听觉性老化过程，并出现听力减退的生理现象。老年性聋是外周听觉神经系统和中枢神经系统联合降低衰变的结果，听力减退常从高频开始，逐渐向低频区扩展。老年性聋相关常规治疗效果不明显，而近年提出的神经干细胞移植治疗神经退行性疾病为老年性聋的治疗带来了新的曙光。
- 任红苗王宜南陈继川
- 关键词：老年性聋毛细胞神经干细胞神经干细胞移植治疗
