浙江省科技攻关计划(2008C21011)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- TB-DNA平板高效筛选桔青霉核酸酶P1产量突变株被引量：1
- 2012年
- 为从大量突变株中快速筛选桔青霉核酸酶P1高产株,建立TB-DNA平板筛选方法,并考察多种因素对TB-DNA平板上核酸酶P1粉红酶解圈形成的影响。在优化反应条件(蒸馏水pH5.8,锌离子1×10-3mol/L、钙离子2.5×10-5mol/L、甲苯胺兰浓度2.5×10-4mol/L及DNA加入0.1%)下,经40℃反应12h,核酸酶P1活力对数值与变色圈直径平方值呈正比关系(R2=0.9965)。不同桔青霉菌株核酸酶P1活力检验结果表明,该方法所得核酸酶活力与传统紫外比色法所得酶活力相比,两组数据线性相关(R2=0.9863,p<0.0001);t-检验及方差分析(one-wayANOVA)结果表明二者不存在显著差异(p<0.05)。TB-DNA平板法可用于核酸酶P1高产菌株的高效筛选。
- 梁新乐孙隽张虹陈敏
- 关键词：桔青霉核酸酶P1高通量筛选甲苯胺蓝
- 响应面法优化桔青霉F-5-5核酸酶P1发酵培养基碳氮源被引量：5
- 2011年
- 桔青霉(Penicillium citrinum)CICC 4011菌株经60 Coγ射线诱变后,由其高产突变株经基因组重排育种筛选获得核酸酶P1高产菌株F-5-5,在马铃薯葡萄糖培养基中产酶达978.6U/ml。经Placket-Burman试验筛选得出影响菌株产酶的3个显著因素,为葡萄糖、可溶性淀粉和玉米浆干粉。在此基础上,采用响应面中心组合设计,对3因素最佳水平范围进行研究,利用Minitab15软件进行回归分析,结果表明,葡萄糖、可溶性淀粉和玉米浆干粉的含量分别为30.89、42.46和11.60g/L时,核酸酶P1理论产量为1687.16U/ml,实际发酵单位提高到1672.6U/ml。
- 梁新乐黄莹莹张虹陈敏刘璇
- 关键词：桔青霉培养基优化核酸酶P1响应面法
- 桔青霉形态分化与核酸酶P1产量突变关系研究被引量：5
- 2009年
- 桔青霉(Penicillium citrinum)CICC 4011菌株经60Coγ射线辐照处理以及多菌株连续多轮原生质体融合后,变异株产核酸酶P1能力与形态性状出现了较大差异。研究表明黄绿色或灰绿色菌落产酶水平较高,绿色或艾绿色菌株产酶水平较低。选择不同产色特征的变异株(J1Y6、F-13、F-R-33)与CICC 4011进行比较,表明4株桔青霉生长速度没有明显差异。融合子F-R-33菌落呈深艾绿色,产水溶性红色素,核酸酶P1低产(23.1U/ml);诱变菌株J1Y6菌落呈黄绿色,产水溶性黄绿色素,核酸酶活较高(167.3U/ml);融合子F-13菌落呈灰绿色,不产水溶性色素,核酸酶活较高(578.6U/ml)。电镜观察发现J1Y6、F-13分生孢子梗上帚状分枝减少,菌丝生长粗壮,产孢能力不及4011及F-R-33。核酸酶P1和色素虽然都是次级代谢产物,但核酸酶P1的合成明显与生长相关,而色素的合成则表现出非相关性。诱变株RAPDDNA多态性检测率为70%。UPGMA聚类分析,菌株F-R-33与出发菌株4011聚为一类(相似系数0.9),核酸酶P1高产菌株J1Y6和F-13聚为一类,高产与低产突变株的DNA多态性表现出明显差异(相似系数0.8)。
- 梁新乐寿谦张虹陈敏刘璇
- 关键词：桔青霉分化RAPDDNA多态性核酸酶P1
