国家自然科学基金(30170900)
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
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- 趋化因子拮抗剂Met-RANTES延缓移植物排斥反应研究
- 2005年
- 目的:探讨趋化因子拮抗剂Met-RANTES对内皮细胞与异体T细胞趋化、黏附作用的影响。方法:采用T细胞与血管内皮细胞混合培养的方法,观察使用趋化因子拮抗剂Met-RANTES干预前后内皮细胞趋化因子的表达,以及血管内皮细胞对T细胞趋化、黏附率的变化。结果:血管内皮细胞与T细胞混合培养可见内皮细胞表达的趋化因子RANTES、MCP-1及MIP-1α,RANTES的表达率增高。趋化因子拮抗剂Met-RANTES可以显著减低内皮细胞对T细胞的趋化和黏附。结论:趋化因子拮抗剂Met-RANTES通过减低内皮细胞与异体T细胞的趋化与黏附而发挥其作用。
- 孙志成郑红李世荣吴军
- 关键词：RANTES内皮细胞T淋巴细胞
- 人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达与初步纯化被引量：1
- 2006年
- 目的确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件。方法将pET32a(+)/SLC分别转化大肠杆菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3)、BL21trxB(DE3)plusS,选择最佳宿主菌,优化诱导表达的条件,将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化。结果pET32a(+)/SLC最佳宿主菌为BL21trxB(DE3),优化的表达条件为37℃、1mmol/L IPTG诱导3h,SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小约为30kd,占菌体总蛋白的50%以上,可溶性蛋白约占50%。用SLC多克隆抗体进行Western blot分析显示,在30kd处出现单一阳性条带,而对照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)诱导菌则无此反应。SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化。结论初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中表达和纯化的方法。
- 罗福康沈大斌郑红顾涛
- 关键词：宿主菌蛋白纯化趋化因子大肠杆菌
- 人趋化因子受体CCR6的克隆、表达及其功能分析
- 2006年
- 目的构建人趋化因子受体6(CCR6)cDNA序列的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为研究CCR6生物学功能和筛选CCR6拮抗剂奠定基础。方法采用RT-PCR方法从人扁桃体克隆CCR6受体的DNA片段,并将该片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CCR6;将该质粒pcDNA3.1(+)-CCR6转染HEK293细胞,用流式细胞术检测转染pcDNA3.1(+)-CCR6质粒的HEK293细胞;采用体外趋化实验、钙流实验,验证转染pcDNA3.1(+)-CCR6质粒的HEK293细胞表面表达的CCR6的生物学活性。结果经RT-PCR获得了编码人CCR6受体的DNA片段,构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CCR6;转染HEK293细胞,经流式细胞仪检测、趋化实验、钙流实验证实,表达CCR6的HEK293细胞具有趋化因子受体CCR6的生物学活性。结论重组人趋化因子受体CCR6克隆成功,并在HEK293细胞中获得了表达,为研究CCR6的生物学功能及筛选CCR6拮抗剂奠定了基础。
- 沈大斌龚小云顾涛罗福康郑红
- 关键词：PCDNA3.1(+)克隆
- 趋化因子MIP-3α的克隆与表达被引量：2
- 2005年
- 目的 克隆人趋化因子MIP 3α基因,表达并初步纯化MIP 3α融合蛋白。方法 从扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增MIP 3α成熟蛋白基因,并在5’和3’分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a(+ )载体上,转化E .coli.DH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得MIP 3α天然蛋白表达载体pET3 2a(+ ) /MIP 3α,SDS PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化MIP 3α融合蛋白。结果 成功克隆了MIP 3α基因,表达并初步纯化得到MIP 3α融合蛋白。结论 构建的MIP 3α硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达MIP 3α硫氧还蛋白。
- 罗福康郑红沈大斌
- 关键词：MIP-3ΑWESTERNBLOT蛋白纯化
- galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株脂寡糖结构的改变被引量：6
- 2004年
- 目的 :研究galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株脂寡糖结构改变。方法 :提取空肠弯曲菌 (CJ)HB9313及galE-变异株脂寡糖 ,Tricine SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后 ,分别进行银染、免疫印迹及霍乱毒素配体印迹检查。结果 :与野生株比较变异株的脂寡糖分子量变小 ,电泳迁移速度快 ,不能与CJHB9313脂寡糖抗体结合 ,并失去与其配体结合的能力。结论 :galE基因敲除变异株丧失了脂寡糖外核糖基及神经节苷脂CM1样结构 。
- 束晓梅蔡方成
- 关键词：空肠弯曲菌变异株脂寡糖
- 趋化因子与移植排斥反应被引量：2
- 2005年
- 趋化因子是由小分子分泌蛋白组成的一个大的细胞因子超家族,近年来,不断有新的趋化因子和受体被发现.趋化因子是能够诱导白细胞做定向运动的细胞因子,在病原体的清除、炎症反应、移植排斥、造血、血管生成、肿瘤发生、HIV感染等过程中也发挥着重要作用.本文概述了与移植排斥相关的趋化因子和受体的研究进展.
- 罗福康郑红
- 关键词：趋化因子移植排斥反应HIV感染分泌蛋白肿瘤发生超家族
- 人趋化因子ELC的克隆与表达被引量：1
- 2005年
- 目的 克隆人趋化因子ELC基因,表达并初步纯化ELC融合蛋白。方法 从扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增ELC成熟蛋白基因,并在5′和3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a(+ )载体上,转化E .coliDH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得ELC天然蛋白表达载体pET3 2a(+ ) ELC ,SDS PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化ELC融合蛋白。结果 成功克隆了ELC基因,表达并初步纯化得到ELC融合蛋白。结论 构建的ELC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达ELC硫氧还蛋白。
- 罗福康沈大斌郑红
- 关键词：缺失突变WESTERNBLOTTING蛋白纯化
- 人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达
- 2004年
- 目的 构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法 从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a( +)载体上 ,转化E .coliDH5α ,筛选阳性克隆 ,酶切鉴定 ,DNA测序检测插入序列的正确性 ,经突变删除因NcoⅠ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的 3个氨基酸 ,DNA再测序检测突变结果 ,SDS PAGE分析其表达 ,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析 ,得到纯化的融合蛋白 ,Westernblot验证纯化的融合蛋白。结果 成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体 ,表达并纯化出融合蛋白 ,Westernblot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合。结论 构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白 。
- 罗福康郑红何凤田
- 关键词：SLC突变蛋白纯化
- Met-RANTES对内皮细胞与T细胞相互作用的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨趋化因子拮抗剂Met-RANTES对内皮细胞与异体T细胞趋化、黏附作用的影响。方法:采用T细胞与血管内皮细胞混合培养的方法,观察使用趋化因子拮抗剂Met-RANTES干预前后内皮细胞趋化因子的表达,以及血管内皮细胞对T细胞趋化、黏附率的变化。结果:血管内皮细胞与T细胞混合培养可见内皮细胞表达RANTES、MCP-1及MIP-1α,RAN-TES的表达率增高。趋化因子拮抗剂Met-RANTES可以显著影响内皮细胞对T细胞的趋化和黏附。结论:趋化因子在淋巴细胞趋化及黏附内皮细胞的过程中发挥着重要作用,而趋化因子拮抗剂Met-RANTES可以显著影响内皮细胞与异体T细胞的趋化与黏附作用。
- 孙志成郑红李世荣吴军
- 关键词：内皮细胞T细胞
- 人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白3α的克隆与原核表达
- 2006年
- 目的克隆人趋化因子MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白。方法从人扁桃体中提取总RNA,再进行RT-PCR,扩增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5′和3′端分别添加NcoI和EcoRI酶切位点,通过与之对应的存在于pET32a(+)质粒上的酶切位点重组于pET32a(+)载体上,转化E.coli BL21trxB(DE3),筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变MIP-3 alpha序列前端多余碱基,获得MIP-3 alpha天然蛋白表达载体pET32a(+)/MIP-3 al-pha,SDS-PAGE分析其表达,Western Blot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化MIP-3 alpha融合蛋白。结果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表达并初步纯化得到MIP-3 alpha融合蛋白。结论在大肠杆菌中成功构建的MIP-3 alpha硫氧还蛋白融合表达载体,以可溶性蛋白的方式表达MIP-3 alpha硫氧还蛋白。
- 顾涛罗福康沈大斌龚小云郑红
- 关键词：ALPHA蛋白纯化
