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广东省自然科学基金(04205804): 作品数：30 被引量：144H指数：7; 相关作者：李加琪陈瑶生王翀高萍施振旦更多>>; 相关机构：华南农业大学中山大学仲恺农业技术学院更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学自然科学总论更多>>

猪泛素-B基因的克隆及组织表达谱分析被引量：3: 2008年; 从人泛素-B（Ubiquitin B，UbB）基因mRNA序列出发，在猪的ESTs库中进行同源性搜索，通过电子克隆和进一步RT-PCR方法从猪肌肉组织总RNA中扩增出泛素-B基因部分cDNA序列（GenBank登录号：EF688558），长894bp，其中在89～778bp处包含一个完整的开放阅读框，编码229个氨基酸。猪泛素-B基因由2个外显子和1个内含子构成（GenBank登录号：EF688559），内含子长657bp，符合GT-AG规则。序列分析结果表明：猪泛素-B基因与已报道的人、黑猩猩、小家鼠、大鼠、鸡等物种的泛素-B基因高度同源，同源性分别为92％、91％、91％、91％、89％，氨基酸序列同源性为100％。半定量RT-PCR结果表明：泛素-B基因在150日龄肥育猪心脏、肝脏、肾脏、小脑中的表达量较高，脾脏、肺脏、胃、膀胱、背最长肌、大脑次之，脂肪和下丘脑中的表达量最低，其在蓝塘与长白猪肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、膀胱、背最长肌等7个组织中的表达量存在差异。; 谢水华李加琪陈瑶生张豪王翀梅盈洁莫德林李泽月; 关键词：基因表达

猪F_2设计资源家系中4条染色体微卫星标记分析被引量：1: 2007年; 利用中国地方猪种蓝培猪(16头母猪)与外来品种长白猪(8头公猪)按F2设计建立资源家生活经验,根据美国肉畜中心(USDA-MARC2.0)公布的猪连锁图谱,在1、4、7和8号染色体上间隔10-20cM选择一个微卫星标记,共31个标记,采用WAVE核苷酸片段分析系统和ABI377DNA序列分析仪检测资源群体的P、F1和F2代个体微卫星的基因型,对其基因频率、杂合度和多态信息含量等进行统计分析。结果发现:利用ABI377检测的猪1、4和8号染色体上的有效微卫星标记21个,其中13个标记的18个等位基因片段大小超过了网上已报道的结果,发现新等位基因的标记占62%;在31个微卫星标记中,杂合度(h)在0.043-0.7855之间,总平均杂合度为0.6460,其中70%座位的h>0.60;总平均多态信息含量(PIC)为0.5949,有77.4%位点的PIC>0.5。统计分析结果表明,选用的微卫星标记能够较好地提供标记信息,为进一步在该家系中进行猪重要性状的QTL定位打下了良好的基础。; 王翀凌飞张豪李加琪包杰陈瑶生; 关键词：蓝塘猪微卫星标记杂合度多态信息含量

鸡缩胆囊素-33串联体的构建、原核表达及免疫原性研究被引量：4: 2006年; 根据鸡缩胆囊素(choleystok in in,cck)-33基因的碱基序列及大肠杆菌高频密码子,设计了大肠杆菌表达系统偏爱的cck基因序列.将cck-33基因克隆至pRSET A质粒上,利用载体上的同尾酶构建cck基因四串联体并在大肠杆菌E.coliBL 21中成功表达.将所表达的融合蛋白进行纯化后,以纯化的蛋白为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡.结果表明,CCK蛋白主动免疫肉鸡后,抗血清水平显著升高,P/N值远远大于2.; 舒鼎铭覃健萍曹永长毕英佐; 关键词：缩胆囊素串联体原核表达免疫原性

猪CTSD全长cDNA的克隆和表达分析被引量：8: 2007年; 以人CTSD mRNA全长序列为基序,在db EST库中搜索同源性大于80%、重叠大于40个碱基的猪EST下载经Seqman软件装配后,利用RT-PCR扩增到猪CTSD基因部分cDNA序列,进一步通过RACE技术获得cDNA全长（GenBank登录号为DQ018727）,猪CTSD基因cDNA全长2032 bp包括93 bp 5′UTR区、706 bp 3′UTR区和1 233bp ORF,编码410个氨基酸残基。其编码区与人、鼠、牛、羊CTSD编码区同源性分别为87.9%、78.2%、86.6%和85.0%,其氨基酸序列与人、鼠、牛、羊氨基酸序列同源性分别为86.6%、80.1%、86.0%和84.7%。疏水性分析和信号肽预测发现猪CTSD氨基酸序列存在至少7个疏水性区域,信号肽位点为第1-20个氨基酸残基。在NCBI进行Blast P搜索结果显示猪CTSD氨基酸结构中含有Asn（Asparagine,天门冬酰胺）结构域,与天冬氨酸蛋白酶3D结构同源性高达99.7%,具有真核生物天冬氨酸蛋白酶的典型结构。以猪多组织RNA池为模板,以1026 bp部分cDNA序列作为杂交探针进行Northern杂交,得到一条2000 bp左右特异条带,从而验证了RACE产物为全长cDNA并揭示该基因只有一个转录本。为了研究猪CTSD基因在体内不同组织内表达的特点,采用半定量RT-PCR对CTSD基因在猪10个组织中的表达进行研究,结果表明在10个组织中均有表达,且表达量与-βactin内参接近。; 梅盈洁李加琪陈瑶生李晓筠朱良瑞凌飞王翀张豪; 关键词：电子克隆快速扩增CDNA末端全长CDNA

猪骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因的cDNA克隆与表达分析被引量：12: 2006年; 从人骨骼肌快肌肌钙蛋白C2（TNNC 2）基因出发，在dbEST数据库中进行同源性搜索，找到一个有较高同源性且在猪背最长肌中表达EST（BM083186）。通过电子克隆和进一步RT-PCR实验验证，获得猪TNNC 2基因全长cDNA序列，其全长843bp，开放阅读框为201-683bp，编码有160个氨基酸。同源性分析结果表明，与人、鼠的骨骼肌快肌肌钙蛋白C2基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为93．6％、90．5％，蛋白序列同源性均为97．5％。多种组织的半定量RT-PCR研究表明，该基因在骨骼肌中表达，并且在杜洛克猪背最长肌中的表达比兰塘猪高。; 田兴国陈瑶生凌飞梅盈洁王翀罗永发李加琪; 关键词：电子克隆

促进黄体功能提高奶牛人工授精和胚胎移植受胎率的研究被引量：4: 2008年; 研究探讨了在人工授精后和胚胎移植过程中注射hCG以促进黄体功能从而提高奶牛的受胎率。试验一：随机选取自然发情后的4-8岁荷斯坦经产奶牛39头进行人工授精,在输精后第5天和第10天,分别肌肉注射hCG2000U/头（试验组）或生理盐水5mL/头（对照组）。在输精后的第0天（输精当天）、第7天、第14天和第21天,每组随机抽取12头牛从颈静脉采血分离血清以测定血清中孕酮浓度。结果hCG处理组牛血浆孕酮浓度在输精后第7、14和21天都显著高于对照组（P〈0.05）;输精后45d的受胎率在hCG处理组为63.2%,高于对照组的45.0%,但差异不显著（P〉0.05）。试验二：选取16头生殖系统健康、16~17月龄的青年荷斯坦牛作为受体牛,在发情后第7天,对A、B级黄体的牛施行胚胎移植,试验组牛于胚移同时静脉注射6000UhCG,对照组牛则注射生理盐水5mL/头。结果hCG处理牛在胚移后第7和14天的血浆孕酮浓度极显著高于对照组（P〈0.01）;移植后第35天的受胎率试验组为62.5%,高于对照组的50%,但差异不显著（P〉0.05）。试验结果表明,在人工授精和胚胎移植后特定时间,使用外源hCG能够有效促进黄体发育,提高血液中孕酮浓度,从而一定程度提高母牛受胎率。; 梅承施振旦郭文军钟寿坤李孝伟; 关键词：HCG 孕酮人工授精胚胎移植受胎率

猪CTSD基因3’UTR区SNP检测及PCR-RFLP分析: 选取生产性能具有明显差异的4个猪品种(大花白、二花脸、杜洛克和长白)构建品种DNA池,采用测序的方法研究猪CTSD基因3’非翻译区(426bp)序列的多态性,快速筛查到2个SNF位点(A-1664G和C-1930A)。进...; 梅盈洁李加琪; 关键词：SNP检测 PCR-RFLP分析; 文献传递

重组缩胆囊素融合蛋白制备及其免疫原性研究被引量：1: 2008年; 成功扩增了猪缩胆囊素(CCK)基因C末端片段,并在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE检测到相对分子质量约为45 000的融合蛋白,最高表达量占菌体总蛋白的40.21%,蛋白可溶性分析表明,融合蛋白主要是以可溶性形式表达.Western-blotting证实,可溶表达的融合蛋白能与CCK-8阳性血清具有良好的免疫反应性.以纯化后的蛋白为免疫原制备油乳剂疫苗免疫蛋鸡,结果表明,CCK蛋白可在鸡体内引起免疫反应,加强免疫后蛋鸡血清和卵黄中CCK抗体可维持在较高水平.为了研究含有CCK抗体的蛋黄粉对鸡生长性能的影响,将其作为添加剂饲喂20日龄肉鸡,试验结果表明,饲喂添加100和300 g/t含CCK抗体蛋黄粉的肉鸡与阴性对照组相比,试验全期体增质量分别提高2.34%、3.80%,采食量分别提高0.91%、2.65%,且对饲料体增质量比无显著影响.; 刘洁珠毕英佐薛春宜曹永长; 关键词：缩胆囊素克隆卵黄抗体

鸡Leptin基因正确性的免疫验证被引量：11: 2005年; ①取20只240日龄的粤黄鸡种母鸡平分为处理组和对照组,分别在第3、31、63和84d对之接种鸡Leptin重组融合蛋白(处理组)或BSA(对照组)1mL/羽。每天记录产蛋率,每10天测定采食量,每两周称重,在试验的第1、31、53、78和91d采血。结果表明Leptin处理组的血浆抗Leptin抗体水平和Leptin水平在免疫后显著高于对照组(P<0.01);第3和4次免疫后处理组产蛋率比对照组显著低约50%(P<0.05);在第98d试验结束时,处理组腹脂量为(115.60±15.07)g,显著高于对照组[(77.98±5.70)g,P<0.05];试验期间处理组的采食量略低于对照组,增重则略高于对照组,但两者差异均不显著(P>0.05);处理组血浆总T3和总T4水平与对照组差异不显著(P>0.05)。②取12只50日龄的粤黄鸡后备小母鸡,平分成处理组和对照组,分别肌注含抗Leptin抗体的卵黄提取液和生理盐水6mL/只,处理组在2、4、6h的累积采食量显著高于对照组(P<0.05),但在8h的累积采食量与对照组差异不显著(P>0.05)。两个试验通过免疫重组鸡Lep tin融合蛋白,使鸡表现出Leptin功能的丧失,证明目前所克隆的鸡Leptin基因在家鸡中的确存在和其正确性。; 邵西兵施振旦于迎春刘颖梁少东陈楠; 关键词：LEPTIN基因免疫采食量脂肪沉积产蛋率粤黄鸡

鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达被引量：2: 2006年; 根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列（GenBank号：D13154）设计并合成1对覆盖编码区58～1249位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得了特异性片断，将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌Ecoli DH5α永久保存．通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段，该片段经酶切后克隆到表达载体pRSETA的EcoRⅠ和HindⅢ两酶切位点之间，构建重组质粒pR-PRLR．该质粒在转化感受态细菌E．coli B121（DF．3）后，在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53640左右的重组融合蛋白，表达量在0．1mmol／L IPTG诱导5h时达到最高，约占总菌体蛋白的17．6％左右．表达产物可经体积分数为50％的Ni-NTA凝胶纯化，说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列．; 刘颖黎敏义刘志李孝伟施振旦; 关键词：克隆纯化

广东省自然科学基金(04205804)

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