国家科技支撑计划(2006BAD06A05)
- 作品数：26 被引量：102H指数：6
- 相关作者：刘春国刘明李洪涛杜金玲刘大飞更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江八一农垦大学东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划黑龙江省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生政治法律更多>>
- 禽流感DNA疫苗重组质粒组织分布的实时荧光定量PCR方法建立被引量：1
- 2011年
- 为研究禽流感病毒(AIV)DNA疫苗重组质粒在组织中的分布情况,本研究以AIV DNA疫苗pCAGGoptiHA 5HA基因为检测对象,分别建立检测AIV DNA疫苗重组质粒的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法和TaqMan MGB实时定量PCR方法。经优化比较两种方法的特异性、敏感性、重复性和污染率。结果表明,两种方法的标准曲线线性关系均较好,相关系数均达到0.999;最低检测量为42 copies,特异性强;探针法的重复性优于染料法,污染率低于染料法,因此采用TaqMan MGB实时定量PCR方法检测AIV DNA疫苗重组质粒组织分布情况。
- 熊杰彭广能王国俊李俊平姜永萍陈化兰
- 关键词：禽流感DNA疫苗实时荧光定量PCR
- H5亚型禽流感DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭免疫保护效力的研究被引量：1
- 2011年
- 为评价H5亚型禽流感病毒(AIV)DNA疫苗pCAGGoptiHA5对鸭的免疫保护效力,本研究将pCAGGoptiHA5以20μg、30μg和50μg剂量免疫3周龄SPF鸭,首次免疫后3周加强免疫一次。2周后以105EID50的鸭源高致病力AIV由鼻腔攻毒,观察SPF鸭发病和死亡情况。分别于攻毒后3d、5d和7d采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离,检测鸭排毒情况及免疫和攻毒后血凝抑制(HI)抗体、中和(NT)抗体的动态变化。结果表明:30μg和50μg免疫组均可对免疫鸭产生100%保护,而20μg剂量组则可对免疫鸭提供80%保护。
- 李俊平赵双成常晓飞柳金雄曾显营卫星辉李福基姜永萍陈化兰
- 关键词：禽流感DNA疫苗
- 鸭源H5N1亚型高致病性禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析被引量：2
- 2009年
- 分离到1株H5N1亚型高致病性禽流感病毒,经序列测定发现HA蛋白裂解位点上插入多个连续的碱性氨基酸(-PQREIRRKKR*G-),从分子上证实是一株高致病性禽流感病毒。核酸序列比较分析结果表明,分离的流感病毒HA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.8%;NA基因与A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)和A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达到98.7%。氨基酸水平上,HA与A/duck/Viet Nam/Ncvd1/2002(H5N1)同源率最高,可达99.3%;NA与A/chicken/Jiangsu/cz1/2002(H5N1)同源率最高,达98.7%。HA与NA基因的潜在糖基化位点与作者所选参比毒株一致。通过遗传进化树分析结果表明,A/duck/VietNam/Ncvd1/2002(H5N1)可能是该毒株的来源株。
- 孙恩成刘春国侯喜林刘明朴范泽
- 关键词：禽流感病毒血凝素基因神经氨酸酶基因生物信息分析
- H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的建立及高产细胞型疫苗株的拯救被引量：5
- 2009年
- 【目的】建立H1N1亚型猪流感病毒反向遗传学操作系统及拯救出能够在动物传代细胞中高水平复制的H1N1亚型猪流感疫苗株。【方法】利用反向遗传操作技术,对猪流感病毒广东分离株进行拯救。【结果】首次成功拯救出全部片段均来自于亲本株的猪流感病毒rH1N1,并且成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株re-LM株,研究结果表明二者均具有良好的遗传稳定性。rH1N1经MDCK细胞连续传代培养后,血凝价最高仅为1:64;而re-LM的血凝价最高可以稳定在1:1024,表明该毒株具有细胞繁殖高产的特性。用该重组病毒制备油乳剂灭活苗免疫2月龄仔猪,首免2周即可检测出HI抗体,平均效价在1:32以上,三免后2周HI抗体平均效价达到1:512,说明其有良好的免疫原性。【结论】H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为猪流感病毒致病机理、传播机制及病毒基因功能的研究奠定了基础;重组细胞高产型猪流感病毒株的拯救为H1N1亚型猪流感疫苗的研制开辟了新的途径。
- 刘大飞刘明刘春国杨涛万春和陈浩齐金龙杜金玲李洪涛孙恩成刘大程
- 关键词：猪流感H1N1亚型反向遗传操作技术
- 鸡痘弱毒疫苗株在鹌鹑体内的分布规律及毒性研究被引量：1
- 2011年
- 以鸡痘弱毒疫苗株对鹌鹑进行刺种接种,运用PCR方法对免疫鹌鹑的心、肝、脾、肺、肾、脑和肌肉等组织进行病毒DNA检测,旨在动态研究鸡痘疫苗在鹌鹑体内的分布规律,据此对鸡痘弱毒疫苗株应用于鹌鹑的免疫效果及生物安全性进行初步评价。在试验期间,鹌鹑精神状态良好,采食、饮水正常,未观察到病理变化;接种后12 h鹌鹑脾检测到病毒DNA;接种后1 d脾、肺可检测到病毒DNA;接种3 d和7 d在所有监测组织内均可检测到病毒DNA;接种后10 d所有内脏器官中均未检测到病毒DNA;对照组未检测到病毒DNA。试验结果表明,鸡痘病毒在鹌鹑体内存留时间短,无毒性,生物安全性好。
- 金明兰朱战波鲁会军马鸣潇郑敏金宁一
- 关键词：鹌鹑病毒分布毒性病毒DNA
- H5N1亚型高致病性禽流感病毒NP基因在昆虫细胞中的表达及其表达产物的生物学活性被引量：3
- 2008年
- 根据GenBank上登录的H5N1亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)核蛋白(NP)基因序列设计引物,通过PCR扩增出A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)毒株的NP基因片段,将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上,将筛选的阳性重组转座载体pFastBacGP67B-NP转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,构建了杆状病毒表达载体,获得了重组转座子(rBacmid-NP),在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒(rBv-NP)。SDS-PAGE分析、Western-blotting检测、免疫组化分析和ELISA试验结果表明,分子质量约为54 ku的重组核蛋白得到了高效表达,该表达蛋白具有良好的生物学活性。
- 万春和刘明刘春国杨涛刘大飞齐金龙陈浩杜金铃李洪涛
- 关键词：禽流感病毒核蛋白基因
- H3亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank上登录的H3亚型猪流感病毒HA基因序列设计了1对引物,经PCR扩增出HA基因目的片段,并将其克隆到pFastBacGP67C杆状病毒载体上,筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67C-H3,转化至含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-H3,在脂质体介导下转染处于对数生长期的sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBv-H3,将其感染sf9昆虫细胞,收获目的蛋白。经血凝试验、SDS-PAGE、Western-blot、免疫组织化学分析,结果表明,HA蛋白得到表达,且具有良好的免疫学活性。用表达的HA蛋白作为包被抗原,初步建立了H3亚型猪流感病毒的间接ELISA检测方法,通过对93份送检的疑似猪流感血清进行检测,结果显示,检出阳性率为46.24%。上述结果为建立快速、准确、简便的H3亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
- 万春和刘明刘春国张云
- 关键词：H3亚型猪流感病毒血凝素基因间接酶联免疫吸附试验
- H3N2亚型猪流感病毒的拯救
- 利用反向遗传学操作技术,以A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株为亲本株,采用RT-PCR技术对该病毒的8个基因片段分11段进行扩增,通过与双向转录载体pHW2000连接,转染293T和MDCK共培养细胞...
- 杜金玲刘明杨涛刘春国李洪涛孙恩成万春和刘大飞陈浩齐金龙
- 关键词：猪流感H3N2亚型病毒拯救
- 文献传递
- 鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律
- 2011年
- 采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组（生理盐水）对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1~8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安全性进行初步评价。在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化;抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同。表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好。
- 金明兰侯继波南文龙鲁会军马鸣潇郑敏金宁一
- 关键词：鸡痘病毒抗体鹌鹑
- H5-H7双价禽流感核酸疫苗免疫研究被引量：4
- 2011年
- 由于禽流感的高度变异性,免疫后不同亚型之间难以得到交叉保护,以致病毒得以逃避宿主免疫系统的监视,多价核酸禽流感疫苗具有可以保护不同亚型病毒攻击的特点。本试验设计并构建了包含禽流感H5HA和H7HA1基因的双价真核表达质粒pV-H5-H7及单独表达H5HA和H7HA1的pV-H5和pV-H7HA1。通过RT-PCR,间接免疫荧光（IFA）等方法验证构建质粒的正确性和其表达蛋白的免疫原性。0,21 d分别免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,设立双价疫苗组,单表达免疫组和对照组。免疫后35 d用HPAIV H5N1进行致死性攻击。结果显示免疫组均可刺激机体产生H5特异性抗体,pV-H5-H7诱导产生的抗体对H5N1的攻毒保护率为80%,而pV-H5单表达的攻毒保护率也为80%。表明本实验构建的双价禽流感核酸疫苗的免疫效果与单表达组相当（P〉0.05）,为多价禽流感核酸疫苗的研制提供了基础。
- 张丹鲁会军谭磊刘存霞胡博刘燕瑜刘昊金扩世金宁一
- 关键词：禽流感核酸疫苗
