金华市科学技术研究计划项目(2010-3-071)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李涛张璐丁正中更多>>
- 相关机构：艾青中学浙江师范大学更多>>
- 发文基金：金华市科学技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 氧化还原因子-1的原核表达纯化及其活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 为建立氧化还原因子-1(Ref-1)的原核表达系统,将经过酶切后的人源Ref-1编码片段定向克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了pGEX-4T-3/Ref-1原核表达载体,重组质粒转化至BL21(DE3)工程菌,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组工程菌表达可溶性融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(Glutathione Sepha-rose 4B)亲和纯化重组蛋白,透析后用聚乙二醇8000(PEG8000)浓缩,获得纯度达92%的融合蛋白,产率为3.7 mg/L,融合蛋白占菌体总蛋白的6.8%.蛋白质印迹(Western blot)显示该蛋白可以被抗体特异性识别,证实其为GST-Ref-1融合蛋白.GST-Ref-1蛋白体外增强了激活蛋白-1(AP-1)的DNA结合能力,并能拮抗H2O2造成的AP-1氧化损伤.
- 丁正中张璐李涛
- 关键词：氧化还原因子-1融合蛋白原核表达
