国家百千万人才工程
- 作品数：124 被引量：642H指数：14
- 相关作者：谢芝勋谢丽基刘加波邓显文庞耀珊更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西特聘专家专项经费资助项目广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 鸭瘟病毒LAMP可视化检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 目的:建立一种快速、简便、特异性高的鸭瘟病毒(DPV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法:根据Gen Bank中DPVUI6基因的保守序列设计一套特异性引物,并对反应条件进行优化,建立DPV的LAMP可视化检测方法。结果:建立的LAMP方法对其他鸭常见病原体无扩增反应;可通过肉眼观察颜色直接判定结果;敏感性可达0.1fg,是常规PCR方法的100倍;扩增反应只须在常规水浴锅中进行,可在1 h内完成。结论:建立的DPV LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于DPV感染的快速检测。
- 许宗丽谢芝勋郭捷谢丽基谢志勤庞耀珊邓显文刘加波
- 关键词：鸭瘟病毒环介导等温扩增
- 牛分枝杆菌CFP-10基因的表达和重组蛋白的纯化被引量：1
- 2012年
- 根据GenBank中牛分枝杆菌的基因序列,设计合成一对扩增CFP-10基因完整ORF的特异性引物,以pET32a(+)为载体构建重组表达载体CFP-10/pET32a(+)。重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经0.9mmol/L IPTG37℃诱导3h后表达,收集菌体并裂解,裂解后上清和沉淀经SDS-PAGE分析,结果表明融合蛋白分子量分别为30kD,表达产物以可溶性存在于上清中,后经Ni-NTA吸附柱方法对目的蛋白进行纯化,经薄层凝胶扫描分析,纯化后的His融合蛋白纯度达95%,该CFP-10表达蛋白可作为体外诊断抗原,为进一步建立检测牛分枝杆菌的方法奠定基础。
- 谢志勤谢芝勋邓显文谢丽基庞耀珊刘加波范晴
- 关键词：牛分枝杆菌纯化
- 鸡传染性喉气管炎病毒LAMP检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 为建立一种快速简单检测鸡传染性喉气管炎病毒的方法,根据已发表的鸡传染性喉气管炎病毒的TK基因序列,设计并合成了6对特异扩增鸡传染性喉气管炎病毒TK基因片段的引物,通过条件优化,成功建立了针对鸡传染性喉气管炎病毒的环介导等温扩增(LAMP)检测法,并测定其特异性和敏感性,并对采集的鸡临床样品的DNA分别进行了检测。结果表明,该法只检出鸡传染性喉气管炎病毒。敏感性扩增结果表明,LAMP检测鸡传染性喉气管炎病毒的最低浓度为100 fg的DNA模板。该LAMP方法有简便、快速和特异性高的优点,可用于临床上对鸡传染性喉气管炎病毒的快速检测。
- 谢志勤谢芝勋邓显文谢丽基庞耀珊刘加波范晴
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒
- 牛病毒性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：32
- 2010年
- 目的:建立牛病毒性腹泻病毒(BVDv)的环介导体外等温扩增(LAMP)快速检测方法。方法:根据BVDv的5'端非编码区序列,在保守区的8个位点设计LAMP特异性引物(2对特异性引物和1对环引物),对反应条件和试剂浓度进行优化,建立恒温(63.5℃)、快速(65min)的检测方法。结果:建立的方法特异性好,检测其他对照病毒均为阴性;灵敏度高,最低可检测到1个拷贝的阳性质粒,可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定扩增结果。结论:建立了用于检测BVDv的LAMP方法,该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适合基层和现场检测。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基彭宜
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒
- 贝类奥尔森派琴虫实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2009年
- 目的建立一种快速、灵敏、特异的用于检测贝类奥尔森派琴虫的实时荧光定量PCR方法。方法根据基因库中奥尔森派琴虫的基因保守序列,设计合成1对引物和1条TaqMan探针,建立荧光定量PCR方法,对采自广西沿海的49份贻贝标本进行检测,并与常规PCR比较。结果建立的荧光定量PCR方法灵敏度可达20个拷贝,比常规PCR灵敏度高100倍。49份贻贝标本的阳性率为16.3%,检测的奥尔森派琴虫基因组DNA含量为2.38×106～9.21×102拷贝/μl。结论建立的荧光定量PCR方法可以用于贝类奥尔森派琴虫感染的快速检测。
- 谢芝勋谢丽基刘加波谢志勤庞耀珊邓显文
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 贝类派琴虫半套式PCR检测方法的建立及初步应用
- 2012年
- 根据GenBank中派琴虫(Perkinsus sp.)的基因组序列,设计了3条特异性引物Perkinsus303-1、Perkinsus303-2和Perkinsus209-1,建立了检测贝类派琴虫的半套式PCR方法。该方法对派琴虫检测得到209 bp的特异性扩增带,检测灵敏度达到0.01 fg的派琴虫质粒DNA。用该半套式PCR对临床样品进行检测,结果表明广西牡蛎、连云港的菲律宾蛤仔和温州溢蛏存在派琴虫感染,说明建立的半套式PCR方法可以用于贝类派琴虫的临床快速检测。
- 谢丽基谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤范晴
- 关键词：贝类
- 贝类派琴虫和单孢子虫二重荧光定量PCR方法的建立
- 2010年
- 根据基因库中派琴虫和单孢子虫基因组的保守序列,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立能够同时检测派琴虫和单孢子虫的二重荧光定量PCR方法。该方法特异性好,对派琴虫和单孢子虫的检测敏感性分别达到400和40个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对派琴虫和单孢子虫不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这2个原虫。对广西沿海的49份贻贝病料进行检测,结果派琴虫阳性率为16.3%,检测的派琴虫含量为2.38×106～9.21×102拷贝/μL;提示派琴虫广泛存在于中国南方沿海的养殖贝类中,建立的荧光定量PCR方法可以用于贝类派琴虫的临床快速检测。该方法对单孢子虫检测的敏感性比派琴虫高,而49份贻贝病料未检出单孢子虫,提示需要进行更多临床样品的检测。
- 谢丽基谢芝勋庞耀珊刘加波邓显文谢志勤
- 关键词：单孢子虫
- 猪蓝耳病病毒RT-LAMP快速可视化检测方法的建立被引量：7
- 2014年
- 为建立能快速检测猪蓝耳病病毒(PRRSV)的检测方法,本研究根据基因库中PRRSV非结构蛋白NSP2基因的保守序列,设计了一套特异性环介导等温扩增(RT-LAMP)引物,建立了PRRSV的RT-LAMP可视化检测方法。该方法的敏感性可达10 copies RNA,高于常规PCR方法 10倍;全部反应可以在50 min内完成;可通过肉眼观察钙黄绿素(calcein)颜色变化直接判定结果;对其它常见病原体的检测结果均为阴性,同时应用实时浊度仪对反应体系浊度及浊度的变化速率进行实时测量,结果相一致。结果表明建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,可用于PRRSV感染的快速检测。
- 邓显文谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊谢丽基范晴罗思思黄秀琴
- 关键词：猪蓝耳病病毒RT-LAMP
- PCV-2 ORF2基因的真核表达及其体内分布和安全性检测被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物,应用PCR从广西PCV-2的DNA扩增出ORF2基因,将ORF2基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体上,获得重组质粒,经PCR酶切以及序列分析鉴定,表明插入的片段为ORF2目的基因,插入的位置、大小和阅码框均正确,成功构建了真核表达载体重组质粒pcDNA-PCV-ORF2。对阳性真核表达质粒pcDNA-PCV-ORF2大量抽提后,以每只小鼠0.2 mg免疫5周龄左右的雌性小鼠,然后用ELISA检测免疫小鼠血清中抗体的产生情况,同时进行pcDNA-PCV-ORF2的体内分布和安全性检测。结果表明,pcDNA-PCV-ORF2在小鼠体内广泛存在,产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体,从第7天开始产生抗体,第28天抗体水平达到最高,抗体可维持7周以上,并具有良好的安全性。本研究通过对小鼠的免疫试验,产生了猪圆环病毒的特异性抗体,表明成功构建了能够在活体细胞中高效表达的真核表达载体,为进一步研究猪圆环病毒DNA疫苗奠定了基础。
- 谢丽基谢芝勋唐小飞刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因PCDNA3.1(+)免疫保护
- 牛轮状病毒三种核酸检测方法的比较被引量：5
- 2012年
- 利用针对牛轮状病毒(BRV)的普通PCR、实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和环介导等温扩增技术(LAMP)三种核酸检测方法对不同质粒浓度的样品和417份临床疑似样品进行检测,比较三种核酸检测方法的检出结果。三种核酸检测方法中LAMP最敏感敏感,能检测到1拷贝/μL,Real-time PCR能检测到100拷贝/μL,普通PCR只能检测到1×104拷贝/μL。但结合临床样品检测表明:常规PCR方法敏感度低会造成一部分漏检,LAMP灵敏度高又会造成错检。综合比较三种方法后,推荐用LAMP结合real-time PCR,不仅节约成本,且结果更为准确可靠,可提高牛轮状病毒的检出率。
- 范晴谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基
- 关键词：牛轮状病毒RT-PCR实时荧光PCRRT-LAMP
