浙江省科技厅面上科研社会发展项目(2009C33035)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：谭峰李亚飞潘长旺王寒诸葛青云更多>>
- 相关机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅面上科研社会发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠尿液中弓形虫B1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 根据GenBank中弓形虫B1基因序列,设计1对引物和1条TaqMan探针。从感染弓形虫小鼠尿液提取弓形虫总DNA,先用普通PCR扩增获得目的基因产物,将纯化的回收产物与pMD18-T载体连接,测序证实为目的片段后,制备系列浓度参照品。再优化实时荧光定量PCR反应体系,并对体系的灵敏度、重复性、线性、特异性和参照品稳定性进行评价。其灵敏度为104拷贝/ml;批内变异系数为2.42%,批间变异系数为4.18%,线性为103～107拷贝/ml,特异性为100%,参照品稳定。该法检测鼠尿样弓形虫DNA具有方便、灵敏、特异和重复性好等优点。
- 骆方军姚洪锋王永明谭峰
- 关键词：尿液刚地弓形虫实时荧光定量聚合酶链反应
- 双抗夹心ELISA法检测弓形虫核苷三磷酸脱氢酶-Ⅱ型蛋白的研究
- 2010年
- 目的建立双抗夹心ELISA法检测弓形虫核苷三磷酸脱氢酶-Ⅱ型(NTPase-Ⅱ)蛋白。方法用重组弓形虫NTPase-Ⅱ(rTgNTPase-Ⅱ)蛋白免疫BALB/c小鼠,筛选高滴度、高特异性的单克隆抗体建立双抗夹心ELISA法。通过检测弓形虫速殖子全虫蛋白与rTgNTPase-Ⅱ的浓度评价该方法的敏感性。通过对疟疾(7例)、日本血吸虫病(12例)、并殖吸虫病(14例)和脑囊尾蚴病(10例)患者血清进行交叉反应试验,评价该方法的特异性。结果获得2株稳定分泌抗rTgNTPase-Ⅱ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为MNT1和MNT2。蛋白质印迹分析(Westernblotting)显示,2株单克隆抗体均能特异性识别弓形虫rTgNTPase-Ⅱ蛋白和弓形虫速殖子全虫蛋白。以MNT1为包被抗体,MNT2为酶标抗体,建立的双抗夹心ELISA可检测出全虫蛋白的最低浓度为6μg/ml,检测出rTgNTPase-Ⅱ的最低浓度为1.5μg/ml。该方法的特异性为100%。结论以抗rTgNTPase-Ⅱ蛋白单克隆抗体MNT1与MNT2为基础建立的双抗夹心ELISA法具有较高的特异性。
- 胡昕诸葛青云李亚飞潘长旺谭峰
- 关键词：刚地弓形虫单克隆抗体
- PRU株弓形虫包囊感染小鼠模型的建立被引量：3
- 2010年
- 目的建立一个合理、经济的弓形虫包囊小鼠感染模型,为弓形虫的相关研究提供参考。方法 20个PRU株弓形虫包囊分别感染C57BL/6J、ICR、KM或BALB/c四个品系雌性小鼠10只,感染后42d,统计小鼠存活率、脑组织包囊数和包囊直径。结果 KM小鼠存活率100%(10/10),ICR小鼠存活率70%(7/10),C57BL/6J存活率10%(1/10),BALB/c全部死亡(0/10);ICR小鼠包囊数和包囊直径与KM小鼠相比具有显著性差异(P<0.01):ICR鼠脑组织包囊数为1385.71±378.555,直径为4.044±0.187μm;而KM鼠脑组织包囊数为290.00±129.743,直径为3.557±0.271μm。结论与其他3个品系小鼠相比,ICR小鼠对PRU株弓形虫包囊的抗性较强,可以作为弓形虫包囊感染模型。
- 李亚飞王寒潘长旺谭峰
- 关键词：弓形虫包囊小鼠模型
