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国家重点基础研究发展计划(2005CB523000): 作品数：23 被引量：49H指数：3; 相关作者：赵德明周向梅尹晓敏徐广贤杨建民更多>>; 相关机构：中国农业大学中国矿业大学（北京）北京大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生矿业工程更多>>

甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白单抗杂交瘤细胞株的制备与初步鉴定被引量：2: 2010年; 目的:建立具有高特异、高效价的甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白(HA)单抗的杂交瘤细胞株。方法:以纯化的昆虫杆状病毒表达的甲型H1N1流感病毒HA蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法筛选阳性克隆,经ELISA和Western blot分析单抗的特性和特异性。结果:获得6株甲型H1N1流感HA抗原特异单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗原肽库ELISA检测结果表明其中3株(1E12,3F12,1C11)单抗只与甲型H1N1流感HA抗原肽库反应,不与H5N1病毒HA抗原肽库反应;Western blot分析表明,单抗1B3只特异识别甲型H1N1流感HA抗原,而与其他季节性甲流病毒(H1,H3)及人禽流感H5N1病毒不反应。结论:所获杂交瘤细胞株特异性强,效价高,分泌抗体性能稳定,为分析甲型H1N1流感病毒抗原性位点、建立诊断试剂奠定了基础。; 王慧娟张陵林周为民谭文杰许洪林王文玲周剑芳舒跃龙阮力; 关键词：单克隆抗体

牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mce4A)的原核表达、纯化及其圆二色谱分析: 2007年; 将牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵入蛋白4A(Mammalian cell-entry protein 4A,Mce4A)基因克隆至原核表达载体pET30a(+)中,得到重组表达载体pET30-mce4A,转入宿主菌BL21(DE3)中,获得大量表达,表达量占菌体蛋白总量的52%,大小约为43 Ku。经Ni-NTA琼脂糖亲和层析获得Mce4A重组蛋白;圆二色谱(CD)测定结果表明,Mce4A重组蛋白α螺旋含量为31.1%,β-折叠含量为0%,无规卷曲含量为61.0%,转角含量为7.9%。为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。; 徐广贤杨建民周向梅尹晓敏赵德明; 关键词：牛分枝杆菌原核表达

牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E的原核表达、纯化及其圆二色谱分析被引量：2: 2007年; 为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理,本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板,通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E(Mammalian cell-entry protein 4E,mce4 E)基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分枝杆菌和人分枝杆菌mce4 E基因同源性为100%。将重组表达载体转入宿主菌BL21进行诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析和Western-blotting免疫印迹鉴定,结果证明目的蛋白获得高效表达,表达量占菌体总量的53.3%,分子量约为45 ku;利用Ni-NTA琼脂糖柱对表达蛋白进行纯化,纯化率大于95%;纯化的蛋白经过透析复性、圆二色谱(CD)测定,结果表明重组蛋白为典型的α螺旋型结构,经Jascow32软件分析计算,mce4E蛋白含有39.1%的α螺旋,60.9%的无规卷曲,无β-折叠和转角,为进一步开展牛分枝杆菌致病机理的研究和寻找新的药物作用靶位点奠定了基础。; 徐广贤赵德明周向梅尹晓敏杨建民; 关键词：牛分枝杆菌原核表达

H5N1-NP蛋白的原核表达及与宿主蛋白相互作用的初步研究被引量：1: 2010年; 目的原核表达并纯化禽流感病毒A/Anhui/1/2005（H5N1）的NP蛋白,并筛选人支气管上皮BEAS-2B细胞总蛋白中能够与纯化的NP蛋白相互作用的蛋白.方法一方面,构建了含有NP基因的原核表达质粒pET30a-NP,并在大肠埃希菌中获得了可溶性表达.亲和层析和离子交换层析两步对NP蛋白进行纯化.另一方面,制备了BEAS-2B细胞总蛋白.在此基础上,联合应用Pull-down与LC-MS/MS技术来筛选并确认细胞中与纯化的NP蛋白相互作用的成分.结果构建的pET30a-NP质粒在IPTG诱导下在原核细胞中实现了可溶表达,经过两步纯化后,得到可溶的NP蛋白纯品.Pull-down与LC-MS/MS技术初步筛选到BEAS-2B细胞中20个可能与NP蛋白相互作用的细胞蛋白.还需要进一步的实验来验证他们和NP蛋白之间的相互作用.结论获得了高纯度的可溶NP蛋白及筛选到20个可能与其相互作用的BEAS-2B细胞候选蛋白.; 王乃福马晶张晓光张晓梅白天王敏温乐英王大燕舒跃龙周玲曾毅; 关键词：流感病毒A型核蛋白类蛋白质相互作用

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2: 2006年; 为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。; 李晶晶赵德明徐广贤周向梅尹晓敏; 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达免疫印迹蛋白纯化

我国汉族人群过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因Pro12Ala多态性与2型糖尿病相关性的Meta分析被引量：4: 2011年; 目的评价我国汉族人群过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因多态性Pro12A1a与2型糖尿病的相关性。方法以"PPARγ","pparg","Pro12A1a","type 2 diabetes","Chinese","过氧化物酶增殖剂激活受体","2型糖尿病"为检索词,全面检索2型糖尿病与Pro12A1a相关的文献,用Stata 11.0进行Meta分析,对研究数据的OR值进行合并,并评价分析结果的可靠性和稳定性。结果 (1)检索到22篇,其中17篇符合纳入标准,包含了3927例2型糖尿患者和3364名正常对照,共7921名。纳入研究人群同质性较好,无显著发表偏倚。(2)次要等位基因Ala12在正常人和2型糖尿病患者中的频率分别为4.8%与4.6%。在显性和加性遗传模式下,次要等位基因携带者相对于未携带者的OR值分别为0.95(95%CI:0.80,1.12)和0.93(95%CI:0.79,1.09)。结论我国汉族人群PPARγ2基因多态性Pro12Ala与T2DM无相关性。; 郭乌兰唐勇韩学尧纪立农; 关键词：META分析

Influence of PrP 106―126 on expression of laminin and fibronectin in astrocyte: 2008年; Astrogliosis is a hallmark of prion disease, but the metabolic alterations of astrocytes remain poorly documented. A synthetic peptide corresponding to amino acid 106―126 of the human prion protein (PrP) has been shown to be toxic to neurons. In this study, the effects of PrP 106―126 on astrocytes were investigated in vitro. The proliferation of astrocytes was significantly (P < 0.05) increased when grown in media conditioned with PrP 106―126 (80 μmol/L) from microglia. The expression of laminin (LN) and fibronectin (FN) was examined at both mRNA and protein levels. The results showed that ex- posure of astrocytes to PrP 106―126 enhanced the expression of LN and FN. The increase of FN in astrocyte cultures required cytokines previously released by activated microglia. This study reveals the expression of LN and FN affected by PrP106―126.; LI YuRongGUAN LeLuoYANG JianMinZHOU XiangMeiYIN XiaoMinZHAO DeMing; 关键词：纤连蛋白 PRP 星形胶质细胞

鹤壁五矿深部软岩交岔点研究与应用: 2011年; 随着煤矿采深的不断加大,深部软岩交岔点稳定性控制已成为煤矿开采的又一难题。为了良好地控制交叉点处围岩的稳定性问题,结合鹤壁五矿三水平二车场交岔点处支护工程实例,通过地质调查、理论分析及数值模拟(FLAC3D),提出了鹤壁五矿三水平二车场交岔点处围岩稳定性控制对策——锚网喷+锚索+单桁架耦合支护技术,并在实践中得到了验证,效果良好。; 景海河申元; 关键词：软岩交岔点耦合支护

禽流感病毒蛋白AM2的表达、纯化及其多克隆抗体的制备被引量：1: 2007年; 利用大肠杆菌BL21表达禽流感病毒蛋白AM2,分离纯化目的蛋白,进行小鼠免疫制备多克隆抗体。将A型禽流感病毒M2基因的原核表达重组质粒pGEX-6p-1-AM2转化大肠杆菌感受态细胞BL21,经IPTG诱导后,在大肠杆菌表达系统中获得表达,并分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到了pGEX-6p-1-AM2的多克隆抗体。经western-blot免疫印迹分析,自制的多克隆抗体能特异地与AM2蛋白相互作用,这说明试验制备了特异性良好的抗AM2的多克隆抗体。; 赵翠君黄会岭; 关键词：禽流感病毒纯化多克隆抗体

牛分支杆菌Mce4A蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOS、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响: 2008年; 牛分支杆菌侵入巨噬细胞的机制,主要是由哺乳动物细胞侵袭蛋白(Mammalian cell-entry proteins,Mce)介导的,在牛分支杆菌的致病机理中具有重要的作用。为了探讨Mce4A蛋白在牛分支杆菌致病机理中的作用,用不同浓度的重组Mce4A蛋白刺激肺泡巨噬细胞,结果显示,Mce4A蛋白抑制巨噬细胞的活性;用重组Mce4A蛋白、MtbPPD、MbPPD和BCG刺激肺泡巨噬细胞,结果表明,Mce4A蛋白促使肺泡巨噬细胞TNF-α、i NOS和IL-6的表达上调,而对IL-12的表达没有影响。MbPPD和BCG促使肺泡巨噬细胞TNF-α、i NOS、IL-6和IL-12的表达上调;MtbPPD促使肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-6和IL-12的表达上调,但是对i NOS的表达却没有影响。由此可见,Mce4A蛋白能够促使巨噬细胞分泌炎性细胞因子,促使机体发生炎性反应,在宿主细胞免疫应答反应中具有重要的作用。; 徐广贤杨建民周向梅尹晓敏赵德明; 关键词：牛分支杆菌 REAL-TIME PCR

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