国家教育部博士点基金(20030698011)
- 作品数：7 被引量：34H指数：3
- 相关作者：胡海涛冯改丰董炜疆刘朝晖宫惠琳更多>>
- 相关机构：西安交通大学西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大黄素对过氧化氢诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用被引量：2
- 2010年
- 目的:应用过氧化氢(H2O2)孵育原代大鼠皮层细胞制作细胞损伤模型,研究大黄素对模型细胞凋亡的影响。方法:H2O2和大黄素对皮层细胞进行处理,MTT和LDH法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,倒置显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达。结果:与正常对照组比较,经150μmol/LH2O2处理后皮层细胞活性显著降低,ROS聚集增加,Hoechst33258荧光染色出现明亮的凋亡小体,大黄素预处理能改善其损害情况。Western blot法显示与正常对照组比较,H2O2可致Bcl-2表达显著减弱,Bax表达显著增强,而大黄素预处理可使其恢复到正常水平。结论:大黄素可拮抗过氧化氢诱导的皮层神经细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。
- 刘涛胡海涛孙钦儒
- 关键词：过氧化氢大黄素活性氧
- 真核表达载体pcDNA3.1-β淀粉样前体蛋白裂解酶的构建及其在COS-7细胞中瞬时表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-siteamyloidprecursorproteincleavingenzyme,BACE)基因的真核表达载体,为修复阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)损伤神经元奠定基础。方法采用RT-PCR方法,从人的成神经细胞瘤的总cDNA中,扩增出1.5kb的BACEcDNA片段,再用BamHI和XhoI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;以免疫细胞化学法检测BACE基因的表达情况。结果人BACE基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1质粒中;经脂质体转染COS-7细胞后,并由潮霉素进行筛选,可见转染细胞胞浆中和胞膜上有较高量的BACE蛋白表达。结论成功构建了pcDNA3.1-BACE的真核表达载体,为研究BACE基因在AD发病机制中的作用及抑制BACE,为治疗AD奠定一定的实验基础。
- 董炜疆宫惠琳冯改丰胡海涛
- 关键词：基因克隆阿尔茨海默病
- 阿尔茨海默病防治研究的现状与展望被引量：10
- 2007年
- 阿尔茨海默病(AD)是一种严重的中枢神经系统退行性疾病。本研究室十多年来对该病的发病机制,特别是在防治方面进行了一些实验研究工作,并结合国内外最新的研究成果,提出了治疗AD新的理念和策略,为该病未来的临床治疗研究提供了新的思路。
- 胡海涛董炜疆
- 关键词：阿尔茨海默病淀粉样蛋白Β分泌酶
- 葛根素对Aβ(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响被引量：11
- 2008年
- 目的:应用Aβ25-35孵育PC12细胞株制作细胞损伤模型,以研究葛根素对模型细胞凋亡的影响。方法:用Aβ25-35和葛根素对PC12细胞进行处理,MTT法检测干预后不同时间点的细胞活性,电镜观察细胞形态的改变,异硫氰酸荧光素(FITC)标记的AnnexinⅤ及碘化丙锭(PI)双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,以确认药物的保护作用。结果:PC12细胞经过Aβ25-35处理后,细胞生存率下降,且呈现时间依赖性。电镜观察显示Aβ25-35可导致PC12细胞凋亡,使用葛根素后,模型细胞凋亡情况明显改善。流式细胞技术显示Aβ25-35损伤模型组凋亡率明显升高,使用葛根素后,细胞凋亡率下降,具有显著性差异(P<0.05)。结论:葛根素可拮抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。
- 张海英胡海涛刘亦恒王洪权冯改丰陈国敏
- 关键词：阿尔茨海默病葛根素凋亡
- 反转录病毒载体介导的EGFP基因在SK-N-SH神经母细胞瘤细胞中的表达被引量：8
- 2007年
- 目的构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的反转录病毒载体,并且探讨病毒载体对SK-N-SH神经母细胞瘤细胞株的感染效率。方法使用基因重组技术构建携带EGFP基因的反转录病毒载体(RV/EGFP)。将稀释的RV病毒液感染NIH3T3细胞,计数NIH3T3荧光表达细胞的数量来确定病毒的浓度;使用RV载体感染SK-N-SH细胞,通过流式细胞学荧光检测明确RV在SK-N-SH细胞的感染效率。结果成功构建了基因转移载体RV/EGFP,确定重组病毒的浓度为8.3×106病毒颗粒/mL。在SK-N-SH细胞RV/EGFP稳定转染并有效表达。在SK-N-SH细胞EGFP的荧光表达显示RV的转移并且表达的效率达到30%以上。结论SK-N-SH细胞能被RV病毒载体有效感染,在转基因细胞株外源基因的表达长期稳定并且显示RV病毒载体具有良好的基因转移效率。
- 刘朝晖杨宇庄鹏辉许杰华马延兵胡海涛
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白反转录病毒载体
- 短干扰RNA特异性抑制哺乳动物β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(-βsite APP cleav ing enzym e,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNA s,siRNA)是否能抑制BACE在哺乳动物细胞中的表达,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法:采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、U 6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA(siBACE),随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN,通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE进行鉴定;制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果:成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE,并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论:成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U 6-siBACE,并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达,为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供了重要的实验基础。
- 胡海涛董炜疆冯改丰刘朝晖刘苏虎杨广笑王全颖
- 关键词：淀粉样Β蛋白前体基因Β分泌酶
- 短干扰RNA对人β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达的影响(英文)被引量：1
- 2006年
- 目的探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNAs,siRNA)对BACE在神经母细胞瘤细胞中的表达的影响,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA(siBACE),随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN,通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN/ECFP-U6-siBACE进行鉴定;制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE;并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE,并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达,该研究将为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供重要的实验基础。
- 董炜疆冯改丰宫惠琳刘苏虎胡海涛
- 关键词：RNA干扰BACE基因阿尔茨海默病
