国家自然科学基金(30700785)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- 氧糖剥夺/复氧所致细胞焦亡在肺微血管内皮细胞损伤中的作用被引量：2
- 2021年
- 目的:探讨氧糖剥夺/复氧(OGD/R)是否导致人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)焦亡及其在细胞损伤中的作用。方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环中HPMVECs缺血/再灌注过程。将细胞分为对照(control)组(正常培养)、OGD/R组(OGD 8 h+恢复12 h)及VX-765(caspase-1抑制剂)组(在OGD/R之前4 h给予50μmol/L VX-765处理,其余培养条件同OGD/R组)。采用RT-qPCR和Western blot法检测caspase-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)及IL-18水平;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测上清液中LDH的水平。结果:与control组比较,OGD/R组caspase-1、NLRP3和ASC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),炎症因子IL-1β和IL-18分泌均增多(P<0.05);使用VX-765可逆转OGD/R造成的caspase-1、NLRP3和ASC mRNA和蛋白表达水平的上调及IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05),同时下调OGD/R后的LDH水平(P<0.05)。结论:OGD/R可导致HPMVECs发生焦亡,抑制细胞焦亡可缓解OGD/R对HPMVECs的损伤。
- 肖宗懿王小燕易寒宋娟安雨轩王寿勇
- 关键词：氧糖剥夺人肺微血管内皮细胞
- 氧糖剥夺/恢复对A549肺泡上皮细胞焦亡的影响被引量：2
- 2020年
- 通过建立A549肺泡上皮细胞氧糖剥夺/恢复(oxygen-glucose deprivation/recovery,OGD/R)模型,模拟临床体外循环中肺泡上皮细胞缺血–再灌注过程,观察OGD/R是否引发A549细胞焦亡,为进一步探讨CPB相关肺损伤发生机制提供参考。采用RT-qPCR法和Western blot法检测焦亡相关基因Caspase1、ASC、NLRP3、GSDMD的mRNA转录和蛋白质表达水平,并进一步观察Caspase1特异性拮抗剂VX-765对Caspase1、焦亡效应蛋白GSDMD、培养上清液中Caspase1焦亡效应产物IL-1β、IL-18表达水平以及细胞存活率的影响。结果显示与对照组相比,OGD/R后A549细胞Caspase1活性增高(P<0.05),焦亡相关基因Caspase1、ASC、NLRP3、GSDMD的mRNA和蛋白质表达均上调(P<0.05);采用拮抗剂VX-765预处理后,细胞焦亡相关蛋白Caspase1、GSDMD表达量明显减少(P<0.05),细胞培养上清液中焦亡标志产物细胞因子IL-1β、IL-18水平显著下降(P<0.05),细胞存活率得到恢复。该研究表明,氧糖剥夺/恢复可诱导A549肺泡上皮细胞发生焦亡,抑制细胞焦亡的发生对氧糖剥夺/恢复细胞模型具有保护作用。
- 王小燕肖宗懿易寒安雨轩宋娟陈菲王寿勇
- 关键词：氧糖剥夺
- 体外循环血浆对类中性粒细胞趋化和CXCR4表达的影响被引量：1
- 2018年
- 为研究体外循环血浆对类中性粒细胞趋化功能和CXCR4表达的影响,选择体外循环下心内直视手术(CPB组)和超声引导下外科微创室间隔缺损封堵术(N-CPB组)的患儿各12例,收集手术前后血浆,采用Transwell细胞培养系统测定其对体外培养的类中性粒细胞的趋化效应,并采用流式细胞术和Western blot测定经血浆刺激后类中性粒细胞表面趋化因子受体4[chemokine(C-X-C motif)receptor 4,CXCR4]蛋白质及其磷酸化水平的变化,运用RT-q PCR检测CXCR4 m RNA水平。结果表明,CPB血浆对类中性粒细胞趋化效应明显增强,T1和T2时刻趋化指数分别为3.89±0.77和7.68±1.55,CXCR4特异性拮抗剂AMD3100对这一增强效应有抑制作用;CPB血浆刺激后,类中性粒细胞表面CXCR4蛋白质及其磷酸化水平均明显升高,但其m RNA水平未发生明显变化。体外循环血浆可激活类中性粒细胞CXCR4信号通路,其机制与增加细胞表面CXCR4蛋白质及其磷酸化水平有关,但与其m RNA水平无关,这一机制可能与体外循环过程中中性粒细胞向肺部和其他血管外组织浸润有关。
- 彭艳华涂然杨陶波王寿勇
- 关键词：趋化因子受体4体外循环
- 大鼠体外循环前后血浆蛋白质差异性表达被引量：1
- 2015年
- 目的实施大鼠体外循环(CPB)前后血浆比较蛋白质组学研究,了解CPB前、后血浆蛋白质的差异性表达,以期发现对早期诊断CPB后并发症有参考价值的血浆标志物。方法将成年雄性SD大鼠10只分为实验组和对照组,每组5只,术前自由进食进水。实验组大鼠建立CPB模型,对照组只进行麻醉和动、静脉穿刺操作。两组动物分别在CPB前和CPB结束时采取血液标本1mL,肝素抗凝,分离血浆。血浆蛋白提纯后进行二维凝胶电泳、用ImageScanner扫描仪扫描成像。将被认定为差异表达的蛋白质斑点进行切胶、酶解和肽段提取后,用质谱仪分析鉴定。结果 CPB后,大鼠血浆蛋白质表达斑点数目明显增加,共有17个表达上调的蛋白质斑点被认定为CPB所致。经质谱分析,共鉴定出5种蛋白质,分别为:凝溶胶蛋白、结合珠蛋白、载脂蛋白A1(ApoA1)、免疫球蛋白和Ba1-647。结论 CPB可引起大鼠血浆蛋白质出现差异性表达,从功能上分析,凝溶胶蛋白、结合珠蛋白、ApoA1有可能作为研究CPB并发症的血浆标志物。
- 王寿勇马琳玉王颖张洲邓薇菲
- 关键词：血浆蛋白质组学生物学标记心肺转流术
- 大鼠体外循环模型的建立及改进被引量：2
- 2009年
- 目的对现有大鼠体外循环模型予以改进,降低模型复制难度,并使之更适合用于研究体外循环对肺功能的影响。方法成年雄性SD大鼠16只,体重300～350g,各8只分别用于建模和供血。经右颈静脉、左股静脉引流,右股动脉人工灌注建立体外循环,血气分析监测内环境变化。实验过程中,保留大鼠自主呼吸,不进行机械通气。结果成功建成8只大鼠体外循环模型并按计划顺利脱离人工循环。体外循环期间转流量为70～80mL/(kg.min),血流动力学监测和血气分析结果基本正常。结论进一步简化了建立大鼠体外循环模型的操作,最显著的改进之处在于避免了机械通气对大鼠肺功能潜在的不良效应,从而更加适合用于研究体外循环对肺功能的影响。
- 王寿勇李廷玉
- 关键词：心肺转流术急性肺损伤
- 体外循环患儿中性粒细胞自噬水平的变化及其对细胞存活的影响
- 2019年
- 为研究室间隔缺损修补术患儿体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)前后中性粒细胞自噬水平的变化,及其对细胞存活率的的影响,该研究以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿12例为CPB组,超声引导下室间隔缺损外科微创封堵术患儿12例为对照(N-CPB组)。分别采集T0(麻醉诱导后)、T1(CPB后/封堵器置入成功后)血液标本5 mL,分离中性粒细胞,用Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II的表达。结果显示,与T0相比,CPB组T1时中性粒细胞Beclin-1、LC3-II表达明显升高(P<0.05),而N-CPB组无明显变化;另以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿6例为对象,于T0、T1时采集血液标本5 mL,分离中性粒细胞,分为对照组和3-MA(自噬抑制剂)组,分别于0、1、2、4、8 h经锥虫蓝染色检测存活率。结果显示,与T0比较,来自T1的中性粒细胞存活率在0、1 h时显著升高(P<0.05);加入抑制剂三甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)后,T0和T1来源的中性粒细胞存活率均迅速降低(P<0.05);与对照组比较,3-MA组2、4、8 h时存活率显著降低(P<0.05)。该研究表明,CPB使室间隔缺损修补术患儿中性粒细胞自噬水平升高,细胞存活时间延长,抑制自噬能缩短细胞存活时间。
- 易寒杨陶波宋娟王小燕肖宗懿王寿勇
- 关键词：体外循环中性粒细胞自噬存活率
- 体外循环对心内直视手术患儿辅助性T淋巴细胞1、2功能及血浆正五聚体蛋白3的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨小儿心内直视手术中围体外循环期血浆γ干扰素（INF-γ）、白介素4（IL-4）和正五聚体蛋白3（PTX3）的水平及辅助性T淋巴细胞1（Th1）、Th2功能的变化。方法择期体外循环下行先天性心脏畸形矫治术的患儿16例，年龄3～52个月，体重3．4—14．5kg，ASA分级Ⅱ或Ⅲ级。在麻醉诱导后、体外循环5min、体外循环30min、停机5min、停机2h、停机4h、停机8h、停机16h采血液标本2ml，分离血浆并测定血浆INF-γ、IL-4、PTX3的浓度，计算INF-γ/IL-4比值。结果体外循环引起患儿血浆INF-1、IL-4、PTX3浓度及INF-γ／IL-4比值明显升高，体外循环结束后5min、4、8h时，血浆INF-γ/IL-4比值和PTX3、INF-γ水平恢复至体外循环前水平，但体外循环后16h血浆IL-4水平仍明显高于体外循环前。结论体外循环可引起心脏直视术患儿血浆PTX3水平升高和Th1、Th2功能变化，导致免疫平衡发生漂移。
- 王寿勇李廷玉郑玉强
- 关键词：心肺转流术
