国家自然科学基金(30170926)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
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- 相关机构：第二军医大学第三军医大学西南医院第三军医大学更多>>
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- 血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达被引量：4
- 2003年
- 目的 构建血管内皮生长因子 (VEGF)和Fas配体 (FasL)共表达质粒 ,并鉴定其在细胞中的表达情况。方法 根据人VEGF165和FasL的cDNA序列分别设计、合成引物 ,经扩增、连接、酶切、插入等得到重组表达质粒 pCI VEGF165和 pCI FasL。再以此为基础构建得到编码FasL和VEGF165的共表达质粒 pCI FasL IRES VEGF165 (简称pCI FIV )。用脂质体将各表达质粒(2 μg) 转染NIH 3T3细胞 ,用流式细胞术、ELISA和Western blot检测其FasL和VEGF165表达情况。结果 细胞裂解液的Western blot检测表明 ,重组质粒 pCI VEGF165和 pCI FIV能表达VEGF165 ,分子量与预期kD一致。细胞培养上清的ELISA检测表明 ,pCI VEGF165和pCI FIV均能分泌性表达VEGF165。流式细胞仪检测表明 ,质粒pCI FasL、pCI FIV稳定转染的NIH3T3细胞表面的绿色荧光阳性率分别为 98.0 %和 96.5 % ,而空载体转染细胞的阳性率为 3 .2 %。ELISA检测结果显示 ,pCI FasL、pCI FIV转染NIH3T3细胞培养上清中均存在可溶性FasL。 结论 成功构建的FasL和VEGF165共表达质粒可成功转染细胞并能分泌性表达VEGF165 ,同时可表达膜结合形式的FasL和可溶性FasL ,为将来血管内膜增生的基因治疗奠定了基础。
- 曲乐丰景在平
- 关键词：血管内皮生长因子FAS配体基因表达基因治疗
- 反义寡核苷酸防治血管吻合口内膜增生性再狭窄的机制探讨被引量：6
- 2002年
- 目的 探讨医用生物蛋白胶携载c myc反义寡核苷酸防治血管吻合口内膜增生性再狭窄的机制。方法 将 8只新西兰大白兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉后 ,随机分成实验组及对照组。对照组静脉间置后即缝合伤口 ;实验组将 30 0 μg反义c myc涂于2 .5ml医用生物蛋白胶中 ,并均匀涂于血管吻合口外周。术后 7d取材 ,提取组织总RNA ,进行RT PCR和NorthernBlot分析 ,图像扫描后进行计算机分析。结果 RT PCR显示实验组的c myc扩增产物量明显低于对照组 ,产物半定量分析提示两者差异有显著性 (P <0 .0 1) ;NorthernBlot图像扫描分析显示实验组的积分密度值 (2 .2 5± 0 .16 )明显低于对照组 (4.6 3± 0 .4 8) (P <0 .0 5 )。结论 反义c myc可通过碱基互补与其相应基因结合 ,封闭该基因的表达 ,使其促细胞增殖作用减弱 。
- 曲乐丰景在平曹贵松仲剑平
- 关键词：反义寡核苷酸血管吻合口血管内膜增生
- bcl-2基因短发夹RNA对自体移植静脉内膜增生的影响被引量：7
- 2006年
- 目的探讨针对bcl-2基因短发夹RNA对兔自体移植静脉内膜增生的影响。方法18只新西兰白兔,取颈外静脉,用含pshRNA-bcl-2质粒(基因组)或pH1质粒(空载体组)的阳离子脂质体溶液浸泡,空白对照组无特殊处理,间置于同侧颈总动脉。术后4周采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测bcl-2基因的表达,病理形态学观察血管新内膜增生改变。结果基因组移植静脉内膜的bcl-2的mRNA和蛋白均明显受到抑制。组织学检查显示,基因组新内膜厚度为(85．78±5．47)μm,空载体组为(175．2±10．90)μm,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论bcl-2基因的短发夹RNA可能通过降低血管bcl-2蛋白的表达抑制移植静脉内膜增生。
- 陈华景在平包俊敏赵志青曲乐丰冯翔程小星扬忠
- 关键词：RNA干扰静脉移植内膜增生
- RNA干扰对兔血管平滑肌细胞bcl-2基因表达的影响被引量：4
- 2007年
- 目的研究RNA干扰(RNAi)对兔血管平滑肌细胞(VSMCs)bcl-2基因表达的干扰效应。方法用脂质体法将构建的装载靶向bcl-2基因小干扰性RNA(siRNA)的表达载体(pshRNA-bcl-2质粒)转染VSMCs(基因组),以转染空载体的细胞和加DMEM的空白细胞作为对照,采用半定量RT-PCR和Westernblot法检测bcl-2基因的表达,用MTT法检测VSMCs生长情况。结果转染siRNA的表达载体可以抑制内源性bcl-2基因在转录和转译水平上的表达,基因组bcl-2的mRNA和蛋白表达较空载体组和空白对照组明显减少(P<0.01);基因组的VSMCs生长也较空载体组和空白对照组明显受到抑制(P<0.01)。结论载体介导的RNAi技术可明显抑制内源性bcl-2基因的表达和VSMCs生长。
- 陈华景在平包俊敏曲乐丰冯翔程小星扬忠
- 关键词：RNA干扰血管平滑肌细胞BCL-2基因
- 兔颈动脉无缝线胶黏吻合与传统缝线吻合的对比研究被引量：3
- 2004年
- 目的 对比研究兔颈动脉无缝线胶黏吻合与传统缝线吻合的手术操作情况和吻合口通畅情况。方法 将 16只新西兰大白兔随机分为对照组和实验组 ,记录每个吻合口的吻合时间及出血量 ,术后 1、2、4、12周分别取材观察其通畅情况 ,并对吻合口内膜增生情况行病理切片和计算机图像分析。结果 与对照组相比 ,实验组的手术时间明显缩短 [(8.19± 6.5 1)min比 (2 0 .5 0± 14 .3 5 )min] ,术中出血量明显减少 [(2 .44± 5 .83 )ml比 (10 .3 8± 17.49)ml] ,通畅率也较高 (93 .8%比87.5 % ) ,内膜增生程度明显减轻 ,术后 1、2、4、12周时其内膜厚度分别降低了 3 1.4%、2 4.5 %、2 3 .9%和 3 1.9% (P <0 .0 1) ,其内膜面积分别降低了 3 6.2 %、2 9.1%、3 1.3 %和 40 .0 % (P <0 .0 1)。结论 中小血管的无缝线胶黏吻合较传统的缝线吻合操作省时省力 ,术中出血少 ,避免了缝针和缝线对血管吻合口处的透壁性损伤 ,消除了缝线等异物对管壁的持续性刺激所致的增生性反应 ,使吻合口处内膜增生减轻 ,吻合口通畅率提高。
- 曲乐丰王玉琦景在平
- 关键词：颈动脉医用胶吻合口狭窄血管
- 中小血管无缝线胶粘吻合的可行性实验研究被引量：5
- 2003年
- 目的 探索一种损伤小、通畅率高、操作简便的中小血管吻合方法。方法 以医用胶行兔颈总动脉的无缝线胶粘吻合 ,将兔颈总动脉两断端间隔 12 0°缝合 3针作为牵引 ,在贴合紧密的两血管壁外膜上涂抹少量医用胶完成胶粘吻合 ,抽除 3针缝线即完成无缝线胶粘吻合。同时用自制的血管吻合口爆破压检测装置测定吻合口爆破压。结果 医用胶可完成中小血管的无缝线胶粘吻合 ,吻合口平均爆破压为 4 4 0mmHg(1mmHg =0 .133kPa)。 结论 无缝线胶粘吻合是可行的 ,其避免了缝针和缝线对血管吻合口处的透壁性损伤 ,消除了缝线等异物对血管壁持续性刺激所致的增生性反应。
- 曲乐丰王玉琦景在平
- 关键词：可行性医用胶吻合口狭窄血管吻合
