国家自然科学基金(30271463)
- 作品数：12 被引量：45H指数：4
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- 伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病患者ABL激酶区点突变的检测被引量：1
- 2008年
- 目的探讨伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)患者ABL酪氨酸激酶区点突变的发生情况及临床意义。方法采用巢式PCR扩增23例CML患者不同时期的40份骨髓标本的ABL激酶区,对扩增产物纯化、双向测序并进行序列同源性比对。结果7人(30.43%)检测出点突变,共导致5种类型的氨基酸替换:T315I3例,Y253H、E255K、F317L及G321W各1例。慢性期、加速期和急变期患者点突变的例数分别为2例、2例和3例。其中6例患者测序前经400mg/d伊马替尼治疗无效,加大伊马替尼剂量至(600～800)mg/d,随访3～6个月,仅F317L患者获得部分细胞遗传学缓解,另外5例患者均无遗传学反应,且Y253H和1例T315I疾病进展至急变期。G321W为初治慢性期患者,经400mg/d伊马替尼治疗达到完全血液学缓解,BCR-ABL+细胞比例显著下降。结论ABL激酶区点突变是CML患者对伊马替尼耐药的重要原因。不同类型的突变导致的耐药程度不完全相同,且并非所有点突变都会导致耐药的发生。监测ABL激酶区点突变有助于预测疗效并及早调整治疗。
- 欧阳昭杜庆锋刘晓力张嵩朱红倩龚峻梅宋兰林欧阳凌云刘志
- 关键词：慢性粒细胞白血病点突变耐药伊马替尼
- 双向凝胶电泳分析三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡被引量：5
- 2004年
- 背景与目的:三尖杉酯碱(harringtonine,HT)作为一种抗肿瘤药,已广泛用于治疗急、慢性髓系白血病,并已获得了良好的疗效。目前的研究表明其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡有关,但具体分子机制不详。本研究主要是分析HT诱导K562细胞凋亡的蛋白谱,寻找凋亡相关蛋白。方法:应用AnnexinⅤ和PI双染法,通过流式细胞术区分HT诱导K562细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段;进一步采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法,对HT诱导凋亡的K562细胞与对照K562细胞进行分离和比较。结果:10μg/mlHT作用于K562细胞5h和24h,凋亡早期细胞(AnnexinⅤ+/PI-)分别为28.3%和18.1%(P<0.01),凋亡晚期细胞(AnnexinⅤ+/PI+)分别为9.1%和20.2%(P<0.01)。配比分析对照组细胞和凋亡早期组、晚期组细胞的蛋白图谱,统计分析表明:对照组K562细胞可分离出1300±50个蛋白点,组内蛋白点匹配率为(88.3±2.0)%。凋亡晚期组细胞中有10个蛋白点发生了明显和稳定的质和量的改变(P<0.01),其中8个蛋白点在凋亡后表达量上调,1个蛋白点表达下调,1个蛋白点只在对照细胞内表达。结论:差异表达的蛋白可能是三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的相关蛋白。
- 李荣刘晓力杜庆锋张嵩周淑芸
- 关键词：K562细胞凋亡三尖杉酯碱HT双向凝胶电泳技术
- 慢性髓系白血病STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系
- 2007年
- 目的通过Bcr-Abl激酶ATP结合区测序分析,探讨慢性髓系白血病(CML)STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系。方法将CML患者分为对STI571耐药和非耐药两组,细胞系分为STI571耐药细胞系K562/G01、野生型K562/W细胞,进行骨髓单个核细胞或细胞系细胞Abl基因ATP结合区双向测序分析,了解Abl酪氨酸激酶ATP结合区点突变情况。PCR产物的序列长度为344bp,其中的180bp(98～277bp)为ABL激酶的第906～1085bpDNA序列片段,涵盖了Abl激酶的ATP结合区序列。结果K562/G01耐药细胞ABL激酶ATP结合区DNA测序与K562/W相同,与ABL激酶原序列相比,有两个同义点突变。在STI571耐药急变的CML患者骨髓单个核细胞Abl激酶ATP结合区测序结果发现:在8例耐药急变的患者中2例患者第944位核苷酸C→T单个碱基出现点突变,使苏氨酸(Thr)突变为异亮氨酸(Ile)。1例CML-CP的患者第1070碱基A→G替换,导致357位赖氨酸(Lys)→精氨酸(Arg)。结论Bcr/Abl融合基因ATP结合区的点突变是CML中STI571耐药的重要原因之一,对指导临床用药具有重要价值。
- 樊伟刘晓力张嵩杜庆锋王瑜姚锋周淑芸
- 关键词：慢性髓系白血病STI571点突变耐药性
- 慢性粒细胞白血病不同病期蛋白质组分析优化策略被引量：3
- 2007年
- 目的比较不同分组方法处理慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）急变前后骨髓细胞蛋白的差异表达，筛选急变相关蛋白。方法应用双向凝胶电泳（two—dimensional electrophoresis，2-DE）分析技术，比较急变前后三种分组方法（混合标本组、随机标本组、个体标本组）时骨髓细胞蛋白质的差异表达，并进行质谱鉴定。结果急变前后蛋白图谱匹配率在混合标本组为70．0678％；随机标本组两两配对比较，匹配率在43．2604％～58．3477％之间；个体标本组为74．0988％。混合标本组和随机标本组的相同差异蛋白点为103个，采用X^2检验P〉0．05。从三组共同表达的差异蛋白中选取了20个进行质谱分析，明确鉴定出15个蛋白质。结论蛋白质组学分析中，采用骨髓细胞混合标本分组策略可获得相关差异蛋白，且可有效消除个体差异，简化实验流程。
- 姚峰李荣刘晓力杜庆锋张嵩樊伟朱红倩
- 关键词：慢性粒细胞白血病蛋白质组急变双向凝胶电泳
- STI571诱导K562细胞耐药机制的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。
- 张嵩杜庆锋刘晓力李荣樊伟朱红倩王瑜
- 关键词：STI571耐药机制K562细胞系分子靶向药物抗肿瘤药物
- 慢性髓系白血病粘附相关分子整合素β1及局部粘附激酶的研究被引量：8
- 2003年
- 目的研究整合素β1及局部粘附激酶(FAK)在慢性髓系白血病(CML)进展过程中的变化及干扰素治疗对FAK的可能作用。方法(1)应用流式细胞仪检测正常对照组、CML慢性期组及CML急变组骨髓CD34+细胞的胞膜表面CD29及胞质FAK表达量;(2)将正常对照及CML慢性期骨髓单个核细胞分为IFN处理组及非处理组培养48 h后提取总蛋白,应用Western blotting检测FAK含量变化。结果(1)CML慢性期骨髓CD34+细胞表面CD29的表达与对照组无显著差异,而胞内FAK含量则下降;(2)CML急变期骨髓CD34+细胞表面CD29的表达较慢性期明显升高而胞内FAK含量则较慢性期进一步下降;(3)IFN处理前后正常骨髓单个核细胞FAK的含量无明显差异;(4)IFN处理后CML骨髓单个核细胞FAK含量较未处理组明显上升。结论整合素β1及FAK表达变化可能是CML进展恶化的原因之一,而IFN-α可能通过恢复FAK含量来改善β1受体介导的粘附信号通路的缺陷。
- 常铉刘晓力杜庆锋李荣冯茹陈琪刘启发周淑芸
- 关键词：慢性髓系白血病整合素Β1细胞粘附分子干扰素
- IM-9细胞间期核内第9,22号染色体空间结构的变化在慢性髓性白血病发病中的作用
- 2003年
- 目的 :观察辐射对 IM- 9细胞间期核内第 9,2 2号染色体三维空间结构的影响 ,探讨 t(9;2 2 ) (q34;q12 )染色体易位的形成机制 ,从生物体视学角度探讨慢性髓系白血病发病机制。方法 :运用激光共聚焦显微镜技术和荧光原位杂交方法 ,分析人淋巴细胞株 IM- 9间期核内第 9,2 2号染色体的体积和表面积在细胞周期中的变化 ,观察辐射对其产生的影响并同 K5 6 2细胞相比较。结果 :IM- 9细胞间期核内第 9或 2 2号染色体的体积在细胞周期的同一时相内同 K5 6 2细胞无明显差别 (P>0 .0 5 ) ,放射对其也无影响 ;但放射可以使第 9或 2 2号染色体的表面积明显增加 ,并且在 S期和 G2 / M期明显大于 G1 期 (P<0 .0 5 ) ;这一特征同 K5 6 2细胞的表现是相一致的。结论 :辐射可以改变 IM- 9细胞染色体的三维空间结构并使其更具有慢性髓系白血病细胞的特征 ,这种改变对于慢性髓系白血病的发病可能具有重要意义。
- 张青周淑芸刘晓力徐岚牛超陈赛娟
- 关键词：染色体激光共聚焦显微镜慢性髓系白血病
- 三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的蛋白质组研究被引量：21
- 2004年
- 目的 应用比较蛋白质组技术 ,寻找并鉴定与细胞凋亡相关的蛋白质 ,探讨三尖杉酯碱(HT)促进白血病细胞凋亡的分子机制。方法 应用AnnexinⅤ和PI双染法 ,通过流式细胞术区分HT诱导K5 6 2细胞凋亡早期和凋亡晚期阶段。并进一步运用比较蛋白质组的研究方法 ,对HT诱导K5 6 2细胞凋亡的相关蛋白进行“蛋白差异显示”、质谱鉴定和数据库查询。结果 10 μg/mlHT作用K5 6 2细胞 5h和 2 4h ,凋亡细胞主群处于凋亡早期和凋亡晚期阶段 ;配比分析对照细胞和凋亡早期及晚期的蛋白图谱 ,统计学分析表明 ,在凋亡晚期组中 3个斑点消失 ,7个斑点表达量显著降低 ,10个斑点表达量显著升高 ;选择 10个表达量改变并且蛋白表达量较大的斑点进行肽指纹谱鉴定 ,其中 5个蛋白斑点鉴定结果比较肯定 ,分别为角蛋白 9、BTF3、色氨酰tRNA合成酶 (tryptophany1 tRNAsyn thetase,TrpRS)、RS和 prohibitin。 结论 在凋亡细胞中TrpRS、RS和 prohibitin表达上调以及BTF3表达下调 ,主要影响核酸转录和蛋白合成。角蛋白 9表达增加是一种凋亡抵抗反应。
- 李荣刘晓力杜庆锋张嵩罗荣城周淑芸
- 关键词：三尖杉酯碱K562细胞细胞凋亡蛋白质慢性髓细胞白血病CML
- SHP1表达与慢性粒细胞白血病进展的初步研究被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨SHP1表达与CML急变的关系;构建SHP1真核表达载体.方法:应用RT-PCR比较慢性期和急变期CML患者原代细胞中SHP1的mRNA转录本水平;SHP1真核表达载体pcDNA3.0-SHP1的测序,检测其mRNA和蛋白表达.结果:急变期患者SHP1转录本水平明显下降,与正常对照间存在统计学差异;pcDNA3.0-SHP1转染K562细胞,可表达SHP1mRNA和蛋白.结论:SHP1的表达下调可能与CML由慢性期朝加速/急变期演化过程有关;成功构建了SHP1真核表达载体pcDNA3.0-SHP1.
- 李宁杜庆锋张嵩刘晓力周淑芸
- STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究
- 2007年
- 目的研究ST I571诱导K 562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制。方法用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K 562细胞(K 562-W)对ST I571产生耐药,用台盼蓝染色、M TT法对耐药K 562细胞(K 562-R)进行特性鉴定。应用DNA芯片技术对ST I571耐药前后的K 562细胞的基因差异表达进行检测。结果诱导出K 562-R的耐药浓度为0.5μm ol/L,活细胞比例为98.5%。芯片结果发现662个基因出现差异表达,其中335个基因表达上调,327个基因表达下调。结论利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因,可为ST I571耐药机制的研究提供新的切入点。
- 樊伟刘晓力张嵩杜庆锋姚锋王瑜周淑芸
- 关键词：STI571K562细胞基因表达谱
