中国博士后科学基金(023203010)
- 作品数：2 被引量：20H指数：2
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- 基于CTC-流式细胞仪活性细菌总数的快速检测技术研究被引量：11
- 2013年
- 以大肠杆菌作为研究对象,建立一种5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride(CTC)染色结合流式细胞仪(CTC-FCM)的方法,以选择性检测水环境中具有代谢活性的细菌总数.该方法的原理是细菌与具有氧化还原性的染料CTC发生反应,形成红色荧光物质,被流式细胞仪特异性识别进而可选择性检测活性菌.研究结果表明,CTC染色的最佳反应条件为:CTC浓度为2mmol·L-1、37℃避光孵育3h.该方法最低检测限为103个·mL-1.通过比较培养法和CTC-FCM方法检测热灭活后的大肠杆菌,结果表明CTC-FCM方法可准确区分活性菌和灭活菌,且与培养法之间具有较好的线性关系(R2=0.9465).应用CTC-FCM方法检测实际样品,结果显示该方法与培养法之间有较好的线性关系(R2=0.8121).本研究建立的CTC-FCM方法可满足饮用水水质标准需求,且检测时间比平板培养法缩短20～40h,可以用于环境水样中活性细菌总数检测.
- 林怡雯杨天李丹何苗
- 关键词：TETRAZOLIUM流式细胞仪
- 基于RT-qPCR选择性检测水中活性病原菌被引量：9
- 2012年
- 以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量PCR(reverse transcription q quantitative PCR,RT-qPCR)方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-PCR逆转录成cDNA后利用qPCR可定量目的基因拷贝数,对处于稳定生长期的大肠杆菌(培养6～18 h)和粪肠球菌(培养10～38 h)体内的RNA含量进行检测分别为1 copies.CFU-1和7.98×102copies.CFU-1,以此作为细菌定量的依据,达到准确定量检测水体中目的基因RNA拷贝数而确定活性细菌含量的目的.通过3种方法(培养法、qPCR、RT-qPCR)检测热灭活后的大肠杆菌和粪肠球菌,结果表明与qPCR相比,RT-qPCR能够区分1.43 lg copy(大肠杆菌)与2.5 lg copy(粪肠球菌)的非活性菌,进而选择性检测活性病原菌.实际水样底物基质对RT-qPCR方法的影响不大,RT-qPCR与培养法之间有较好的线性相关性(大肠杆菌,R2=0.930,粪肠球菌,R2=0.948),本研究建立的方法可以用于实际水样活性病原菌的检测.
- 林怡雯李丹吴舒旭何苗杨天
- 关键词：RNA大肠杆菌粪肠球菌
