武汉大学科技创新基金(204270023)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 枯草芽孢杆菌proA基因突变对提高大肠杆菌转化子渗透压耐受能力的影响
- 2006年
- 将枯草芽孢杆菌93151野生型菌株的proB基因和耐盐突变株93151-14的proA基因,进行体内重组,筛选出含有野生型proB和突变型proA杂合基因的转化子.此杂合基因能够与脯氨酸营养缺陷型大肠杆菌JM83功能互补.分别测定了大肠杆菌JM83三种转化子(分别含有野生型proBA基因,双突变proBA基因和杂合proBA基因)的耐盐能力,发现含有杂合proBA基因转化子的耐盐能力(0.45 mol/L)尽管比含有双突变proBA基因的转化子(0.5 mol/L)要低一些,但比含有野生型proBA基因的转化子(0.3 mol/L)要高得多.测定了3种转化子在不同盐浓度下生长时的胞内自由脯氨酸含量,发现其含量均随着盐浓度的上升而提高,表明其耐渗透压胁迫能力的提高与胞内自由脯氨酸的积累密切相关.但在相同盐浓度下,含有杂合proBA基因转化子的胞内自由脯氨酸含量要低于含有双突变proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量,但明显高于含有野生型proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量.说明尽管proB基因的突变在提高细胞耐高渗胁迫的能力中,有重要作用但proA基因的突变也发挥了不可忽视的作用.
- 魏红波曹军卫陈明清刘瑞杰
- 渗透压调节基因proBA的融合表达对大肠杆菌耐高渗胁迫能力的影响被引量：6
- 2005年
- 枯草芽孢杆菌 9315 1的渗透压调节基因proB和proA以重叠基因的方式组织 ,但是表达两个单独的蛋白质ProB和ProA。通过引物设计 ,在抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变菌株 9315 1 14的proBA基因重叠区引入一个限制性酶切位点 ,分别扩增出proB和proA基因 ,并构建融合的proBA基因。SDS PAGE分析显示有一条新的分子质量约为85kD的蛋白带出现。相对于表达未融合的proB和proA 。
- 刘瑞杰陈婷曹军卫
- 关键词：枯草芽孢杆菌脯氨酸融合基因
- 枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究被引量：5
- 2004年
- 利用TaKaRaLAPCRTM试剂盒扩增枯草芽孢杆菌 931 5 1耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果 ,设计引物 ,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。将出发菌株和突变株的proBA基因分别转化大肠杆菌JM83(proBA- ) ,均能够与其功能互补。SDS PAGE分析其表达产物 ,有两条分子量分别约为 4 0kD和 4 5kD的新蛋白带出现。测定 4种转化子 (分别含有出发菌株和突变株proB基因的大肠杆菌 1 1 2 5 2转化子及proBA基因的大肠杆菌JM83转化子 )的耐盐能力。发现含有突变株proB或proBA基因转化子的耐盐能力 ,均比相应的含有出发菌株proB或proBA基因的转化子高。另外含有出发菌株和突变株的proBA基因转化子的耐盐能力 ,也均比相应的仅含proB基因的转化子高 ,表明枯草芽孢杆菌的ProA比大肠杆菌的ProA更为有效。测定所有JM83转化子胞内自由脯氨酸 ,发现其含量随盐浓度的上升而提高 。
- 刘瑞杰曹军卫苗丽霞
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
