国家自然科学基金(30700836)
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 相关作者：周洁冷静郭晓云刘金华王启辉更多>>
- 相关机构：广西医科大学第一附属医院广西医科大学广西中医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 穿膜肽-EGFP融合蛋白的表达、纯化与鉴定被引量：4
- 2010年
- 目的构建EGFP-CPPs融合基因载体,表达、纯化并鉴定EGFP-CPPs融合蛋白。方法通过碱基合成的方法合成含有CPPs基因序列的EGFP上游引物,PCR扩增后收集CPPs-EGFP融合基因片段并电泳鉴定,将融合基因表达载体转染大肠杆菌并扩增表达,收集表达蛋白后过层析柱纯化,蛋白电泳检测表达蛋白分子质量,蛋白飞行质谱分析检测蛋白序列,体外细胞实验验证其穿膜功能。结果电泳检测可见与CPPs-EGFP分子质量对应的电泳条带,构建质粒测序含有目的基因序列。蛋白电泳检测到纯度较高的融合蛋白,其蛋白序列与目的序列一致。体外细胞实验证实了融合蛋白的穿膜功能。结论成功制备了具有穿膜功能的CPPs-EGFP融合蛋白,为其促进抗体-蛋白微球偶联物进入肿瘤细胞发挥治疗作用的研究奠定了基础。
- 周洁郭晓云冷静万彦彬
- 关键词：穿膜肽增强型绿色荧光蛋白膀胱肿瘤
- 细胞穿膜肽的治疗应用被引量：5
- 2011年
- 细胞穿膜肽(CPPs)是具有细胞膜穿透能力的小分子多肽,能将蛋白质、多肽、核酸片段等以多种方式导入哺乳动物细胞内,其转导效率高且不会造成细胞损伤。CPPs的具体穿膜机制尚不清楚,甚至互相矛盾,但并不影响其在生命科学研究领域,包括基础研究和临床研究中的应用。CPPs已经在肿瘤、心肌病、免疫治疗等临床领域展现出很大的研究价值,并且已经取得了不少新的进展,具有广泛的应用前景。
- 刘金华周洁冷静
- 关键词：穿膜肽
- 穿膜肽-抗体-微球偶联物的制备方法研究被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨制备穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的可行性。方法:采用N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(SPDP)交联法将穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白(CPPs-EGFP)、牛血清白蛋白微球(BSA-NS)、乙肝高效价免疫球蛋白(HBIg)分别采用一次偶联法和二次偶联法两种交联方案进行共价交联,采用还原和非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫荧光法评价穿膜肽、抗体、微球间的交联。结果:两种交联方案制备的穿膜肽-抗体-微球偶联物,SDS-PAGE还原电泳均可见在低分子量端形成三条蛋白条带,非还原电泳均未见条带;在不同激发波长的荧光显微镜下,均可见微球表面分别发出绿色荧光和红色荧光。结论:应用SP-DP交联剂,无论是一次偶联法还是二次偶联法均能够将穿膜肽、抗体、微球有效地进行偶联,为进一步研究穿膜肽-抗体-微球新型药物传送系统的特性奠定了基础。
- 王启辉刘金华周洁冷静
- 关键词：抗体穿膜肽牛血清白蛋白微球
- CPPs-BDI-1-载丝裂霉素白蛋白纳米微球的构建及其体外内化人膀胱癌细胞潜能的可行性研究被引量：2
- 2014年
- 目的 分析CPPs-BDI-1-载丝裂霉素（MMC）白蛋白纳米微球三联体的构建及其体外对人膀胱癌细胞转染的潜在能力,为后续实验构建靶向膀胱癌的新型药物传送系统及治疗奠定基础.方法 于2011年2月至2013年10月,制备穿膜肽增强型绿色荧光蛋白TAT-EGFP、抗人膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）、载丝裂霉素微球（MMC-NS）,采用异型双功能连接剂SPDP耦联构建纳米微球三联体CPPs-BDI-1-MMC-NS.应用构建的纳米微球三联体体外转染人膀胱癌细胞,通过激光共聚焦、扫描电子显微镜及透射电子显微镜检测白蛋白纳米微球三联体对人膀胱癌细胞的内化潜能及其治疗效果.结果 应用异型双功能连接剂SPDP成功耦联穿膜肽、BDI-1、载MMC白蛋白纳米微球制成三联体CPPs-BDI-1-MMC-NS,纳米微球直径300 nm,可携带化疗药物.实验证实微球三联体具有很强的肿瘤细胞靶向性和穿膜活性,可以高效转染人膀胱癌细胞.结论 制备的白蛋白纳米微球三联体可以作为一种新型靶向膀胱癌的药物传送系统;发现肿瘤细胞膜表面微绒毛与载MMC白蛋白纳米微球三联体内化细胞内部相关,且微球内化入肿瘤细胞后微绒毛消失.
- 李云龙周洁王启辉严春寅
- 关键词：膀胱癌
- 三氧化二砷免疫蛋白微球对膀胱肿瘤的杀伤作用及机制探讨被引量：3
- 2008年
- 目的探讨单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As2O3-(HAS-NS)-BDI-1]对膀胱肿瘤的杀伤作用及其机制。方法建立裸鼠膀胱肿瘤模型,经尿道置套管针膀胱灌注As2O3-(HAS-NS)-BDI-1。观察小鼠生存情况并记录生存时间。解剖显微镜下观察肿瘤生长和浸润情况及各器官毒性表现。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果As2O3-(HAS-NS)-BDI-1组肿瘤生长及向周围浸润受到明显抑制(95.2%),且各器官毒性表现明显较As2O3组轻。As2O3-(HAS-NS)-BDI-1组小鼠膀胱肿瘤细胞凋亡率明显高于其他各组(P均<0.05)。结论As2O3-(HAS-NS)-BDI-1膀胱灌注可抑制原位膀胱肿瘤生长且不引起明显的全身不良反应,其作用机制与As2O3促进肿瘤细胞凋亡有关。
- 周洁郭晓云莫曾南曾甫清
- 关键词：三氧化二砷膀胱肿瘤膀胱灌注
- 穿膜肽与蛋白微球偶联物的制备及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球(BSA-NP)偶联物,并检测其对膀胱癌EJ细胞的穿膜活性。方法:通过异型双功能交联剂N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯(SPDP)交联的方法制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电镜、荧光显微镜及共聚焦显微镜检测其共价连接及活性。结果:SDS-PAGE电泳鉴定TAT-EGFP与白蛋白微球是通过共价键连接;电镜显示二联偶联物(TAT-EGFP-BSA-NP)的构象;荧光显微镜及电镜显示了二联偶联物的穿膜活性。结论:成功的制备穿膜肽TAT-EGFP与白蛋白微球偶联物-TAT-EGFP-BSA-NP,且偶联物对膀胱癌细胞有穿膜活性。
- 刘金华周洁冷静
- 关键词：穿膜肽
- 瘦素在前列腺癌与前列腺增生组织中的表达及意义被引量：3
- 2008年
- 目的探讨瘦素在前列腺癌与前列腺增生患者血清的表达及其在前列腺癌发生发展中的意义。方法采用ELISA法检测前列腺癌与前列腺增生患者血清中瘦素含量,免疫组化法检测瘦素的表达。结果前列腺癌组瘦素阳性率及表达量明显要高于前列腺增生组,瘦素含量与前列腺癌相关抗原呈正相关。前列腺癌组瘦素表达阳性率明显高于前列腺增生组,激素非依赖性前列腺癌组瘦素表达阳性率高于激素依赖性前列腺癌组。结论瘦素与前列腺癌及前列腺增生有明显的相关性,可能是促进前列腺癌发生发展的关键环节。
- 郭晓云周洁叶洁梅冷静
- 关键词：瘦素前列腺肿瘤前列腺增生
- 裸小鼠原位人膀胱癌细胞浅表膀胱癌模型的建立被引量：2
- 2013年
- 目的 建立一种新型裸小鼠原位膀胱癌模型.方法 设计一种将人膀胱癌细胞种植在裸小鼠膀胱上的新型建模装置.采用24只BALB/c裸小鼠,建立裸小鼠原位人膀胱癌细胞浅表膀胱癌模型;随机分为两组,实验组应用本装置,经尿道插入裸小鼠膀胱,进行定位膀胱黏膜切割,再灌注EJ人膀胱癌细胞进行种植;对照组采用开腹后直视下用细穿刺针穿入膀胱腔内划割黏膜,再灌注EJ人膀胱癌细胞进行种植,监测两组膀胱癌细胞在裸小鼠膀胱黏膜上的生长.结果 成功地应用本模型建立装置建立裸小鼠膀胱癌原位模型,实验组成瘤率为91.7％ （11/12）,对照组成瘤率为55.6％ （5/9）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 本膀胱癌原位模型的建立装置微创、简便、高效.
- 李云龙严春寅李巧星吴刚王伟录王勇郑红芳周洁
- 关键词：裸小鼠膀胱癌
- 穿膜肽促进三氧化二砷蛋白微球进入膀胱肿瘤EJ细胞的实验研究
- 2013年
- 目的:研究穿膜肽(CPPs)对载三氧化二砷蛋白微球进入细胞内的促进作用。方法:通过交联固化的方法制备三氧化二砷蛋白微球,N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)-丙酸脂(SPDP)交联的方法制备穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白-三氧化二砷蛋白微球偶联物(As2O3-NS-CPPs-EGFP)。采用还原电泳、荧光显微镜和扫描电镜观察的方法鉴定As2O3-NS-CPPs-EGFP偶联物,激光共聚焦显微镜和透射电镜观察穿膜肽对蛋白微球进入细胞的促进作用,细胞内砷浓度测定明确药物细胞内传送效率。结果:CPPs-EGFP与三氧化二砷蛋白微球之间通过共价健连接,与穿膜肽偶联的三氧化二砷蛋白微球进入细胞内速度明显要快于单纯的三氧化二砷蛋白微球,用As2O3-NS-CPPs-EGFP处理组膀胱肿瘤细胞内砷浓度明显高于As2O3-NSEGFP处理组。结论:CPPs-EGFP具有促进As2O3-NS进入膀胱肿瘤细胞内的作用。
- 周洁王启辉
- 关键词：蛋白微球三氧化二砷膀胱肿瘤
