上海市自然科学基金(06ZR14054)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：徐焕宇曾溢滔马睛雯龚秀丽郭歆冰更多>>
- 相关机构：上海交通大学卫生部上海市儿童医院更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>
- 卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。
- 徐焕宇龚秀丽郭歆冰马睛雯曾溢滔
- 关键词：卵母细胞基因操作位点特异性重组
- 一种快捷可靠评价链霉菌噬菌体准ФC31整合酶功能的双荧光报告系统(英文)
- 2009年
- 在NIH3T3细胞中构建了一种链霉菌噬菌体准ФC31整合酶报告系统.该报告载体同时编码红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白,与编码准ФC31整合酶的载体共转染可以反映准ФC31整合酶的活性.细胞中从红色荧光到绿色荧光的变化和百分比的变化可经流式细胞仪检出.随着转染中准ФC31整合酶表达载体的比例升高,表达绿色荧光的细胞比例上升.准ФC31整合酶表达载体和报告系统载体比例在10∶1时,可达最高约90%的红绿荧光转变率.这表明该准ФC31整合酶报告系统提供了一种在细胞中快捷可靠的评价准ФC31整合酶功能的方法.
- 徐焕宇马晴雯任兆瑞巩芷娟黄淑帧曾凡一曾溢滔
- 关键词：位点特异性重组
