国家自然科学基金(30872587)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 重组人干扰素α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)药物敏感性分析
- 2012年
- 通过BACTEC MGITTM 960全自动分枝杆菌培养鉴定/药敏仪对重组人干扰素α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)菌株进行利福平等10种抗菌药物的敏感性试验,以野生BCG作对照观察药物对重组BCG菌株活性的潜在影响.结果发现:重组人干扰素α-2b-卡介苗在系统感染上对喹酮类的氧氟沙星、环丙沙星敏感,对氨基糖苷类药物的庆大霉素和卡那霉素耐药.在抗结核类药物中,除对吡嗪酰胺耐药外,对利福平等其他几种抗生素均敏感.因尿液回收率高,几乎所有的抗菌药物都对膀胱中的菌株有影响.
- 李娜牛瑞芳韩瑞发孙二琳
- 关键词：重组BCG人干扰素Α-2B
- 重组hIFN-α-2b—BCG对小鼠原位膀胱肿瘤免疫效应的研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨重组hIFN-α-2bBCG对原位膀胱肿瘤小鼠体内抗肿瘤免疫反应及其作用机制。方法构建C57BL／6原位膀胱肿瘤小鼠模型，采用流式细胞仪对小鼠膀胱灌注治疗后的淋巴细胞亚群进行分析，并测定小鼠血清中mTNF-α和mlI，12的水平，了解小鼠全身免疫状况。肿瘤组织冰冻切片进行T细胞亚群的免疫组织化学分析，免疫组化检测肿瘤Fas表达，了解膀胱局部免疫反应。结果重组BCG灌注治疗后小鼠外周血CD4＋细胞比例明显增高，CD8＋细胞比例无明显变化，CD4＋／CD8＋比例为2．63，与野生BCG组（2．10）比较差异有统计学意义（P〈0．05）。荷瘤小鼠外周血中Th1型细胞因子mTNF-α和mIL-12灌注治疗后比PBS对照组大幅提高，重组BCG组mTNF-α为806pg／ml，mIL-12为860pg／ml，与野生BCG组及野牛BCG联合IFN组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。重组BCG组瘤组织内CD2、CD3和CD8检测强阳性，显著高于PBS对照组（P〈0．05），重组BCG组和野生BCG加IFN组瘤组织CD4＋、重组BCG组CD8＋检测值显著高于野生BCG组（P〈O．05）。BCG灌注后荷瘤小鼠膀胱肿瘤表达Fas明显高于PBS对照组（P〈0．05）。结论重组hIFN-α-2b—BCG具有在小鼠体内调节系统及局部免疫能力的作用，纠正荷瘤小鼠淋巴细胞亚群的比例失调，增强局部淋巴细胞浸润，具有增强Th1型细胞因子产生作用，上调荷瘤小鼠Fas的表达，诱导对膀胱肿瘤细胞的免疫攻击。
- 孙二琳范晓东王玉叶韩瑞发
- 关键词：重组BCGIFN-Α-2B膀胱肿瘤淋巴细胞亚群
- 重组人干扰素α-2b-卡介苗对膀胱癌MB49细胞的体外作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨重组人干扰素α-2b-卡介苗（hIFN—α-2b—BCG）对膀胱肿瘤细胞的直接效应及其作用机制。方法采用体外实验，将重组hIFN-α-2b—BCG直接作用于小鼠膀胱癌MB-49细胞，荧光染色后，在光镜和电镜下观察细胞的变化。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞仪（FCM），检测野生型BCG和重组hIFN—α-2b—BCG对MB49细胞的影响。结果重组hIFN-α-2b—BCG与MB49细胞共培养后，光镜下见肿瘤细胞变圆，增殖速度明显减缓，部分细胞脱壁，胞浆呈大量空泡和颗粒状。透射电子显微镜下可见肿瘤细胞表面微绒毛脱落，细胞质坏死，大量空泡，细胞表面有出泡现象。吖啶橙染色后，在荧光显微镜下可见肿瘤细胞聚集成团状的细胞球体，胞突消失，凋亡小体出现。Hoechst33258染色后，可见大量肿瘤细胞呈明亮的蓝色荧光。MTT测定结果显示，随共培养时间延长，重组hIFN—α-2b—BCG可不同程度抑制肿瘤细胞的生长，抑制率高于野生BCG。FCM检测结果显示，24h后野生型BCG诱导凋亡率为10．8％，重组hIFN—α-2b—BCG诱导凋亡率为19．7％；48h后野生型BCG诱导凋亡率为20．9％，重组hIFN—α-2b—BCG诱导凋亡率为46．6％。两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。重组hIFN-α-2b—BCG上调MB49细胞MHC—I表达，具有时间依赖性，且上调比例明显高于野生型BCG（P〈0．01）。结论重组hIFN—α-2b—BCG成功诱导肿瘤细胞凋亡，有更高的调节免疫原性、抗肿瘤作用和细胞毒性。
- 孙二琳范晓东韩瑞发牛远杰
- 关键词：膀胱肿瘤重组卡介苗人干扰素Α-2B
- 重组hIFN-α-2b-BCG的冻干制备及生物特性的研究
- 2010年
- 目的:研究重组hIFN-α-2b-BCG真空冷冻干燥的制备工艺,研究冻干后生物特性的变化。方法:采用真空冷冻干燥法制备重组BCG(rBCG),筛选最佳工艺参数。平板计数法比较冷冻干前后的活菌数,计算存活率。比较冻干前后rBCG的抗酸染色特征与形态,连续测定OD值,绘制生长曲线,酶联免疫吸附测定(ELISA)IFN-α-2b表达水平。PCR和抗性培养分析冻干后的质粒稳定性。结果:冻干后重组BCG为(6.51±0.33)×106CFU/mL,冻干前为(1.02±0.11)×107CFU/mL,存活率约65%,达到BCG生物免疫治疗所需的活菌标准。冻干前后的菌落形态、生长曲线及抗酸染色特征无明显差异。质粒插入基因稳定率91.7%,丢失率为8.3%。冻干前后分泌IFN-α-2b水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功制备了重组hIFN-α-2bBCG冻干制剂,活菌数达到生物免疫治疗标准,其生物学特性和质粒稳定性均可耐受冷冻、低温与真空干燥过程中的不利影响。
- 孙二琳赵杰范晓东韩瑞发
