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采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变被引量：8: 2009年; 目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病（CML）、22例原发性血小板增多症（ET）、11例原发性骨髓纤维化（PMF）、9例真性红细胞增多症（PV）、7例嗜酸粒细胞增多症患者，分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统（ARMS）对JAK2 V617F突变进行检测，并采用基因测序对结果进行验证。将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株（HEL）DNA作为阳性对照，比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度。结果采用荧光定量PCR检测，野生型的熔解温度（Tm）峰出现于（75．0±0．2）℃处，突变型的Tm峰出现于（76．6±0．2）℃处。JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例（88．9％）、12例（54．5％）、7例（63．6％），但在71例CML中只检出1例（1．4％）。荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100％，结果经过测序证实。使用荧光定量PCR法可在每10^6个正常白细胞中检出低至10^2个HEL细胞，而使用ARMS方法时要在每10^6个正常白细胞中HEL细胞达到10^4个时，方可检测出，前者比后者方法灵敏100倍。结论成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，比ARMS更灵敏、简便，适合临床使用。JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率，可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标。; 张心菊顾小叶刘双春马玮哲关明; 关键词：骨髓增殖性疾病 JANUS激酶2 突变聚合酶链反应

前列腺癌组织中DLC-1启动子甲基化定量检测的HRM方法建立及其应用意义被引量：6: 2010年; 目的建立HRM技术定量检测DLC-1启动子甲基化的方法，并分析探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌病理参数的相关性。方法选取89份前列腺癌组织以及10份匹配癌旁组织标本，采用LCM收集肿瘤细胞群，抽提DNA后进行甲基化修饰。以CpGenomeUniversal Methylated DNA作为100％甲基化样本，以100％非甲基化的健康人外周血DNA作为稀释剂，分别制成100％、80％、50％、30％、10％、0％系列浓度的标准曲线，并进行重复性和灵敏性评价。同时用HRM技术定量检测前列腺癌细胞中DLC-1甲基化水平，探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌患者年龄、PSA水平与前列腺癌TNM的关系。结果100％、80％、50％、30％、10％、0％甲基化标准品的HRM熔解曲线从右往左依次排列，10份癌旁组织标本、35份前列腺癌组织标本重叠在0％标准曲线上；5份前列腺癌组织标本位于0％～30％区域内，29份位于31％～80％区域内，20份位于81％-100％区域内。HRM技术最低检测限可达10％的甲基化水平，优于MSP检测（30％甲基化水平）。DLC-1甲基化水平与前列腺癌患者年龄无明显相关（χ2=3．29，P=0．19），与PSA水平也无相关性（χ2=2．04，P=0．36），但DLC-1甲基化水平与TNM分期显著相关（r=9．04，P=0．01），且随TNM分期增高而增高。结论成功建立的HRM技术定量检测DLC-1甲基化水平的方法稳定、灵敏、操作简单，DLC-1启动子甲基化有望成为评估前列腺癌TNM的分子指标。; 郭林张心菊关明刘瑞来顾小叶马玮哲; 关键词：肿瘤抑制蛋白质类甲基化

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国家自然科学基金(30872590)

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