湖北省教育厅科学技术研究项目(D20082405)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- PE P-1-血红素加氧酶-1融合蛋白预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响
- 2014年
- 目的：评价细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1（HO-1）预处理对L02肝细胞缺氧复氧损伤的影响。方法利用基因工程手段表达和纯化融合蛋白PEP-1-HO-1（PEP-1-heme oxy-genase-1，PEP-1-HO-1）。使用人肝细胞株（HL-7702）建立培养人肝细胞缺氧复氧模型。按实验需要以10％新生牛血清的DMEM液静置培养L02肝细胞，将细胞进行随机分为7组：A组，正常对照组（常规培养）；B组，缺氧复氧组（缺氧复氧组细胞缺氧18 h，复氧6 h）；C组，PEP-1-HO-1预处理组，按PEP-1-HO-1浓度分为5亚组（C1，0．125μmol/L；C2，0．25μmol/L ；C3，0．5μmol/L；C4，1．0μmol/L；C5，2．0μmol/L，缺氧前以PEP-1-HO-1融合蛋白预处理2 h，缺氧18 h，复氧6 h）。复氧结束后，收集各组细胞及培养液上清，检测MDA、LDH、AST、ALT含量及SOD活性。结果缺氧复氧组较正常对照组相比，MDA、LDH、AST及ALT水平明显升高（P＜0．05），而 SOD 水平下降（P＜0．05）；PEP-1-HO-1预处理组与缺氧复氧组相比，预处理组能明显降低MDA、LDH、AST及ALT水平（P＜0．05），使得SOD水平上升（P＜0．05），且在一定浓度下与剂量呈正相关。结论 PEP-1-HO-1融合蛋白预处理可减轻细胞缺氧复氧损伤。
- 曾天才蔡庆和徐阳张林菲周晋航涂华华陈先祥
- 关键词：血红素加氧酶-1肝细胞缺氧复氧HEME
- PEP-1介导血红素加氧酶-1导入肝细胞的实验研究被引量：1
- 2011年
- 目的采用体外培养的L02肝细胞株,研究PEP-1肽介导血红素加氧酶-1(PEP-1-HO-1)穿透肝细胞的能力。方法实验分为PEP-1-HO-1组和HO-1组,用基因工程的方法制备并纯化PEP-1-HO-1融合蛋白,将纯化的目的蛋白及HO-1蛋白加入培养的L02肝细胞,通过免疫荧光及western blot来分析其转导能力。结果经测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-HO-1重组成功。SDS-PAGE及western blot结果表明,PEP-1-HO-1在Rosetta(DE3)pLysS菌中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-HO-1,将其加入到体外培养的L02肝细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能持续稳定表达48h,免疫组化显示其主要分布于胞质和胞核中。结论 PEP-1-HO-1融合蛋白能高效地转导入培养肝细胞,为进一步研究肝细胞氧化应激损伤防治的动物模型实验提供了新的途径。
- 曾天才王卫星陈先祥唐俊明郭凌郧郑飞张林菲
- 关键词：血红素加氧酶蛋白转导肝细胞
