浙江省医药卫生科学研究基金(2008A029)
- 作品数：5 被引量：29H指数：3
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- 相关机构：浙江省疾病预防控制中心浙江省舟山市疾病预防控制中心更多>>
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- 应用LAMP技术鉴定含89K毒力岛2型猪链球菌菌株被引量：3
- 2010年
- 目的应用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)技术鉴别含89K毒力岛2型猪链球菌(Streptococ-cus suisserotype2,S.suis2)菌株。方法根据S.suis2中国分离株(05ZYH33)89K毒力岛中基因序列设计4条引物(2条内引物、2条外引物);应用LAMP,对21株S.suis2、18株其它链球菌、9株葡萄球菌、5株其它菌株及49份未知样本进行检测,并对LAMP的最低检测限进行测试,结果通过肉眼目测或电泳检测,并将结果与PCR/定量PCR结果比较。结果该方法仅对含89K毒力岛的中国S.suis2特有株检测为阳性,而其它菌株经LAMP检测均为阴性,试验表明本方法特异性好,其最低检测限为24CFU/反应,无需特殊设备,结果通过肉眼即可判断,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右。应用本方法对49份不同来源样本进行实际考核,其中32份不明发热病人呼吸道咽拭子应急样本及15份正常猪扁桃体咽拭子样本经检测89K毒力岛基因均为阴性,2份疑似SS2病人血液应急样本中一份检测到该毒力岛基因,该结果与普通PCR/定量PCR检测结果一致。结论成功建立了检测S.suis289K毒力岛的LAMP方法 ,该方法特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,操作简单方便,极适合在我国广大基层实验室(包括基层医院/动物检疫等部门)开展应用。
- 朱水荣王志刚余昭张政梅玲玲杨婷婷卢亦愚
- 关键词：猪链球菌2型
- 环介导等温扩增法应用于肠出血性大肠埃希菌O157：H7的检测被引量：3
- 2009年
- 目的建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速鉴定检测肠出血性大肠埃希菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157：H7的方法。方法应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP），针对EHEC0157：H7的0157抗原编码rfbE、志贺样毒素stx2、H7鞭毛抗原编码fliC基因分别设计引物，并对LAMP反应条件和反应体系进行优化。对2株种系背景明确的实验对照菌EHEC0157：H7标准菌株、17株0157地方分离菌株、33株非0157其他肠道菌株进行检测，并与PCR结果比较，验证该方法的特异性、敏感性。结果具有相应靶基因的O157菌株经LAMP检测，其结果均与PCR法相同，呈绿色且电泳有相应条带为阳性，非O157其他肠道菌株均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性。该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1．5h左右，该体系检测限均为26CFU／反应，而且其检测结果在白光下通过肉眼即可判断。结论本次建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测鉴定EHECO157：H7，无需昂贵的仪器，非常适合基层检验部门及小型实验室与流行病学人员现场监测使用，具有较为广泛地应用前景。
- 朱水荣陈寅王志刚金大智陆群英姚萍萍
- 关键词：大肠杆菌O157核酸扩增技术环境监测
- 环介导等温扩增法快速检测霍乱肠毒素A亚单位基因被引量：2
- 2010年
- 霍乱是由霍乱弧菌引起的、以腹泻为主要症状的烈性传染病。以发病急、传播快、涉及范围广、能引起大流行为特征，属甲类传染病，曾引起多次世界大流行。霍乱弧菌广泛地存在于水体和海产品中，浙江地处沿海，人们大多喜食海产品，因此霍乱仍是沿海地区最主要的传染病。霍乱肠毒素A亚单位基因（ctxA）是霍乱弧菌毒力的决定因素。
- 王虹玲朱水荣张政
- 关键词：霍乱弧菌扩增法烈性传染病甲类传染病
- 环介导等温扩增技术应用于香港海鸥形菌的检测鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:建立一种适合基层实验室应用于快速检测鉴定香港海鸥形菌(LH)的LAMP方法。方法:针对香港海鸥形菌的16S rDNA基因序列设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),并对LAMP反应条件进行优化。结果:整个检测过程仅需1.5 h,可通过肉眼目测或电泳检测判断结果;对11株LH实验株、25株非LH其它肠道实验对照株进行了检测,试验显示该方法具有较好的特异性,敏感性稍差但不影响对LH分离疑似菌株的鉴定检测。结论:本方法具有快速、特异、简便、经济等特点,极适合在我国广大食用淡水鱼区域的县区级或更小一级检测实验室应用。
- 朱敏朱水荣梅玲玲金大智
- 关键词：香港海鸥形菌环介导等温扩增技术
- 嗜肺军团菌环介导等温扩增快速检测方法的建立与应用被引量：23
- 2009年
- 目的建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法。方法应用环介导等温扩增技术（LAMP），针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物（2条内引物、2条外引物及1条环引物），并对LAMP反应条件和反应体系进行优化。为验证该方法的特异性、敏感性，针对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、11株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测，并将其结果与传统培养分离方法及定量PCR方法比较。结果所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经LAMP检测均呈绿色为阳性，非嗜肺军团菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性。实验结果表明，LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及定量PCR。应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1．5h左右，该体系检测灵敏度为5cfu／ml，而且其检测结果在日（灯）光下通过肉眼即可判断。结论实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测嗜肺军团菌，适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。
- 朱水荣王志刚张政卢亦愚梅玲玲占利
- 关键词：嗜肺军团菌环介导等温扩增技术
