国家质检总局科技计划项目(2009IK009)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：董俊徐维加段纲艾军毛永杨更多>>
- 相关机构：云南出入境检验检疫局云南省动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：云南省高端科技人才引进计划项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的研发猴B病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原。方法根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB。结果该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圆细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98kDa。实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达。结论研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 段博芳王琼段纲毛永杨叶玲玲杨建明徐维加董俊周晓黎艾军
- 关键词：GB基因昆虫细胞
