国家自然科学基金(30772231)
- 作品数：19 被引量：105H指数：7
- 相关作者：康春生浦佩玉王广秀张安玲张春智更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院天津市神经病学研究所天津市环湖医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”天津市科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-221与miR-222通过靶基因TIMP3调控胶质瘤细胞侵袭能力被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨miR-221和miR-222在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制.方法 采用反义寡核苷酸下调miR-221和miR-222表达,Transwell、Western blot、荧光素酶实验及体内实验分别检测细胞侵袭能力、体内肿瘤生长、相关基因蛋白表达变化及靶基因鉴定.结果 下调miR-221和miR-222表达能明显抑制胶质瘤细胞侵袭能力,同时相关侵袭蛋白MMP2和MMP9表达下降.miRNA靶基因预测软件分析、Western blot、荧光素酶实验证实TIMP3是miR-221和miR-222的靶基因.裸鼠皮下肿瘤模型显示下调miR-221和miR-222表达抑制体内肿瘤生长.免疫组化发现TIMP3表达上调,MMP2和MMP9表达下调.结论 在胶质瘤细胞中,侵袭相关蛋白TIMP3是miR-221和miR-222的一个新靶基因.
- 翟博智张春智韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤MIR-221MIR-222TIMP3
- 敲低U251细胞miR-221/222表达对其基因组表达的影响
- 2011年
- 目的 采用基因表达谱芯片和生物信息学方法研究miR-221/222对胶质瘤U251细胞株信号通路的调控作用.方法 miR-221/222反义寡核苷酸瞬时转染人胶质瘤细胞株后提取总RNA进行基因表达谱检测,对差异表达基因行生物信息学分析,将核心转录因子进行实验验证.结果 敲低胶质瘤U251细胞中miR-221/222表达后,基因表达谱分析确定158个差异表达基因;生物信息学分析发现干扰素-α信号通路是受差异表达基因调节最显著的通路,其中STAT1和STAT2是干扰素-α通路的核心蛋白.结论 抑制miR--221/222基因簇表达可部分通过干扰素-α通路上调STAT1和STAT2 mRNA的翻译水平,并使U251细胞mRNA的表达谱发生改变.
- 杨旸张春智杨卫东韩磊张安玲浦佩玉康春生
- 关键词：MIR-221MIR-222神经胶质瘤
- RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法 构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论 敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.
- 韩磊张安玲岳晓许鹏杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤DICERRNA干扰生物学表型
- 敲低miR-221、miR-222表达对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨敲低miR-221、miR-222表达对MCF-7人乳腺癌细胞系放射敏感性的影响及机制。方法脂质体介导共转染反义miR-221（AS—miR-221）与反义miR-222（AS—miR-222）寡聚核苷酸于MCF-7人乳腺癌细胞，采用Northern blotting方法鉴定转染后细胞miR-221、miR-222表达水平。流式细胞术和Caspase-3、Caspase-7活性检测AS—miR-221、AS。miR-222联合照射后细胞凋亡。成克隆实验计算细胞增殖性死亡的增敏比。生物信息学分析查询miR-221、miR-222成熟体序列和它们与放射敏感性有关的靶基因。Western blotting分析相关靶蛋白的表达变化。结果Northern blotting显示AS-miR-221、AS—miR-222共转染组细胞miR-221、miR-222表达水平较对照组明显下降。AS-miR-221、AS-miR-222联合照射组细胞凋亡增多并增加细胞增殖性死亡，增敏比为1．87。生物信息学分析显示PTEN是miR-221、miR-222的靶基因且可提高放射敏感性。AS-miR-221、AS—miR-222共转染组细胞PTEN蛋白表达明显上调，pAkt蛋白表达下调。结论反义miR-221、AS—miR-222可能通过上调PTeN蛋白表达增强MCF-7人乳腺癌细胞放射敏感性。
- 张春智康春生曹永珍浦佩玉吕仲虹杜沟
- 关键词：PTEN蛋白
- 反义miR-221／222上调p27kp1对胶质母细胞瘤U251的放射增敏作用被引量：5
- 2009年
- 目的探讨敲低微小RNA（microRNA，miRs）-221／222表达上调p27kp1对U251胶质母细胞瘤细胞系放射敏感性的影响。方法经生物信息学分析查询miR-221／222成熟体序列和它们与p27kp1的关系。脂质体共转染反义寡聚核苷酸（反义miR-221／222）下调U251胶质母细胞瘤细胞系miR-221与miR-222的表达。使用Northern印迹方法鉴定转染后u251细胞miR-221、miR-222表达水平下调；流式细胞术检测转染后U251联合X线照射的细胞周期分布；克隆形成实验验证各组细胞增殖性死亡；Western印迹分析p27kp1蛋白的表达变化。结果经生物信息学分析显示miR-221／222成熟体序列的种子序列几乎一致，p27kp1是miR-221／222的靶基因。Northern印迹分析显示反义miR221／222共转染组使miR-221／miR-222的表达水平明显下降。转染无义序列组及对照组的miR-221／miR-222表达水平没有改变。流式细胞术检测可见反义miR-221／222共转染组细胞周期阻滞于G0／G1期且明显高于其它各组。经X线照射后，可明显降低S期比例。反义miR-221／222联合X线照射可增加U251细胞增殖性死亡。Western印迹分析显示反义miR-221／ee2共转染组的p27kp1蛋白表达明显上调。结论反义miR-221／222通过上调p27kp1蛋白表达可增加U251胶质母细胞瘤细胞系的放射敏感性。
- 张春智王广秀康春生杜汋浦佩玉
- 肿瘤相关微小RNA与凋亡被引量：2
- 2009年
- 微小RNA（miRNA）在转录后水平调控基因的表达。研究证实miRNA通过调控细胞的凋亡，在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用。肿瘤相关miRNA与凋亡的研究在未来的肿瘤诊疗中miRNA可能具有广阔的应用前景。
- 南阳康春生钟跃
- 关键词：微小RNAS凋亡肿瘤
- 人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱初步研究被引量：30
- 2008年
- 目的确定部分人脑胶质瘤细胞系miRNA表达谱的初步特征。方法提取人脑胶质母细胞瘤细胞系U251、TJ861、TJ905、TJ899和A172以及星形细胞瘤细胞系H4细胞的miRNA，miRNA微阵列芯片杂交，扫描后分析差异表达的miRNA。选择差异表达的miR-21设计反义寡核苷酸处理U251细胞后原位杂交和Western blot检查SEPT7的表达。结果在胶质瘤细胞系中hsa—miR-21等8种miRNA一致表达上调；hsa—miR-1等18种miRNA一致表达下调。miR-21锁核酸修饰反义寡核苷酸处理U251细胞72h后，原位杂交发现阳性信号集中在细胞核的miR-21表达显著下降，Western blot发现U251细胞中SEPT7的表达明显上调。结论miRNA的差异表达可能是胶质瘤的重要分子生物学标签，并在基因表达调控中具有潜在的研究价值。
- 康春生浦佩玉贾志凡张安玲周旋王广秀
- 关键词：神经胶质瘤MIRNA微阵列表达谱
- RNA干扰技术联合抑制AKT1和COX-2表达对U251胶质瘤细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的 探讨应用RNA干扰（RNAi）技术抑制U251恶性胶质瘤细胞株AKT1和COX-2表达后,在体外对U251细胞增殖的抑制作用.方法 构建靶向AKT1和COX-2的RNAi重组腺病毒表达载体（rAd-A＋C）转染至U251细胞.应用Realtime PCR检测AKT1和COX-2 mRNA水平的变化;应用Western blot检测AKT1和COX-2蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析;应用MTr法和流式细胞术评价肿瘤细胞的增殖活性.结果 rAd-A＋C可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2的表达;与对照组和无义序列处理组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示下游相关因子PCNA、Cyclin D1表达下降,而p53表达上调;细胞周期分析结果表明rAd-A＋C处理组进入S期的细胞数较对照组减少了7.0%～7.8%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示rAd-A＋C处理组细胞生长抑制率＞58%.结论 靶向AKT1和COX-2的RNAi技术可显著抑制U251细胞AKT1和COX-2表达,在体外对U251细胞增殖活性产生明显抑制作用.因此,RNAi重组腺病毒表达载体介导的基因治疗可成为胶质瘤靶向治疗的新策略.
- 韩磊张安玲岳晓杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤AKT1RNA干扰增殖活性
- 小干扰RNA敲低Dicer对人脑胶质瘤细胞生物学特征的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究敲低Dicer酶的表达全面抑制徽小RNA（microRNA，miRNA）成熟对TJ905人脑胶质瘤细胞的生物学特征的影响。方法采用RNA干扰（RNAinterference，RNAi）技术敲低Dicer酶的表达，逆转录PCR、Western印迹及免疫荧光检测TJ905细胞转染小干扰RNA（smallinterferen，siRNA）后Dicer酶表达情况；应用流式细胞术检测、噻唑兰比色分析法试验及Tranwell试验评价细胞生长、增殖和侵袭等生物学特征变化。结果转染siRNA靶向Dicer酶后，Dicer酶被敲低，S期细胞增多，细胞增殖加速，细胞侵袭生长能力增强。结论敲低Dicer酶全面抑制miRNAs成熟后，肿瘤细胞表型具有更为恶性变的倾向，由此初步推测全面抑制细胞miRNAs表达有可能促进肿瘤生成。
- 张安玲康春生韩磊王广秀贾志凡浦佩玉
- 关键词：小干扰RNADICER酶胶质瘤生物学特征
- mieroRNA-221和mieroRNA-222与恶性肿瘤的研究进展被引量：2
- 2009年
- 微RNA（microRNA）-221和microRNA-222是成簇的microRNA，在恶性肿瘤中起促癌作用，在胶质母细胞瘤、前列腺癌、乳头状甲状腺癌等恶性肿瘤中高表达。microRNA-221和microRNA-222通过调控其特定的靶基因行使促癌作用。在所有预测的靶基因中，p27^kip1和p57^kip2是已被验证的靶基因，microRNA-221和microRNA-222通过下调p27^kip1和p57kip2的表达来促进肿瘤的形成和生长。
- 张春智康春生浦佩玉
- 关键词：肿瘤靶基因前列腺癌
