国家自然科学基金(30870187)
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 相关作者：梁五生陈正贤徐婷更多>>
- 相关机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家质检总局科技计划项目国家标准化管理委员会项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体
- 2012年
- 报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1%BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒(TMV)杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Western blot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Western blot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。
- 陈正贤徐婷梁五生
- 关键词：烟草花叶病毒
- 黑龙江省部分地区马铃薯Y病毒株系检测被引量：8
- 2014年
- 从黑龙江省克山、讷河、五大连池和北安大田种植的马铃薯上采集马铃薯病叶,提取总RNA,利用之前验证过的引物,进行反转录、PCR扩增,以及焦磷酸测序,以鉴定感染的马铃薯Y病毒(PVY)株系。结果表明,克山有2个样品分别感染PVYN:O和PVYN-Wi;讷河有2个样品感染PVYN-Wi;五大连池有2个样品分别感染PVYN:O和PVYN-Wi;北安有1个样品感染PVYN-Wi。结合之前报道的9份黑龙江省马铃薯病样的PVY株系鉴定结果,表明黑龙江省大田种植的马铃薯至少存在PVYN-Wi、PVYN:O、PVYNTN和PVYN4种PVY株系侵染;而且,由于PVYN-Wi侵染了16份已鉴定病样中的7份,而其余3种株系均仅侵染3份病样,显示PVYN-Wi可能为优势株系。
- 刘洪义梁五生刘忠梅张洪祥杨立群
- 关键词：马铃薯马铃薯Y病毒焦磷酸测序
- 应用焦磷酸测序鉴定马铃薯感染的马铃薯Y病毒株系被引量：6
- 2013年
- 为了检验是否可以通过焦磷酸测序法进行短序列测序,来鉴别马铃薯Y病毒(PVY)株系,从NCBI库中选取了代表9个PVY株系的全基因组序列30个,通过比对P1和CP蛋白的氨基酸序列,分别找出一个差异区段,针对这2个区域设计了反转录引物、PCR引物和测序引物。分别从黑龙江省克山县和讷河市各采集了一份马铃薯病叶样品,通过提取总RNA,反转录,再进行PCR扩增获得扩增产物,并对扩增产物进行了焦磷酸测序。测序结果显示,尽管2份马铃薯病叶症状不同,但均感染了PVY(N-Wi株系)(PVYN-Wi)。上述研究表明,利用本试验设计的引物,通过焦磷酸测序法进行短序列测序,可以鉴定马铃薯感染的PVY株系。
- 刘洪义梁五生刘忠梅张洪祥杨立群
- 关键词：马铃薯马铃薯Y病毒焦磷酸测序
- 马铃薯Y病毒株系分类及中国大田马铃薯感染的马铃薯Y病毒株系谱研究进展被引量：7
- 2015年
- 为了更科学、合理地检测、检疫马铃薯Y病毒(PVY)株系,和全面掌握侵染中国大田马铃薯的PVY株系情况,总结了PVY株系的分类方法,分析了中国大田马铃薯感染的PVY株系谱。认为目前广泛使用的血清型划分法、基因组重组与否划分法、PTNRD效应划分法、过敏反应互作基因划分法,以及Singh等提出的株系群划分法都无法对PVY株系予以完全合理的划分。提出有必要鉴定PVY基因组中决定马铃薯病理效应的基序并通过对基序测序来鉴定PVY株系,通过对株系间基因组差异区段的短序列测序来鉴定PVY株系是目前最接近基序测序分类法的思路。指出感染中国大田马铃薯的PVY目前有PVYO、PVYN、PVYNTN、PVYN:O、PVYN-Wi和PVYNW这6种株系,隶属于2个株系群PVYO和PVYN,其中PVYN株系和PVYN株系群病样占绝大多数,以非重组株系为主,但重组株系已占一定比例,其发展趋势值得关注。
- 梁五生温雪玮刘洪义刘忠梅
- 关键词：马铃薯Y病毒马铃薯
