国家自然科学基金(30870194)
- 作品数：10 被引量：40H指数：3
- 相关作者：徐子勤杜改亮高航王健张欣更多>>
- 相关机构：西北大学安康学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目陕西省教育厅科研计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 菘蓝环硫指定蛋白基因IiESP的克隆及其编码产物的亚细胞定位被引量：1
- 2016年
- 为了探究十字花科植物环硫指定蛋白(ESP)对硫代葡萄糖苷分解的导向作用所具有的生物学功能,从菘蓝中克隆了Ii ESP基因的c DNA和基因组序列,并分析了其表达模式。在此基础上利用GFP标签对Ii ESP蛋白进行了亚细胞定位,并根据氨基酸序列预测了该蛋白的三维结构。结果表明:Ii ESP基因含有2个外显子和1个内含子,其基因组、c DNA和ORF序列长度分别为1 555、1 315和1 164 bp。Ii ESP蛋白由387个氨基酸构成,含有5个Kelch模块,可折叠形成球状超螺线管结构。多重比对发现Ii ESP与欧洲菘蓝It ESP、拟南芥At ESP和甘蓝Bo ESP在氨基酸序列上的一致性分别为79%、76%和77%。通过农杆菌渗入法在本氏烟草叶片表皮细胞中瞬时表达Ii ESP基因,证实Ii ESP蛋白定位于叶绿体中。RT-PCR分析结果显示,Ii ESP主要在下胚轴、茎、早期花序、成熟花序、花、萼片和花瓣中表达,其在花被中的高活性可能与吸引昆虫进行传粉有关。
- 马燕勤李典珍姚静雯李琦徐子勤
- 关键词：菘蓝亚细胞定位
- 高羊茅FaChit1基因cDNA克隆及诱导表达被引量：3
- 2010年
- 应用简并RT-PCR及RACE技术,从高羊茅中克隆了1个Ⅰ类几丁质酶基因cDNA全长序列,命名为Fa-Chit1.结果表明,该cDNA具有1个951 bp的完整编码框,编码316个氨基酸,其编码产物和其它植物的Ⅰ类几丁质酶在氨基酸序列上具有较高的同源性,包含典型的几丁质结合区、催化区以及脯氨酸、半胱氨酸富集的铰链区,但缺少定位到植物液泡所必须的C末端延伸区靶向信号.Northern杂交显示,FaChit1对真菌激发子有较强的响应,乙烯和干旱胁迫均能有效诱导FaChit1基因的表达,而对机械损伤处理的反应比较微弱,只在叶片中积累少量的mRNA.
- 王健徐子勤
- 关键词：高羊茅胁迫诱导
- 拟南芥AZI1基因对酿酒酵母细胞生长和蒜薹灰霉菌侵染的抑制作用被引量：5
- 2011年
- 本工作采用酿酒酵母细胞表达载体pESC和植物细胞表达载体pPZP211分析了拟南芥AZI1基因对真菌的抗性功能。半乳糖诱导产生的AZI1蛋白可以使酵母细胞的生长能力明显降低。DAB和台酚蓝染色结果显示用蒜薹灰霉菌孢子处理Col-0野生型植株叶片后被侵染部位只能产生少量H2O2,病原体可以扩散,而AZI1基因过表达植株叶片在侵染部位有大量H2O2产生,着色较深,表明转化体能够以局部细胞的死亡来阻止病原体侵染周围的细胞。在Col-0野生型植株中,AZI1基因的表达受外源水杨酸诱导,24h后达到峰值。以上结果说明AZI1基因在拟南芥对生物胁迫因素的应答过程中具有重要作用。
- 张欣徐之艳Michael Schlappi徐子勤
- 关键词：过表达酿酒酵母水杨酸H2O2
- 甜高粱离体再生体系的建立和组织结构变化的观察被引量：4
- 2009年
- 以甜高粱成熟种子为外植体,调节不同生长调节物质配比建立甜高粱离体再生体系。结果表明在MS+2.5mg·L-12,4-D+0.3mg·L-1KT培养基上愈伤组织的诱导率可达77.26%;比较不同浓度6-BA或TDZ与NAA配合诱导愈伤组织分化和苗形成的情况,TDZ的作用优于6-BA。观察培养组织的结构变化发现,甜高粱离体再生过程中除了体细胞胚发生途径之外,还伴随有器官发生途径。
- 徐丹陈立余徐子勤
- 关键词：甜高粱植株再生体细胞胚发生器官发生
- 拟南芥新型脂转移蛋白AtDHyPRP1的亚细胞定位及其对灰霉菌的抗性被引量：3
- 2012年
- 通过遗传转化技术研究了拟南芥脂转移蛋白AtDHyPRP1在细胞中的定位及其对真菌病原体的抗性。采用PCR方法从拟南芥Ws生态型克隆了AtDHyPRP1基因,构建产生pRI101-AN-AtDHyPRP1植物双元表达载体和pCAMBIA1302-AtDHyPRP1-GFP融合表达载体,经农杆菌介导的叶盘和浸花法得到烟草和拟南芥转基因植株。AtDHyPRP1基因能够明显增加烟草对灰霉菌的抗性,转AtDHyPRP1烟草叶片的被侵染部位有大量H2O2积累,激光共聚焦显微观察发现AtDHyPRP1蛋白定位于细胞表面。说明AtDHyPRP1蛋白在合成后被分泌到细胞外执行特殊的功能,与植物抗病防御机制有关。
- 张晨李岚徐子勤
- 关键词：拟南芥亚细胞定位
- 拟南芥抵抗丁香假单胞杆菌过程中AZI1基因功能研究被引量：3
- 2013年
- AZI1属于脂转移蛋白家族,它在拟南芥抵抗病原菌侵染过程中可能起着传递信号物质的作用。该实验以过表达和T-DNA插入突变体及野生型拟南芥植株为材料,通过RNA印迹、蛋白质免疫印迹和原位免疫组织化学方法,研究了拟南芥壬二酸诱导基因AZI1对丁香假单胞杆菌的抗性功能。结果表明:(1)AZI1基因可以被丁香假单胞杆菌、H2O2和乙烯利诱导,它可能参与水杨酸和乙烯介导的抗菌途径。(2)蛋白质免疫印迹实验结果显示,丁香假单胞杆菌侵染叶片的叶柄渗出液中存在AZI1蛋白及其同源物EARLI1,并能够与其他蛋白质形成复合体,说明AZI1有可能通过维管组织移动到个体的其他部位,与信号分子的转移有关。(3)AZI1及其同源物EARLI1主要在花序茎的木质化部位表达,过表达AZI1基因能够促进木质素的合成,提高拟南芥对丁香假单胞杆菌的抗性。
- 高航杜改亮麻力徐子勤
- 关键词：拟南芥DAB台盼蓝
- 拟南芥HyPRP蛋白AZI1在大肠杆菌中的表达及其抗真菌活性分析被引量：1
- 2015年
- AZI1(AZELAIC ACID INDUCED 1)基因位于拟南芥4号染色体上,编码产物是脂质转移蛋白(lipid transfer protein,LTP)家族的一个成员。该基因在系统获得抗性(systemic acquired resistance,SAR)中具有重要功能,名称来自它可以被壬二酸(azelaic acid,Az A)诱导。已有的研究结果显示,在拟南芥中由Az A和甘油-3-磷酸(glycerol-3-phosphate,G3P)诱导的SAR反应需要AZI1和DIR1,这两个脂质转移蛋白有助于G3P的积累。为了确定AZI1蛋白是否具有抗真菌活性,本工作构建了原核表达载体p ET28a-AZI1,利用大肠杆菌BL21(DE3)受体细胞制备了没有信号肽的AZI1重组蛋白。Western免疫印迹分析发现通过半乳糖苷类似物IPTG诱导表达的AZI1重组蛋白主要以包涵体的形式存在。体外抑菌实验以及激光共聚焦显微观察结果表明,用镍离子亲和层析树脂纯化的AZI1重组蛋白对灰霉菌、赤霉菌、棉花枯萎病菌和酿酒酵母细胞的生长/分裂均具有抑制作用。
- 王晓燕杜改亮韩瑶瑶刘梦欣马燕勤冯欢徐子勤
- 关键词：拟南芥蛋白纯化系统获得抗性
- 拟南芥Pri-miR156a基因对烟草开花时间的影响被引量：22
- 2015年
- 本研究利用转基因烟草分析了mi R156对SPL3基因的保守性调节作用。首先通过数据库搜索和RT-PCR方法克隆了普通烟草Ntab SPL3基因的编码序列,并进行了测序验证。同时从拟南芥Col-0生态型基因组DNA分离了At Pri-mi R156a基因序列,构建产生植物表达载体,采用农杆菌转化技术制备了转基因烟草植株。RT-PCR分析发现,过量表达Atmi R156a可以明显下调烟草Ntab SPL3基因。表型观察结果显示,At Pri-mi R156a转基因烟草个体矮小,开花时间明显延迟,叶片数量及生物量积累增多,说明组成性表达Atmi R156a能够延长普通烟草的营养生长时间,推迟开花转变过程。本研究为培育适合不同生长环境的烟草新品种提供了一条新的途径,对烟草改良具有重要意义。
- 韩瑶瑶马燕勤李典珍徐子勤
- 关键词：烟草开花时间
- 高羊茅FaChit1基因组DNA的克隆及其拷贝数的验定
- 2010年
- 以获得的高羊茅FaChit1基因cDNA设计引物扩增其基因组DNA,序列比对发现该基因内不存在内含子.进一步采用染色体步移方法分离FaChit1基因上游的一段935bp启动子序列以及下游的一段470bp3′非翻译区序列发现,在该启动子区域内不仅含有保守的TATA盒和CAAT盒,而且包含多个潜在的与胁迫应答有关的顺式调控元件,表明该启动子可能是1个多胁迫诱导型启动子.此外,在FaChit13′非翻译区含有真核生物基因中高度保守的特征序列.Southern杂交结果表明,FaChit1在高羊茅基因组中有2个拷贝.
- 王健徐子勤
- 关键词：高羊茅启动子拷贝数
- 拟南芥HyPRP蛋白AZI1在转基因烟草中的亚细胞定位及其对灰葡萄孢的抗性被引量：2
- 2012年
- 通过农杆菌转化法得到了整合有拟南芥AZI1基因的烟草植株,进一步利用转基因烟草分析了AZI1蛋白的亚细胞定位及其对真菌病原体的抗性特征。在上下游引物5'端分别引入NcoI和SpeI酶切位点,采用高保真耐热DNA聚合酶Pfu从拟南芥Col-0生态型基因组DNA扩增AZI1基因的编码序列,用NcoI和SpeI对扩增片段和pCAMBIA1302质粒载体进行双酶切,通过T4DNA连接酶构建产生AZI1-GFP融合表达载体。用包含融合表达载体的农杆菌细胞转化烟草叶片,经潮霉素选择获得了完整的再生植株,并收取了T0代种子。激光共聚焦显微观察发现,AZI1蛋白主要定位于细胞表面。病原体侵染结果显示,AZI1基因能够明显提高烟草对灰葡萄孢的抗性。说明AZI1蛋白通过分泌途径被定位到细胞表面后,能够抑制真菌病原体对植物组织的侵染过程。
- 杜改亮高航徐子勤
- 关键词：亚细胞定位灰葡萄孢
