国家自然科学基金(30772215)
- 作品数：27 被引量：79H指数：6
- 相关作者：柏树令潘锋张二林佟浩田晓红更多>>
- 相关机构：中国医科大学中国科学院金属研究所辽宁省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成骨细胞与镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层的体外相容性被引量：2
- 2011年
- 目的评价成骨细胞在镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层上的生长状况,探讨镁合金表面硅酸盐-磷酸盐复合涂层与成骨细胞的生物相容性。方法用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和茜素红染色法进行鉴定;然后将第4代大鼠的成骨细胞接种于材料表面,用扫描电镜观察成骨细胞在不同表面上黏附形态的变化,同时制备材料浸提液,用浸提液法培养细胞,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法和碱性磷酸酶(ALP)活性法检测成骨细胞的增殖和分化情况。结果将成骨细胞与材料进行复合培养后,扫描电镜下可见,涂层组的成骨细胞生长活力旺盛、形态饱满、分布均匀,而单纯镁合金组未见细胞生长;MTT和ALP活性分析结果显示,硅含量为1%～5%涂层对大鼠成骨细胞的体外生长、增殖和分化的促进作用最佳。结论镁合金表面硅酸盐-磷酸盐涂层与成骨细胞具有良好的相容性,在体外培养的环境下,有利于细胞的生长、黏附、增殖和分化。
- 左林柏树令潘锋佟浩田晓红张二林杜辉
- 关键词：成骨细胞镁合金相容性免疫荧光法
- 脂肪来源干细胞研究及临床应用现状被引量：9
- 2009年
- 引起软组织缺损的原因有严重烧伤、感染、体表肿瘤切除术后、各种外伤以及先天性疾病等。自体脂肪颗粒作为一种软组织填充材料，开始于20世纪初，因其吸收率高，成活率低，并发症较多，限制了其在临床中的广泛应用。21世纪初，通过改进获取脂肪的手术技术和器械，加速血管化，从而提高脂肪颗粒移植的成活率。目前，脂肪颗粒移植最主要的并发症仍是坏死、吸收，其吸收率可达30％～70％，主要原因是由于血供不足，导致移植到供区的脂肪缺氧，出现坏死硬结。其他修复软组织缺损的方法如自体组织瓣移植、胶原注射等，都存在一定的问题。
- 王洁晴柏树令
- 关键词：脂肪干细胞
- 骨髓间充质干细胞复合表面改性的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯膜的体外相容性被引量：1
- 2009年
- 目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）在不同处理工艺的3-羟基丁酸和3-羟基己酸共聚酯（PHBHHx）膜材料上的生长、增殖情况，为组织工程学筛选出一种新型的适合细胞生长、增殖的生物材料。方法：用全骨髓培养法获得BMSCs，并行免疫荧光鉴定，同时在成骨诱导液中诱导BMSCs，钙钻法检测碱性磷酸酶（ALP），茜素红矿化结节染色；成脂诱导后行油红O染色。将不同处理工艺的材料与第3代BMSCs复合培养1、3、7d，通过扫描电镜、MTT法和中性红染色法分别观察细胞的形态、增殖变化及分布情况。结果：BMSCs免疫荧光鉴定CD44、CD106均呈阳性。经成骨诱导后，ALP呈阳性表达，矿化结节染色呈橘红色；经成脂诱导后，14d油红0染色呈阳性。细胞在经过碱处理或添加5％、10％中药涂层的PHBHHx膜材料表面均生长状态良好，增殖活力强且分布均匀。结论：经过碱处理的，且含5％、10％中药涂层的PHBHHx膜，具有良好的BMSCs相容性，可以作为一种新型的生物材料应用于组织工程。
- 张磊柏树令潘锋佟浩申锋张二林
- 关键词：骨髓间充质干细胞表面改性
- 新型可降解性镁金属合金的骨组织反应评价
- 2009年
- 目的探讨组织工程用镁金属合金在大鼠体内的降解过程。方法1月龄sD大鼠15只，麻醉后股骨干钻孔，植入表面修饰后的镁合金金属棒，术后皮下注射庆大霉素预防感染并每周皮下注射钙黄绿素。术后6、9、15、26和80周分别随机处死3只大鼠，并取出植入有金属棒的股骨，各组材料经体视显微镜、光镜、扫描电镜、倒置荧光显微镜观察并行能量色散谱元素分析。结果体视显微镜及光镜下观察，可见6、9、15、26周大鼠股骨髓腔中金属移植物周围包裹有新生骨，接触髓腔的金属界面受到不同程度的侵蚀，且侵蚀或降解程度随取材时间的延长而加大。倒置荧光显微镜下观察，可见移植物周围有新骨生成。能量色散谱元素分析表明，含有碳、氮、氧元素的基底膜层在金属移植物周围形成。术后80周大鼠股骨上，植入的金属材料全部降解，基底膜层消失，新生骨层裂解并逐渐被改造吸收。结论含有锌和锰元素的镁合金是一种新型体内可降解性金属合金，对体内诱导骨生成有良好作用。
- 潘锋于国宁
- 关键词：镁合金基底膜
- 纳米“羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖”材料复合骨髓间充质干细胞修复小鼠胫骨缺损被引量：4
- 2013年
- 目的应用纳米级材料"羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖"复合骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复小鼠胫骨5mm的缺损,探讨其对长骨缺损的修复效果。方法原代分离培养小鼠BMSCs,进行干细胞相关生物学特性检测。制备纳米级材料羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖的新型复合材料,扫描电子显微镜下观察材料结构,检测支架材料的孔隙率、降解率。制备小鼠胫骨5mm离断性缺损模型30只,分3组进行骨修复,每组10只:A组(纳米羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖材料复合BMSCs);B组(单纯纳米羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖材料);C组(单一纳米级羟基磷灰石复合BMSCs)。于8周时各组动物麻醉并取材,HE染色观察缺损区成骨情况,X线检测骨修复情况。结果原代分离的BMSCs具有成纤维细胞形态,表达间充质干细胞的表面标记,符合干细胞的生物学特性。制备的纳米级羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖支架具有丰富的孔隙,支架内部孔隙间有广泛的交通,孔隙大小均匀,直径为100～200μm,孔隙率72.3%～92.7%之间,平均为82.5%左右,支架降解率为(60.3±5.4)%。修复8周后,A组可见支架材料大部分降解,无炎性反应,并见大量成熟板层骨样结构。X线评分显示A组在缺损区可见新生骨痂且新骨密度增高,形成骨桥并与两端桥接,而B、C组效果不理想,与A组相比差异明显(P<0.01)。结论纳米级材料"羟基磷灰石-胶原蛋白-壳聚糖"复合BMSCs对于小鼠胫骨骨缺损修复效果良好。
- 李阳房艳柏树令田晓红佟浩侯伟健
- 关键词：羟基磷灰石骨缺损扫描电子显微镜小鼠
- 骨生长因子及骨钙素在新西兰大耳兔体内植入早期镁合金/新骨生成界面的表达变化
- 2010年
- 目的观察3种骨生长因子及骨钙素在动物体内植入早期镁合金/新骨生成界面的表达变化。方法将具有钙磷涂层的Mg-Mn-Zn合金和对照组裸Mg-Mn-Zn合金分别植入新西兰大耳白兔股骨的上、下干骺端,皮下注射钙黄绿素。在植入1、2、3、4周后分别做X线检查、HE染色、荧光观察和骨形态发生蛋白(BMP)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子(PDGF)、骨钙素(BGP)的免疫组织化学染色。结果 X线检查见植入4周后的实验组与对照组的合金棒均被新生骨质包裹;HE染色及荧光染色未见实验组与对照组之间有明显差异;免疫组织化学染色发现,实验组与对照组之间的BMP-2、TGF-β1和PDGF的表达存在明显差异,实验组的表达明显高于对照组。结论具有钙磷涂层的Mg-Mn-Zn合金比对照组合金更好地促进骨髓腔内移植物界面处新骨生长因子的表达。
- 潘锋柏树令张二林徐丽萍于国宁
- 关键词：骨生长因子骨钙素免疫组织化学
- 脱细胞骨基质的立体构筑及TritonX-100残留量测定被引量：2
- 2011年
- 目的制备骨组织工程的新型天然支架材料。方法取兔双侧胫骨,修整成片状,使用含3%TritonX-100及蛋白酶抑制剂的Tris-HCL的缓冲液洗脱掉骨片中的细胞成份。取脱钙后骨片行HE染色及阿利新蓝染色并用免疫组化方法检测骨片中纤维连接蛋白及层黏连蛋白;Mallory-Heidenhain染色测量骨陷窝形态;对骨片进行扫描电镜及透射电镜观察;使用反相高效液相色谱检测TritonX-100残留量。结果 HE、阿利新蓝染色见脱细胞骨基质胶原纤维排列规则,骨陷窝空虚;骨陷窝形态测量表明脱细胞骨基质的骨陷窝数量与正常骨的骨陷窝数量没有差异;免疫组织化学染色及免疫透射电镜均见纤维连接蛋白与层黏连蛋白存在于脱细胞骨基质和正常骨的骨陷窝周边处;TritonX-100残留量测定表明脱细胞骨基质最低检出极限为0.5μL/mL。结论脱细胞骨基质保持了骨的正常立体构筑,是一种新型的生物衍生材料,具有广阔的应用前景。
- 王昊柏树令
- 关键词：脱细胞骨基质TRITONX-100骨组织工程
- 睡眠间歇低氧大鼠心室重塑与心肌细胞凋亡和Rho激酶表达的关系被引量：5
- 2011年
- 目的观察睡眠中间歇低氧状态下大鼠心室重塑、血液动力学异常与心肌细胞凋亡和Rho激酶表达的关系,探讨间歇低氧与心室重塑和心力衰竭之间关系的分子机制。方法 24只雄性Wistar大鼠分3组,每组8只。给予适度限制饮食量的普通饮食和每天正常运动量游泳1h,分为常氧(A组)、间歇低氧(B组)、间歇低氧+法舒地尔(C组),60d后检测血液动力学指标、心室重量、体重、形态学检测(HE染色和凋亡细胞检测)和RT-PCR检测Rho激酶mRNA表达。结果与A组比较,B组血液动力学指标恶化,心室肥厚指数增加,心肌细胞排列紊乱,凋亡明显及Rho激酶表达增加。与B组比较,C组血液动力学指标改善,心室肥厚指数减小,心肌细胞排列紊乱减轻,凋亡减少及Rho激酶表达降低。结论间歇低氧与心室重塑及心力衰竭的发生、发展密切相关。细胞凋亡和炎症因子Rho激酶表达增加与之密切相关。
- 佟浩张曼王实柏树令
- 关键词：间歇低氧心室重塑RHO激酶反转录-聚合酶链式反应
- XAV939抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖
- 2014年
- 目的探讨小分子抑制剂XAV939对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SH-SY5Y细胞的抗增殖和诱导凋亡的作用,及其可能机制。方法采用MTT法检测XAV939对SH-SY5Y细胞活力的抑制作用,并确定最佳作用浓度。然后采用Annexin V-FITC法检测XAV939处理后早期凋亡细胞百分比,Hoechst33342染色法观察凋亡细胞核形态,克隆形成实验检测细胞体外增殖能力的变化。Western blotting检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin信号通路的关键蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2的变化。结果 MTT结果显示,1μmol/L XAV939作用24h后,SH-SY5Y细胞增殖的抑制率有明显上升。XAV939处理后48h及72h,凋亡细胞百分比显著高于对照组,且细胞呈现出不同程度的凋亡形态。此外,XAV939可显著降低SH-SY5Y细胞的体外克隆形成率,降低Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,Cyclin D1和c-Myc及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 XAV939可能部分通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制SH-SY5Y细胞的增殖。
- 田晓红侯伟健柏树令范军佟浩徐赫
- 关键词：神经母细胞瘤WNTΒ-CATENIN信号通路免疫印迹法
- 镁合金表面含硅涂层对成骨细胞的黏附、形态和细胞周期的影响被引量：6
- 2011年
- 目的：评价成骨细胞在镁合金表面含硅涂层上的生长状况,为研究镁合金表面含硅涂层与成骨细胞的生物相容性提供实验依据.方法：用胶原酶消化法分离培养大鼠成骨细胞,并用免疫荧光和碱性磷酸酶染色法进行鉴定;然后将处于对数生长期的大鼠成骨细胞接种于材料表面,用扫描电镜观察成骨细胞在不同表面上粘附形态的变化,同时制备材料浸提液,用浸提液法培养细胞,并通过倒置相差显微镜观察细胞形态;用流式细胞仪检测成骨细胞的细胞周期变化.结果：分离出了大鼠成骨细胞,I型胶原免疫荧光显色及碱性磷酸酶显色阳性;成骨细胞与材料进行复合培养后,涂层组的成骨细胞生长活力旺盛、形态饱满、分布均匀,而单纯镁合金组未见细胞生长;硅含量为1%～5%涂层组的成骨细胞G2期＋S期所占百分比最高.结论：镁合金表面含硅涂层与成骨细胞具有良好的相容性,有利于细胞的黏附、生长和增殖.
- 左林柏树令潘锋佟浩田晓红张二林杜辉
- 关键词：成骨细胞镁合金生物相容性
