国家教育部“211”工程(20022)
- 作品数：12 被引量：55H指数：4
- 相关作者：赵国强薛乐勋高冬玲陈奎生张云汉更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院河南省医学科学研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 针对Cox-2基因siRNA载体构建和沉默效应被引量：2
- 2007年
- 目的构建针对人Cox-2基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对肺癌细胞Cox-2基因表达的沉默作用。方法设计Cox-2靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSINsi-hU6载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR检测Cox-2基因mRNA表达的变化。结果把针对Cox-2基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSINsi-hU6载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR检测显示,Cox-2基因的表达水平明显降低。结论成功构建出显著沉默细胞Cox-2基因表达的siRNA载体。
- 赵国新徐慧丹赵新合冯龙卫艳萍胡军
- 关键词：RNA干扰COX-2RT-PCR
- 肝素酶抑制剂对食管癌移植瘤中uPA VEGF蛋白表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨肝素酶抑制剂硫酸多糖体内对裸鼠食管癌移植瘤中与肝素酶作用相关uPA、VEGF蛋白表达的影响。方法:硫酸多糖分组处理人食管癌EC9706细胞后,进行裸鼠体内成瘤实验,采用免疫组化SP法检测裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF的蛋白表达。结果:4种不同浓度的肝素酶抑制剂硫酸多糖对裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF蛋白表达均有明显的抑制作用,实验组间两两相比,差异无统计学意义(P>0.05);与不加硫酸多糖的对照组两两相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:硫酸多糖可抑制裸鼠食管癌移植瘤中uPA、VEGF蛋白表达,说明硫酸多糖对肿瘤浸润、转移有一定的抑制作用。
- 陈奎生张秋红张岚高冬玲郑湘予张云汉
- 关键词：食管癌移植瘤硫酸多糖UPAVEGF
- 利用siRNA抑制食管癌VEGF-C的表达
- 2010年
- 目的利用siRNA抑制人食管癌EC9706细胞中VEGF-C基因的表达。方法针对VEGF-CmRNA设计了3条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染食管癌EC9706细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR和原位杂交技术分析siRNA对细胞中VEGF-CmRNA的降解作用;免疫组织化学法分析细胞中VEGF-C蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,免疫组织化学法检测瘤组织中VEGF-C的表达。结果siRNA能明显降低食管癌EC9706细胞中VEGF-CmRNA和蛋白的表达,稳定转染的3个siRNA组细胞仅有少量VEGF-C阳性表达颗粒和无阳性条带,与无关序列组和正常EC9706细胞组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);裸鼠体内的成瘤实验,3个siRNA转染组瘤组织中VEGF-C蛋白的表达也明显减少,与正常EC9706组无关序列组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论靶向VEGF-CmRNA的siRNA能在体内外有效抑制VEGF-C的表达,可用于食管癌的基因治疗。
- 张红新郑湘予陈奎生张岚高冬玲张云汉
- 关键词：VEGF-C食管癌
- RNAi干扰食管癌EC9706细胞MTA1基因表达对侵袭和迁移的影响被引量：5
- 2008年
- 目的采用RNAi抑制食管癌EC9706细胞株MTA1基因的表达,观察对食管癌细胞侵袭和迁移的影响。方法用脂质体包裹转染沉默MTA1表达的siRNA表达载体入食管癌细胞EC9706。定量RT-PCR和免疫印迹分别检测MTA1 mRNA和蛋白表达情况;划痕损伤实验和细胞体外侵袭实验分别测定迁移和侵袭的影响。结果定量RT-PCR检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低;转染沉默MTA1的siRNA表达载体组的食管癌细胞划痕未愈合,穿透Matrigel的细胞数量明显减少,与未转染组、转染空载体组和转染无关序列siRNA载体组比较差异有显著性(P<0·05)。结论RNA干扰介导的MTA1基因表达沉寂可有效降低食管癌细胞侵袭和迁移;MTA1基因可能成为肿瘤治疗上有前途的分子靶点。
- 杨松华赵国强郑红赵继敏董子明
- 关键词：MTA1RNA干扰迁移
- 针对MTA1基因siRNA载体构建和沉默效应
- 2008年
- 目的构建针对人MTA1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对食管癌细胞MTA1基因表达的抑制作用。方法设计MTA1的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人食管癌细胞EC9706,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测MTA1基因mRNA和蛋白表达的变化。结果把针对MTA1基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pRNAT-U6.2载体,经测序分析,插入片段正确;RT-PCR和Westernblotting检测显示,MTA1基因的表达水平明显降低,其中以481-499(GACCCTGCTGGCAGATAAA)为靶序列的siRNA沉默作用最强,MTA1蛋白几乎完全不表达。结论成功构建出沉默食管癌细胞MTA1基因表达的siRNA载体,为通过沉默MTA1基因的表达来减少恶性肿瘤侵袭转移提供了实验基础。
- 杨松华赵国强董子明
- 关键词：RNA干扰MTA1食管癌
- 5-脂氧合酶mRNA在食管鳞癌中的表达及与血管生成的关系被引量：12
- 2006年
- 目的探讨5脂氧合酶(5LOX)和微血管密度(MVD)在食管鳞状上皮细胞癌(ESCC)组织中的表达及相关关系,及5LOX与肿瘤浸润和转移的关系。方法用半定量RTPCR法测定35例ESCC患者癌组织(T)和相邻癌旁组织(N)中5LOXmRNA的表达,求得T/N值。同时用免疫组织化学法测定癌组织和癌旁正常组织中微血管密度(MVD)的T/N值。结果在35例ESCC患者中,33例5LOXmRNA的T/N值>1.0,占94.3%,34例MVD的T/N值>1.0,占97.1%。5LOXmRNA和MVD与食管鳞癌的肿瘤大小、浸润深度和淋巴结转移、肿瘤分化程度有关。5LOXmRNA的T/N值与MVD的T/N值呈正相关。结论5LOX与食管鳞癌血管生成和肿瘤浸润转移密切相关,其高表达可能促进肿瘤血管生成,从而促进ESCC的浸润和转移。
- 陈霞李建生赵立群薛乐勋
- 关键词：食管鳞状上皮细胞癌血管生成5-脂氧合酶微血管密度
- Bcl-XL反义寡核苷酸对裸鼠人食管癌移植瘤抑制作用的研究被引量：3
- 2006年
- 目的:探讨Bcl-XL反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠体内人食管癌移植瘤的抑制作用。方法:建立裸鼠体内人食管癌移植瘤动物模型,当移植瘤平均体积约为50mm3时,在裸鼠体内进行连续15d的Bcl-XLASODN治疗,观察人食管癌移植瘤的生长情况和组织形态学改变,应用RT-PCR和WesternBlot检测肿瘤组织中Bcl-XLmRNA和蛋白表达水平的改变以及凋亡的原位末端标记检测肿瘤的凋亡情况。结果:裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到明显抑制,治疗后,对照组、无关序列寡核苷酸(N-ODN)组和ASODN组的移植瘤体积分别为(1062.8±599.7)mm3、(853.0±327.9)mm3和(267.7±152.3)mm3,ASODN组与对照组及N-ODN组比较,具有显著性差异(P<0.05)。同时,ASODN组的Bcl-XLmRNA及蛋白表达受到抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞显著增加(P<0.05)。结论:Bcl-XLASODN可有效抑制裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长,为食管癌的基因治疗提供重要的理论依据。
- 张蕾温洪涛高冬玲陈奎生张云汉
- 关键词：裸鼠寡核苷酸类
- 人端粒酶逆转录酶原核表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。
- 张巧赵国强刘红梅宫亚欧丁兰萍薛乐勋杨胜利
- 关键词：人端粒酶逆转录酶原核表达载体重组质粒
- 骨髓间充质干细胞治疗肝硬化的动物实验研究被引量：16
- 2006年
- 目的了解肝硬化大鼠在输注骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)后肝功能生化指标、AFP的变化情况,为临床应用提供实验依据。方法将健康雌性Wistar大鼠随机分为正常组、对照组和实验组;对照组和实验组腹腔注15%的四氯化碳石蜡油溶液建立肝硬化模型。实验组经尾静脉输入用BrdU(Bromodeoxyuridine)标记的健康雄性Wistar大鼠BM-MSCs,于1/2h、1wk、2wk、3wk、4wk处死对照组和实验组大鼠,用PCR检测雄性性别决定基因SRY、免疫组化检测BrdU以了解BM-MSCs的整合情况;用全自动生化分析仪检测血清肝功能指标、放免法检测AFP。结果PCR和BrdU免疫组化初步分析对照组在不同时期均无雄性BM-MSCs,实验组在1/2h处死的5例中均阴性,在第1wk处死的5只中有2例阳性,在第2wk处死组5只中有3只阳性,在第3、4wk处死组5只中均阳性。ALT、AST随着时间推移有所改善,在第4wk时与对照组有显著性差异(28.0±3.74,84.6±36.38vs56.0±26.66,161.2±55.43,P<0.005),ALB仅在第3kw时对照组和实验组有显著性差异(30.3±2.18vs34.4±2.49,P<0.005),但与正常组无显著性差异;GLO在不同时间点均无显著性差异;AFP虽无显著性差异,但有上升的趋势。结论BM-MSCs可以植入肝脏汇管区、肝细胞索,植入细胞最早见于移植后约7d;植入的BM-MSCs能够部分替代肝细胞的功能。
- 王豪勋马军段芳龄程香普梅雪唐芙爱郑鹏远薛乐勋
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞样细胞肝硬化
- RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉默对肺癌细胞定植和转移的影响被引量：2
- 2006年
- 目的构建针对人MAGE3基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰介导的MAGE3基因表达默寂对肺癌细胞定植和转移的影响。方法设计MAGE3靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneoGFP载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR和Western印迹检测MAGE3基因mRNA和蛋白表达水平的变化。用软琼脂克隆形成实验和细胞体外侵袭实验,观察对肿瘤形成能力和侵袭力的影响。结果把针对MAGE3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSUPERneoGFP载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR和Western印迹检测显示,MAGE3基因的表达水平明显降低;转染siRNA表达载体组的肺癌细胞在软琼脂中形成克隆数和穿透Matrigel的细胞数都显著下降,与未转染和转染空载体组比较差异有显著性(P<0.05)。结论成功构建了针对MAGE3基因的siRNA载体,RNA干扰介导的MAGE3基因表达沉寂可有效降低肺癌细胞定植和转移。
- 张国俊赵国强胡军张世杰
- 关键词：基因沉默RNA干扰肺肿瘤肿瘤转移
