福建省科技计划项目(2008N2005)
- 作品数：11 被引量：25H指数：3
- 相关作者：黄翠琴罗大民徐世三张少雷倪芳更多>>
- 相关机构：龙岩学院厦门大学福建农林大学更多>>
- 发文基金：福建省科技计划项目龙岩市科技计划项目厦门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学哲学宗教更多>>
- 应用特异PCR方法诊断2例猪弓形虫病被引量：2
- 2012年
- [目的]应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病。[方法]分别以弓形虫核糖体DNA第一内部转录间隔区(ITS1)序列和529 bp重复序列为目的片段,扩增2例疑似猪弓形虫病的病料肺门淋巴结DNA,对疑似猪弓形虫病的病料进行PCR诊断。[结果]2对引物均能分别扩增出2例肺门淋巴结中弓形虫DNA的特异条带。[结论]基于2种扩增片段的PCR方法均具有较高的特异性,是诊断猪弓形虫病的一种快速检测方法。
- 黄翠琴陈永锋王寿昆郑新添李海丽
- 关键词：弓形虫病PCR
- 广州管圆线虫的生物信息学分析被引量：1
- 2009年
- 从GenBank下载1277条广州管圆线虫的表达序列标签(EST),用BlastX比对分析,并用SignalPV3.0预测潜在的抗原或过敏原相关蛋白N端是否具有分泌信号肽或信号锚定肽。结果显示,得分值>100有614条,其中14条与广州管圆线虫一致,540条与其他物种的相关蛋白相匹配,60条与数据库中序列无同源性。614条序列可分为10类,抗原或过敏原相关蛋白有80条,编码22种蛋白,其中12种具有分泌信号肽,3种具有信号锚定肽。
- 徐世三倪芳罗大民
- 关键词：广州管圆线虫表达序列标签
- 金线莲提取物体外抑菌及抑制鸡新城疫病毒在CEF上的增殖被引量：3
- 2012年
- 采用滤纸片扩散法和二倍稀释法测定金线莲不同方法提取物对6种供试菌的体外抑菌效果,并利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定金线莲水提取物对NDV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖的影响.结果表明:3种提取方法所获得的金线莲提取物均对链球菌有较强抑制作用,表现为高敏;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌表现为中敏;对酵母菌和普通变形杆菌的抑制作用不明显,表现为低敏.最小抑菌浓度均不高于12.5 g.L-1.药物与病毒混合组对NDV的抑制率显著高于先病毒后药物组和先药物后病毒组(P<0.05).药物浓度与NDV抑制率存在明显的正相关(P<0.05).在先药物后病毒组和药物与病毒混合组中,15.62-31.25 g.L-1金线莲水提取物具有显著的抗NDV效果;1.95-3.90 g.L-1金线莲水提取物抗NDV效果不明显.
- 何玉琴林标声邱龙新戴爱玲杨小燕
- 关键词：金线莲体外抑菌
- 猪蛔虫感染相关基因07E12的RNAi研究
- 2010年
- 为寻找猪蛔虫免疫防治的"关键"靶分子,从已构建的猪蛔虫感染期幼虫消减cDNA文库中筛选了一感染相关基因(EST编号为07E12),采用RNA干扰(RNAi)技术对该基因的功能进行了初步探讨。针对其EST序列设计了1对特异引物,体外转录合成双链RNA(dsRNA)后,通过浸泡的方式将dsRNA导入猪蛔虫感染期幼虫中,在浸泡后的4个不同时间点采用RT-PCR方法检测虫体浸泡后靶基因被干扰的效果。试验结果表明,在浸泡后24、48、72 h都检测到了相对应基因表达的存在,但表达量随时间依次减少,96 h之后试验组没有检测到07E12的相应RNA的表达,提示dsRNA进入虫体并逐渐发挥了干扰作用,说明该基因在猪蛔虫幼虫感染宿主的过程中可能扮演重要角色。
- 黄翠琴陈宏惠黄其春陈星星郑新添
- 关键词：猪蛔虫RNA干扰
- 羊大片吸虫龙岩分离株ITS基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2012年
- 应用PCR方法扩增龙岩地区羊片形吸虫分离株ITS序列,经克隆、测序后获得ITS全长序列944bp,其中ITS-1为421bp,ITS-2为361bp;通过在肝片吸虫和大片吸虫ITS种间鉴别位点上的序列分析表明,从龙岩地区羊体内分离的片形吸虫虫种属大片吸虫(命名为FgLY)。与国内外大片吸虫的进化分析表明,FgLY与中国云南的2个分离株处在一个小分支,亲缘关系最近。该结果为羊大片吸虫的进一步生物学研究和片形吸虫病的预防奠定了基础。
- 谢宝明陈永锋陈仁锋黄翠琴
- 关键词：大片吸虫ITSPCR
- 荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体被引量：12
- 2010年
- 目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对。依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上。重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.80%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好。灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1×102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍。结论初步建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法 。
- 张少雷王何兰刘江倪芳徐世三罗大民
- 关键词：荧光定量PCR
- 简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达被引量：2
- 2010年
- 目的克隆简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因(AsCP)全长,研究其表达特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫表达序列标签L-样半胱氨酸蛋白酶基因的部分信息,设计特异引物,用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端部分,获得基因全长序列。根据基因全长序列设计引物,以简单异尖线虫总RNA为模板,RT-PCR扩增AsCP基因编码序列,产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,克隆至表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达效果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果3′端扩增片段大小为1211bp,拼接完整后基因全长1462bp,编码411个氨基酸,与秀丽隐杆线虫的L-半胱氨酸蛋白酶相似性达36.4%;重组载体pET32a(+)-AsCP经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后有一条约1150bp的条带,测序结果显示重组载体构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白相对分子质量约为Mr60000(含6个组氨酸的标签),与目的蛋白相符。用不同浓度的IPTG诱导对表达量的影响很小,1mmol/LIPTG诱导2h后表达量达到最高水平。结论成功克隆并表达了L-样半胱氨酸蛋白酶。
- 徐世三倪芳张少雷刘江罗大民
- 关键词：简单异尖线虫克隆原核表达
- 猪蛔虫感染相关基因28A02的表达谱及其全长cDNA的克隆和分析
- 2010年
- 为鉴定猪蛔虫与感染相关的差异表达基因,本实验由猪蛔虫感染期幼虫差异消减cDNA文库中挑选EST序列(28A02)为研究对象,首先,经半定量RT-PCR方法分析该基因在各期虫体的表达情况。结果显示:该基因在猪蛔虫感染期幼虫和肺三期幼虫中均有表达,并且在感染期幼虫表达丰度最高,在其它各期虫体包括雌虫、雄虫、虫卵和第四期幼虫均未检测出该基因的表达。其次,以已知的EST序列为模板,采用RACE技术获得了864 bp的全长cDNA序列,包含一个完整的长约450 bp的开发阅读框。另外,经生物信息学分析显示,该基因编码的氨基酸序列与众多物种的ATP合酶有43%～47%的相似性,推测该基因可能参与编码猪蛔虫的线粒体ATP合酶,这为进一步研究其功能奠定了基础。
- 黄翠琴廖生钱王寿昆黄其春郑新添朱兴全
- 关键词：猪蛔虫半定量RT-PCR全长CDNA生物信息学分析
- 复方中草药“强普素”对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:本试验旨在研究复方中草药"强普素"对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响。方法:选用144头(28±1)日龄平均质量为(8.30±0.14)kg的杜×长×大断奶仔猪,按照单因素完全随机化原则分为4个处理组,每组设3个重复,每个重复12头。试验设1个空白对照组和3个复方中草药"强普素"添加组,添加量分别为0.05%、0.1%、0.2%。结果:与空白对照组相比,日粮中添加0.1%和0.2%复方中草药"强普素"组的平均日增重显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05);IgG及补体C3、C4的含量均显著高于空白对照组(P<0.05)。而日粮中添加0.05%复方中草药"强普素"组的平均日增重、料重比、IgG、补体C3及C4的含量与对照组相比差异不显著(P>0.05)。结论:复方中草药"强普素"具有提高断奶仔猪生长性能和免疫功能的作用,以0.1%添加量效果最佳。
- 何玉琴林标声邱龙新黄翠琴李晓华栾必荣杨小燕
- 关键词：复方中草药断奶仔猪免疫功能
- 台湾海峡异尖线虫病病原线虫幼虫的rDNA序列分析被引量：1
- 2009年
- 目的分析台湾海峡异尖线虫病潜在病原线虫的rDNA序列,为建立病原分子生物学鉴别提供依据。方法剖检台湾海峡常见鱼类的寄生线虫幼虫,镜检分类。提取虫体DNA、用通用引物对rDNA进行PCR扩增、克隆、双向测序及BLAST比对。结果获得6条来自6种线虫幼虫的rDNA序列,其中的3种在GenBank数据库中没有发现匹配的序列;证实在台湾海峡分布的灰海鳗对盲囊线虫成虫和疑似其第三期幼虫实属同种;构建了基于ITS-2的序列间内部相似性程度关系树。结论异尖线虫病原幼虫所具有的分子生物学鉴别信息位点主要集中在ITS-2间隔区。
- 张少雷徐世三罗大民
- 关键词：RDNA
