浙江省教育厅科研计划项目(Y200909740)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：浙江理工大学浙江省畜牧技术服务中心更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 二步超离心法分离纯化人血浆Apo B100及兔抗人Apo B100抗血清制备
- 2012年
- 建立一种从人血浆中分离纯化Apo B100的方法,并制备兔抗人Apo B100抗血清。将血浆用溴化钾调成1.019g/mL的密度液进行差分超速离心,将分离产物在溴化钾不连续密度梯度液(1.006～1.210g/mL)中进行等密度超速离心。用G-100葡聚糖凝胶柱纯化Apo B100,以ELISA双抗体夹心法检测浓度,真空冷冻干燥。取冻干粉与弗氏佐剂混合后免疫新西兰白兔,制备兔抗人Apo B100抗血清,利用双向免疫扩散检测抗原纯度与抗血清效价。结果是一步超离法分离的Apo B100最高浓度为0.91μg/mL;二步超离法分离的Apo B100最高浓度为1.40μg/mL,对应的抗血清效价为1∶64。结果表明二步超离心法提高了人血浆Apo B100的分离效果。
- 张海花王婕高慧付彩云童富淡
- 关键词：APOB100超速离心ELISA
- 家蚕膜蛋白基因(BmTmC27)的序列分析及组织特异性和原核表达
- 2012年
- 从家蚕蛹cDNA文库中筛选获得一条家蚕膜蛋白基因序列,通过编码氨基酸序列的同源性比对表明其可能是家蚕的未知功能序列,命名为BmTmC27(GenBank登录号:DY231073.1)。生物信息学分析结果表明该基因全长833 bp,由558 bp的开放阅读框、102 bp的5'端非翻译区和173 bp的3'端非翻译区组成,编码蛋白由185个氨基酸组成且含有4个跨膜区,预测蛋白分子质量为20.94 kD,等电点为7.38。将该基因片段与BmNPV的polh基因连接后克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核融合表达载体pGEX-4T-1-polh-BmTmC27,经IPTG诱导、SDS-PAGE分析表明目的蛋白以包涵体形式在E.coli BL21(DE3)中表达。利用多角体蛋白可溶于碱性环境的性质,采用调节pH值的方法纯化融合表达的重组蛋白GST-Polh-BmT-mC27,然后经TEV酶消化获得BmTmC27蛋白。荧光定量PCR分析BmTmC27在家蚕5龄幼虫不同组织中的表达存在明显差异,其中在脂肪体、中肠和气管中的转录水平较高。利用GST沉降技术研究了BmTmC27的互作蛋白,与对照组相比,发现了4条特异性互作蛋白条带。研究结果有助于进一步探究BmTmC27的生物学功能,也为膜蛋白的表达和纯化提供了一种新方法。
- 于威谢磊陈剑清舒特俊聂作明全滟平李司张耀洲
- 关键词：转录原核表达
- CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件优化及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的探索融合基因CTB-Aβ42在大肠杆菌中表达的最适条件,并纯化得融合蛋白。方法设置不同的诱导温度、诱导时间、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度,在大肠杆菌中表达融合基因CTB-Aβ42,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物,GST亲和色谱柱纯化目的蛋白,Western blot鉴定目的蛋白免疫原性。结果 SDS-PAGE结果显示,GST-CTB-Aβ42融合蛋白分子质量约为45 kD,与预期结果一致;Western blot结果表明,纯化得到的目的蛋白具有免疫原性。在诱导条件为30℃,0.1 mmol/L IPTG诱导2 h表达的可溶性蛋白所占比例最高;在37℃,0.1mmol/L IPTG诱导4 h表达的融合蛋白总量最高,小部分可溶性表达,大部分以包涵体的形式存在。结论本实验对CTB-Aβ42融合蛋白的原核表达条件进行了优化,经GST亲和色谱柱纯化获得具有免疫原性的融合蛋白。
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- 关键词：Β-淀粉样蛋白可溶性表达胞内表达
