国家自然科学基金(81272040)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 体外培养包埋透明质酸/壳聚糖/质粒DNA纳米粒的壳聚糖支架负载软骨细胞被引量：2
- 2014年
- 目的 观察包埋透明质酸（HA）/壳聚糖（CS）/质粒DNA （pDNA）纳米粒的壳聚糖支架对软骨细胞生物学性状的影响及基因转染能力,探讨其作为基因活化软骨组织工程支架的可行性.方法 构建包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架,负载兔关节软骨细胞体外培养,1～2周后通过扫描电镜、组织学、免疫组织化学、倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜检测支架对软骨细胞表型及功能的影响,以及基因转染的能力.结果 支架孔径为100～300 μm,孔孔隙率为（86.0±1.2）％;软骨细胞在包埋HA/CS/pDNA纳米粒的支架中贴附良好,维持表型稳定,1～2周时实验组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原等软骨细胞外基质较对照组明显增多,1周时测得支架中的HA/CS/pDNA纳米粒介导基因转染软骨细胞并表达绿色荧光蛋白.结论 包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架细胞相容性良好,能转染培养的软骨细胞表达绿色荧光蛋白.
- 卢华定吕璐璐赵慧清戴驭虎
- 关键词：壳聚糖软骨细胞
- 壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响
- 2014年
- [目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P<0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。
- 连礼熠卢华定陈明伟
- 关键词：壳聚糖酶壳聚糖非病毒基因载体基因转染软骨细胞
- 新型透明质酸改性的CS-g-PEI/pDNA的构建及介导转染软骨细胞的体外研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨新型透明质酸改性的聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA(CS-g-PEI/pDNA)纳米粒作为治疗骨关节炎(OA)的可行性。方法通过复凝聚法制备成CP/pDNA纳米粒,然后通过巯基的原位交联与巯基化的透明质酸(HASH)形成交联网络,从而合成HA-CP/pDNA纳米粒;透射电镜观察纳米粒形貌,马尔文粒度分析仪分析其不同构成比(HA-SH∶CP)时的粒径、表面电位等;凝胶电泳阻滞实验检测CP/pDNA的结合力;CCK-8细胞毒性实验检测该基因载体的细胞毒性;以HA-CP/pDNA纳米粒、裸pDNA、CS/pDNA、CP/pDNA纳米粒、LipofectamineTM2000转染软骨细胞,荧光显微镜、流式细胞仪检测基因转染效率。结果 (1)HA-CP/pDNA纳米粒呈较均一的球形,并随HA-SH∶CP质量比的增加,粒径先减小后增大,表面电位电荷逐渐降低。(2)HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞毒性远低于LipofectamineTM2000(P<0.05)。(3)HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞转染率较CP/pDNA、CS/pDNA纳米粒大大提高(P<0.05)。(4)大量游离HA导致HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞的转染效率下降。结论 HA-CP/pDNA纳米粒具有更强的DNA保护能力,对软骨细胞毒性小,转染效率高,并且对软骨细胞具有一定的靶向性。
- 陈明伟范彬彬卢华定
- 关键词：透明质酸软骨细胞
- 壳聚糖-聚乙烯亚胺/质粒DNA纳米粒介导体外基因转染关节滑膜细胞被引量：1
- 2013年
- 目的 以聚乙烯亚胺（PEI）共价连接壳聚糖（CS）骨架上构建CS-g-PEI（CP）/质粒DNA（pDNA）纳米粒,探讨其在体外对关节滑膜细胞的转染能力.方法 复凝聚法制作CP/pDNA纳米粒,扫描电镜检测纳米粒形态,Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察CP和pDNA的结合力；体外转染兔关节滑膜细胞,48 h后流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率；激光共聚焦显微镜检测1 ～2h时DNA的入核情况.结果 CP/pDNA纳米粒略呈球形,粒径为（142.0±20.3） nm,表面Zeta电位为（25.99 ±8.48） mV,可有效保护pDNA免受DNase I的降解.体外转染实验证明CP/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,转染率达（22.25±1.89）％,比裸pDNA及CS/pDNA纳米粒组有更高的转染效率（P＜0.05）.结论 CP/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染系统,对关节滑膜细胞具有良好的基因转染能力.
- 卢华定戴驭虎赵慧清吕璐璐
- 关键词：壳聚糖聚乙烯亚胺基因载体滑膜细胞
