国家自然科学基金(30170361)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
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- 人lrp-cDNA全长编码区的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2006年
- 目的:扩增人lrp-cDNA全长编码区、并在大肠杆菌中表达和鉴定.方法:提取脂多糖刺激后HEK293细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出全长人lrp序列,将其克隆入原核表达载体pcTAT后转化大肠杆菌诱导表达,做SDS-PAGE分析;并用免疫印迹法鉴定6His-TAT-LRG融合蛋白表达.结果:测序结果表明,获得了全长人lrp-cDNA全长编码区,其序列与GenBank已经公布的不完全一致;SDS-PAGE分析表明,6His-TAT-Lrp融合蛋白在大肠杆菌中成功表达,表达量约占菌体总蛋白的17%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生阳性反应.结论:得到人lrp-cDNA全长编码区序列,并成功表达,为人lrp功能的深入研究奠定了基础.
- 宋庆贺柴玉波陈苏民陈南春黄勇代忠明
- 关键词：脂多糖应答基因逆转录聚合酶链反应
- 人lrg在大肠杆菌中的表达及表达产物的免疫血清制备和鉴定被引量：6
- 2004年
- 目的 :在大肠杆菌表达人lrg ,制备鉴定人Lrg免疫血清 .方法 :构建pcTAT lrg重组表达质粒 ,并在大肠杆菌中诱导表达相应的融合蛋白 ;对表达的融合蛋白采用镍柱和SDS PAGE纯化 ;以纯化蛋白作为免疫抗原 ,对新西兰白兔实施多次免疫 (间隔时间分别为 1mo,3wk ,2wk) .结果 :获得兔抗人Lrg免疫血清 .经过ELISA和WesternBlot检测 ,效价在 1∶1 0 0 0以上 .真核细胞实验表明 ,6His TAT Lrg蛋白具有良好的穿透性 ,可以在 30min内从培养液进入细胞质 ;免疫组化实验表明Lrg是一种胞质蛋白 ;兔抗人Lrg免疫血清可有效应用于细胞和组织的检测 .结论 :制备得到兔抗人Lrg免疫血清 。
- 杜可军柴玉波常文辉侯理朝张晓楠陈南春林树新陈苏民
- 关键词：免疫血清
- 人lrg真核表达载体的构建和初步分析被引量：5
- 2004年
- 目的 :在真核细胞中表达人lrg基因。 方法 :构建野生型人lrg的真核表达载体 ,体外转染肝癌细胞系HepG2 ,并进行稳定筛选。用WesternBlot、SABC -FITC进行人lrg基因表达的鉴定。 结果 :成功构建了人lrg的真核表达载体 pcDNA3.1( + ) /hlrg ,WesternBlot和SABC -FITC等实验表明该基因在HepG2中进行了表达。结论 :在HepG2中稳定表达了 pcDNA3.1( + ) /hlrg ,为深入探讨人lrg基因的功能奠定了基础。
- 杜可军柴玉波常文辉段小红侯理朝陈南春林树新陈苏民
- 关键词：真核表达载体构建HEPG2细胞
