国家自然科学基金(30700970)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：黄学锋朱洪波何超劳伟峰王晓炜更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院空军杭州航空医学鉴定训练中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132逆转人结肠癌细胞获得性TRAIL耐药的作用及其可能的机制。方法:在MG-132和TRAIL蛋白联合处理获得性TRAIL耐药的人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R后,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Westernblotting检测细胞中各种凋亡相关蛋白的表达和JNK激酶的磷酸化水平。结果:MG-132联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降(P<0.01),而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01)。Westernblotting检测显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bid和PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放;进一步的Westernblotting检测显示,死亡受体DR5和凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括DR4、Bax、Bak、Bcl-XL、XIAP和Survivin等则无明显改变;检测结果还显示,MG-132能诱导JNK激酶发生磷酸化,使用JNK激酶抑制剂SP600125能够阻断MG-132诱导的DR5表达,但不影响Bik的表达,并且不能减弱MG-132和TRAIL蛋白联合处理对DLD1-TRAIL/R细胞的致凋亡效应(P<0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂MG-132能逆转人结肠癌细胞DLD1-TRAIL/R的获得性TRAIL耐药,其机制可能与Bik蛋白上调后启动线粒体凋亡途径有关,与JNK通路激活无关。
- 胡静姿朱洪波何超劳伟峰黄学锋
- 关键词：蛋白酶体抑制剂MG-132TRAIL耐药
- Bcl-XL小发夹RNA腺病毒载体的构建及其抗肿瘤作用被引量：1
- 2012年
- 目的:构建表达Bcl-XL小发夹RNA的腺病毒载体(Ad/Bcl-XL shRNA)并探讨其抗肿瘤作用。方法:构建、纯化重组腺病毒Ad/Bcl-XL shRNA。通过Western blotting、MTT分析验证它对Bcl-XL的下调及其杀伤肿瘤细胞的作用,并检测其处理后细胞凋亡信号的活化情况;在裸鼠皮下荷瘤模型中验证其体内抗肿瘤作用。结果:成功构建和纯化了Ad/Bcl-XLshRNA,它能显著下调结肠癌DLD1细胞Bcl-XL蛋白的表达;与Ad/GFP、PBS组相比,Ad/Bcl-XL shRNA组明显抑制人结肠癌细胞DLD1的生长[1 000 MOI时(60.6±4.8)%vs(99.0±2.6)%、100%;2 000 MOI时,(37.3±6.9)%vs(99.0±2.1)%、100%,P<0.01],但对正常人成纤维细胞无明显抑制作用(P>0.05);Ad/Bcl-XL shRNA组能有效诱导结肠癌细胞中凋亡信号casepase-9、casepase-3、PARP的活化。在裸鼠荷瘤模型中,与Ad/GFP、PBS组相比,Ad/Bcl-XL shRNA组显著抑制DLD1来源皮下肿瘤的生长[第29天时,(250.1±185.7)vs(880.0±286.1)、(911.0±389.1)mm3;P<0.01]。结论:Ad/Bcl-XLshRNA能显著抑制结肠癌细胞在体内外的生长,其在结肠癌治疗中具有潜在的应用价值。
- 胡静姿周玮王晓炜戴胜
- 关键词：重组腺病毒BCL-XLRNA干扰小发夹RNA
- 蛋白酶体抑制剂硼替佐米逆转结肠癌获得性TRAIL耐药的研究
- 2010年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在逆转人结肠癌细胞获得性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)耐药中的作用及机制。方法在硼替佐米和TRAIL蛋白联合处理DLD1-TRAIL/R细胞后,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率,并通过免疫印迹法检测各种凋亡相关蛋白的表达情况。通过siRNA转染明确目的基因在硼替佐米逆转结肠癌细胞获得性TRAIL耐药中的作用。结果硼替佐米联合TRAIL蛋白处理DLD1-TRAIL/R细胞后,其细胞存活率明显下降,而细胞凋亡率则明显增加(P<0.01)。Western免疫印迹结果显示,联合处理后DLD1-TRAIL/R细胞中各种凋亡信号分子包括caspase-8,caspase-9,caspase-3,Bid,PARP蛋白均明显活化,线粒体中细胞色素C和Smac蛋白大量释放。进一步的Western免疫印迹法结果显示,凋亡诱导蛋白Bik的表达水平明显增高,而其他凋亡信号分子包括其他Bcl-2家族成员以及XIAP和Survivin等则无明显改变。通过转染siRNA阻断Bik蛋白表达后,硼替佐米介导的TRAIL增敏作用被部分抑制(P<0.05)。结论蛋白酶体抑制剂硼替佐米可以逆转人结肠癌细胞DLD1对TRAIL的获得性耐药,其机制可能与Bik蛋白蓄积有关。
- 胡静姿朱洪波何超陈琳琳黄学锋
- 关键词：蛋白酶体抑制剂硼替佐米肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐药
